3050例恶性肿瘤DNA倍体分析
作者:左连富 刘洪祥 郭建文 齐风英
单位:(河北省肿瘤研究所,石家庄,050011)左连富 刘洪祥 郭建文;(河北医学院法医教研室)齐风英
关键词:
中华医学杂志910625
DNA倍体对判断恶性肿瘤的恶性程度、分化、分级具有重要的意义。我们在3年间应用流式细胞术对3050例石蜡包埋恶性肿瘤DNA倍体进行了分析,并对1117例肿瘤的组织学类型、分级与DNA倍体的关系进行了探讨,现将结果报道如下。
一、材料与方法
1、材料:采取存档的石蜡包埋肿瘤标本,包括肝、肾、肺、胃等24种恶性肿瘤3050例,在每例石蜡包埋组织块上切取40~50μm厚的组织3~5片,制备流式分析样品。
, 百拇医药
2、单细胞悬液样品的制备方法和流式细胞仪的工作条件参照文献[1,2]。
3、DNA倍体的判断标准:依据细胞DNA含量,以DNA指数(DI)表示,DI=肿瘤细胞G0/1峰均道值/正常细胞G0/1峰均道值。并以各类肿瘤同源的正常细胞DNA含量作为二倍体标准(DI=1.0±2CV):(1)二倍体肿瘤:DI=0.9~1.1;(2)四倍体肿瘤:DI=1.9~2.1;(3)多倍体肿瘤:DI>2.1;(4)余者均为非整倍体肿瘤。但近年来文献[3]报道有很多肿瘤DNA含量接近于二倍体肿瘤,其恶性度和预后与二倍体肿瘤相似。因而,在DNA非整倍体肿瘤中分出近二倍体肿瘤,DI=0.8~1.2(其中除外二倍体肿瘤DI值)。
二、结果
1、DI值分析结果:3050例恶性肿瘤的DI值范围在0.6~2.6。各DI值的病例数见表1,大部分肿瘤的DI值集中分布于1.10~1.85。
, 百拇医药
表1 3050例恶性肿瘤DI值病例分布 DI值
例数
DI值
例数
DI值
例数
DI值
例数
0.60
21
1.25
214
1.70
, 百拇医药
81
2.15
11
0.80
39
1.30
204
1.75
72
2.20
8
0.90
57
, http://www.100md.com
1.35
227
1.80
58
2.25
4
0.95
82
1.40
219
1.85
40
2.30
, 百拇医药
4
1.00
127
1.45
191
1.90
22
2.35
4
1.05
134
1.50
203
, http://www.100md.com
1.95
20
2.40
1
1.10
136
1.55
168
2.00
26
2.45
1
1.15
, http://www.100md.com
189
1.60
149
2.05
15
2.50
1
1.20
202
1.65
108
2.10
9
, http://www.100md.com
2.60
3
2、DNA倍体分析结果:依据DI值,按照DNA倍体的判断标准,3050例恶性肿瘤中,二倍体肿瘤536例(17.6%),非整倍体肿瘤2514例(包括149例四倍体或多倍体和430例近二倍体肿瘤)。各类肿瘤的DNA非整倍体出现率不同,范围从47.7%~93.6%。最低者为皮肤基底细胞癌(47.4%),出现非整倍体最高者是胃癌(93.6%)。出现多倍体或双DNA干系的肿瘤是骨肉瘤、肝癌为多见,分别为30%和17.4%。
3、DNA组方图常见类型:在3050例肿瘤DNA组方图中,常见以下类型:(1)以二倍体G0/1峰为主伴有较低S+G2M其细胞峰或伴有高S+G2M其细胞峰。(2)一个二倍体细胞峰和一个非整倍体细胞为主峰的组方图。(3)双DNA干系的非整倍体峰。(4)一个非整倍体和一个多倍体峰。(5)四倍体为主峰的组方图。(6)DNA多干系非整倍体峰。(7)左肩峰或右肩峰的非整倍体组方图。(8)一个二倍体峰和一个近二倍体细胞峰。
, 百拇医药
4、DNA倍体与组织学分级的关系:对1117例恶性肿瘤(胃癌341例、乳癌122例、大肠癌95例、食管癌219例、膀胱癌214例、口腔癌126例)组织学类型、分级进行了观察,与DNA倍体进行了相关分析,结果发现DNA倍体与组织学类型无相关性,但与组织学分级有明显相关性(表2)。随着肿瘤组织分级的增高,DI值、DNA非整倍体的出现百分率也随之增高,各分级之间的DI值经统计学处理(t检验),差异均有非常显著意义(P<0.01)。表2 1117例肿瘤组织学分级与DNA倍体 组织分级
例数
DI值()
二倍体例数(%)
非整倍体例数(%)
I
, http://www.100md.com
172
1.24±0.21
48(27.9)
124(72.1)
II
524
1.38±0.24
87(16.6)
437(83.4)
III
421
1.51±0.37
, http://www.100md.com
29(6.9)
392(93.1)
三、讨论
3050例肿瘤DNA倍体的分析结果表明,82.4%的恶性肿瘤DNA含量出现异常,与文献[2]报道相似。因此有作者提出,DNA非整倍体可作为恶性肿瘤的一个标志[4]。
恶性肿瘤DNA组方图的类型以单一DNA干系出现多见,说明肿瘤多以单一细胞克隆发生。出现2个或多个DNA干系的肿瘤154例(占 5.1%),这可能与某些肿瘤的细胞类型复杂有关,是否肿瘤的发生起源是来自2个以上的细胞克隆,有待进一步研究。
本资料也证明了DI值与组织分级有很好的相关性,而且随分级增高,DNA非整倍体出现率亦增高。有作者[5]提出流式细胞术DNA分级指数,判断肿瘤的生物学行为和预后,按本组DI值与组织学分级的关系研究,可将DNA分级指数分为3级,DI<1.25、DI>1.25和DI>1.50,应用DNA定量分级指数可以更加客观的反应肿瘤的生物学行为。
, 百拇医药
参考文献
1 左连富等,流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量的样品制血方法,中华病理学杂志1988;17:232。
2 Barlogie B, et al. Flow cytometry in clinical can cer research Cancer Res 1983;43:3982.
3 Hedley DWW, et al.Flow cytometry using paraffin embedded tissue five year on Cytometry 1989;10229.
4 Friedlander ML, et al. Clinical and biological significance of aneuploidy in human tumors J Clin Pathol 1984;37:961.
5 Benson MC, et al. The application of flow cytometry to the assessment of tumor cell heterogeneity and the grading of human prostatic cancer preliminary results J Urology 1986;135:1194., 百拇医药
单位:(河北省肿瘤研究所,石家庄,050011)左连富 刘洪祥 郭建文;(河北医学院法医教研室)齐风英
关键词:
中华医学杂志910625
DNA倍体对判断恶性肿瘤的恶性程度、分化、分级具有重要的意义。我们在3年间应用流式细胞术对3050例石蜡包埋恶性肿瘤DNA倍体进行了分析,并对1117例肿瘤的组织学类型、分级与DNA倍体的关系进行了探讨,现将结果报道如下。
一、材料与方法
1、材料:采取存档的石蜡包埋肿瘤标本,包括肝、肾、肺、胃等24种恶性肿瘤3050例,在每例石蜡包埋组织块上切取40~50μm厚的组织3~5片,制备流式分析样品。
, 百拇医药
2、单细胞悬液样品的制备方法和流式细胞仪的工作条件参照文献[1,2]。
3、DNA倍体的判断标准:依据细胞DNA含量,以DNA指数(DI)表示,DI=肿瘤细胞G0/1峰均道值/正常细胞G0/1峰均道值。并以各类肿瘤同源的正常细胞DNA含量作为二倍体标准(DI=1.0±2CV):(1)二倍体肿瘤:DI=0.9~1.1;(2)四倍体肿瘤:DI=1.9~2.1;(3)多倍体肿瘤:DI>2.1;(4)余者均为非整倍体肿瘤。但近年来文献[3]报道有很多肿瘤DNA含量接近于二倍体肿瘤,其恶性度和预后与二倍体肿瘤相似。因而,在DNA非整倍体肿瘤中分出近二倍体肿瘤,DI=0.8~1.2(其中除外二倍体肿瘤DI值)。
二、结果
1、DI值分析结果:3050例恶性肿瘤的DI值范围在0.6~2.6。各DI值的病例数见表1,大部分肿瘤的DI值集中分布于1.10~1.85。
, 百拇医药
表1 3050例恶性肿瘤DI值病例分布 DI值
例数
DI值
例数
DI值
例数
DI值
例数
0.60
21
1.25
214
1.70
, 百拇医药
81
2.15
11
0.80
39
1.30
204
1.75
72
2.20
8
0.90
57
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1.35
227
1.80
58
2.25
4
0.95
82
1.40
219
1.85
40
2.30
, 百拇医药
4
1.00
127
1.45
191
1.90
22
2.35
4
1.05
134
1.50
203
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1.95
20
2.40
1
1.10
136
1.55
168
2.00
26
2.45
1
1.15
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189
1.60
149
2.05
15
2.50
1
1.20
202
1.65
108
2.10
9
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2.60
3
2、DNA倍体分析结果:依据DI值,按照DNA倍体的判断标准,3050例恶性肿瘤中,二倍体肿瘤536例(17.6%),非整倍体肿瘤2514例(包括149例四倍体或多倍体和430例近二倍体肿瘤)。各类肿瘤的DNA非整倍体出现率不同,范围从47.7%~93.6%。最低者为皮肤基底细胞癌(47.4%),出现非整倍体最高者是胃癌(93.6%)。出现多倍体或双DNA干系的肿瘤是骨肉瘤、肝癌为多见,分别为30%和17.4%。
3、DNA组方图常见类型:在3050例肿瘤DNA组方图中,常见以下类型:(1)以二倍体G0/1峰为主伴有较低S+G2M其细胞峰或伴有高S+G2M其细胞峰。(2)一个二倍体细胞峰和一个非整倍体细胞为主峰的组方图。(3)双DNA干系的非整倍体峰。(4)一个非整倍体和一个多倍体峰。(5)四倍体为主峰的组方图。(6)DNA多干系非整倍体峰。(7)左肩峰或右肩峰的非整倍体组方图。(8)一个二倍体峰和一个近二倍体细胞峰。
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4、DNA倍体与组织学分级的关系:对1117例恶性肿瘤(胃癌341例、乳癌122例、大肠癌95例、食管癌219例、膀胱癌214例、口腔癌126例)组织学类型、分级进行了观察,与DNA倍体进行了相关分析,结果发现DNA倍体与组织学类型无相关性,但与组织学分级有明显相关性(表2)。随着肿瘤组织分级的增高,DI值、DNA非整倍体的出现百分率也随之增高,各分级之间的DI值经统计学处理(t检验),差异均有非常显著意义(P<0.01)。表2 1117例肿瘤组织学分级与DNA倍体 组织分级
例数
DI值()
二倍体例数(%)
非整倍体例数(%)
I
, http://www.100md.com
172
1.24±0.21
48(27.9)
124(72.1)
II
524
1.38±0.24
87(16.6)
437(83.4)
III
421
1.51±0.37
, http://www.100md.com
29(6.9)
392(93.1)
三、讨论
3050例肿瘤DNA倍体的分析结果表明,82.4%的恶性肿瘤DNA含量出现异常,与文献[2]报道相似。因此有作者提出,DNA非整倍体可作为恶性肿瘤的一个标志[4]。
恶性肿瘤DNA组方图的类型以单一DNA干系出现多见,说明肿瘤多以单一细胞克隆发生。出现2个或多个DNA干系的肿瘤154例(占 5.1%),这可能与某些肿瘤的细胞类型复杂有关,是否肿瘤的发生起源是来自2个以上的细胞克隆,有待进一步研究。
本资料也证明了DI值与组织分级有很好的相关性,而且随分级增高,DNA非整倍体出现率亦增高。有作者[5]提出流式细胞术DNA分级指数,判断肿瘤的生物学行为和预后,按本组DI值与组织学分级的关系研究,可将DNA分级指数分为3级,DI<1.25、DI>1.25和DI>1.50,应用DNA定量分级指数可以更加客观的反应肿瘤的生物学行为。
, 百拇医药
参考文献
1 左连富等,流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量的样品制血方法,中华病理学杂志1988;17:232。
2 Barlogie B, et al. Flow cytometry in clinical can cer research Cancer Res 1983;43:3982.
3 Hedley DWW, et al.Flow cytometry using paraffin embedded tissue five year on Cytometry 1989;10229.
4 Friedlander ML, et al. Clinical and biological significance of aneuploidy in human tumors J Clin Pathol 1984;37:961.
5 Benson MC, et al. The application of flow cytometry to the assessment of tumor cell heterogeneity and the grading of human prostatic cancer preliminary results J Urology 1986;135:1194., 百拇医药