实验性动脉粥样硬化中脂质过氧化物在脂蛋白中的分布变化
作者：陶津 陈瑗 周玫
单位：(第一军医大学脂质过氧化损伤研究组，广州，510515)
关键词：
中华医学杂志910619
高胆固醇血症时机体内抗氧化能力及高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)都发生了变化。为了进一步研究这些变化的内在联系，我们对实验性动脉粥样硬化(CAS)的家兔进行了动态观察。
一、材料和方法
1、动物：健康雄性纯种新西兰白兔20只，体重2～2.5kg，兔龄4～6个月。实验前使用普通饲料进行适应性饲养30天。随机分成两组，每组10只。实验组动物喂以高脂高胆固醇饲料，即普通饲料内加入1%胆固醇和4%猪油。对照组仅喂普通饲料。单笼饲养，自由摄入食水，两组平行实验。
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2、观察指标：在实验过程中，分别于第0、15、30、45及60天经耳中央动脉采血。EDTA(1.0mmol/L)抗凝。分别测定血浆总胆固醇(T-C)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，血浆总LPO含量(T-LPO)，高密度脂蛋白LPO(HDL-LPO)和低密度脂蛋白LPO(LDL-LPO)含量，血浆总维生素E(T-VE)，高密度脂蛋白VE(HDL-VE)和低密度脂蛋白VE(LDL-VE)含量，血浆硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHPx)含量。在相同时间用硅化注射器同样方法采血，肝素消炎痛混合液抗凝，分离血浆，测定TXB2含量。
第60天经耳中央动脉采血后，颈动脉放血处死动物，观察主动脉内膜变化，切片镜检及测定主动脉组织胆固醇、LDL-C、LPO含量。
3、方法：LDL分离：按Heinrich等[1]介绍的方法：HDL分离：按磷钨酸钠氯化镁法[2]；血浆LPO测定：按Yagi等[3]方法；组织LPO含量测定：按Ohkawa等[4]方法；SeGshPx活性测定：按Poglia等[4]方法；VE测定：按Taylor等[6]方法。TXB2测定用放射免疫试剂盒(由中国人民解放军总医院提供)。
, 百拇医药
二、结果
1、主动脉弓组织切片镜下显示：对照组无异常，而实验组家兔发生了典型AS变化。
2、各项指标在第0天测定结果，两组均无显著差别。
胆固醇测定：第15天后，实验组T-C和LDL-C已明显增高，并随时间延长继续增高，到第60天，T-C已为对照组14.5倍，LDL-C为19.3倍，HDL-C在第45天才显著升高，第60天为对照组的2.2倍(表1)。
表1 动脉粥样硬化家兔血浆胆固醇变化(mmol/L，
) 时间(天)
T-C
LDL-C
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HDL-C
HDL-C/LDL-C
0
100(1.58±0.33△)
100(0.55±0.15△)
100(0.60±0.16△)
1.2
15
657±132**
811±564**
, 百拇医药 119±15
0.17
30
986±169**
1324±446**
125±46
0.11
45
1141±123**
1804±603**
169±95*
, http://www.100md.com
0.13
60
1452±282**
1932±436**
228±65**
0.13
△绝对数值；其余数值是以0天值为100的相对值；*P<0.05；**P<0.01；下同
LPO测定：由表2可见T-LPO和LDL-LPO，在第15天，实验组已开始升高，并随时间延长更为明显。而HDL-LPO仅略有升高，无统计学意义。
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VE的变化：由表3可见，血浆总VE在第45天开始下降，至第60天无进一步变化。每100mgLDL-C的VE含量在第15天已大幅度降低，以后的变化幅度较小。每100mgHDL-C的VE含量只是在第45天才出现有统计学意义地下降。
表2 动脉粥样硬化家兔血浆LPO变化(μmol/L，) 时间(天)
T-LPO
LDL-LPO
HDL-LPO
0
100(4.28±0.89△)
100(2.07±0.92△)
, 百拇医药
100(1.90±0.85△)
15
147±44*
122±51*…
30
171±55**
182±40**
111±31
45
201±52**
195±54**
, 百拇医药
111±40
60
287±33**
227±48**
106±29
表3 动脉粥样硬化家兔的VE变化()
时间(天)
T-VE(μg/ml)
LDL-VE(μg/mgLDL-C)
HDL-VE(μg/mg HDL-C)
, 百拇医药
0
100(14.61±5.20△)
100(3.84±1.77△)
100(7.26±2.61△)
15
96±26
9.56±4.25**
88±21
30
100±37
6.96±1.49**
, 百拇医药
105±59
45
73±26*
5.70±3.47**
68±22*
60
74±16*
7.75±5.07**
23±9**
SeGSHPX和TXB2的变化：实验组SeGSHPx在前45天无明显变化，第60天显著降低。而TXB2在第15天已升高，并随喂养时间延长，增高越明显(表4)。表4 动脉粥样硬化家兔的SeGSHPx和TXB2的变化() 时间(天)
, 百拇医药
SeGSHPx(氧化NADPHμmol/min*ml-1 )
TXB2(ng/L)
0
100(0.050±0.016△)
100(287±158△)
15
104±26
133±54*
30
104±77
, 百拇医药
188±81*
45
85±42
234±70**
60
35±19*
246±90**
3、主动脉弓组织的胆固醇、LDL-C和LPO变化：主动脉弓组织的总胆固醇和LDL-C含量在实验组明显为高于对照组。实验组家兔LPO含量也显著高于对照组(附图)。
附图 家兔主动脉组织胆固醇、LDL-C、LPO含量
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三、讨论
本组结果血浆LPO、VE含量和SeGSHPx活性降低，胆固醇和TXB2含量增加以及组织LPO含量的变化，说明实验性动脉粥样硬化动物，受到脂质过氧化损伤和抗氧化能力下降，与我们先前的工作相一致[7，8]。提示血浆LPO含量的变化主要发生在LDL组分中。LDL是血浆LPO的载体。已知LDL含量的增高与动脉粥样硬化的发生呈正相关。因此本实验通过LDL和HDL中胆固醇、LPO和VE含量的变化，进一步说明脂质过氧化与动脉粥样硬化发生发展的关系。
参考文献
1 Heinrich W, et al A simple specific method for precipitation of low density lipoproteins I Lipid Research. 1983;24:904.
, 百拇医药
2 王同明等，生物化学及检验技术，第一版，南京：江苏科技出版社，1986：382-3。
3 Yagi K, A Simple fluorometric assay for lipoperoxide in blood plasma Biochem Med 1976;15:212.
4 Ohkawa H, et al. Assay for lipid peroxide in animal tissues by thiobarbituric acid reaction Anal Biochem 1979;95:351.
5 Paglia DE, et al. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. J Lab Clin Med, 1976;70:158.
6 Taylor SL, et al. Sensitive fluorometric method for tissue tocopherol analysis Lipids 1976;11:530.
7 Chenet Y, et al. Lipoperoxidative damage in patients with coronary heart disease Med Sci Res 1988;16:1059.
8 陈瑗，周玫，脂质过氧化作用与动脉粥样硬化，生物化学与生物物理进展 1989；16：278。, http://www.100md.com
单位：(第一军医大学脂质过氧化损伤研究组，广州，510515)
关键词：
中华医学杂志910619
高胆固醇血症时机体内抗氧化能力及高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)都发生了变化。为了进一步研究这些变化的内在联系，我们对实验性动脉粥样硬化(CAS)的家兔进行了动态观察。
一、材料和方法
1、动物：健康雄性纯种新西兰白兔20只，体重2～2.5kg，兔龄4～6个月。实验前使用普通饲料进行适应性饲养30天。随机分成两组，每组10只。实验组动物喂以高脂高胆固醇饲料，即普通饲料内加入1%胆固醇和4%猪油。对照组仅喂普通饲料。单笼饲养，自由摄入食水，两组平行实验。
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2、观察指标：在实验过程中，分别于第0、15、30、45及60天经耳中央动脉采血。EDTA(1.0mmol/L)抗凝。分别测定血浆总胆固醇(T-C)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，血浆总LPO含量(T-LPO)，高密度脂蛋白LPO(HDL-LPO)和低密度脂蛋白LPO(LDL-LPO)含量，血浆总维生素E(T-VE)，高密度脂蛋白VE(HDL-VE)和低密度脂蛋白VE(LDL-VE)含量，血浆硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHPx)含量。在相同时间用硅化注射器同样方法采血，肝素消炎痛混合液抗凝，分离血浆，测定TXB2含量。
第60天经耳中央动脉采血后，颈动脉放血处死动物，观察主动脉内膜变化，切片镜检及测定主动脉组织胆固醇、LDL-C、LPO含量。
3、方法：LDL分离：按Heinrich等[1]介绍的方法：HDL分离：按磷钨酸钠氯化镁法[2]；血浆LPO测定：按Yagi等[3]方法；组织LPO含量测定：按Ohkawa等[4]方法；SeGshPx活性测定：按Poglia等[4]方法；VE测定：按Taylor等[6]方法。TXB2测定用放射免疫试剂盒(由中国人民解放军总医院提供)。
, 百拇医药
二、结果
1、主动脉弓组织切片镜下显示：对照组无异常，而实验组家兔发生了典型AS变化。
2、各项指标在第0天测定结果，两组均无显著差别。
胆固醇测定：第15天后，实验组T-C和LDL-C已明显增高，并随时间延长继续增高，到第60天，T-C已为对照组14.5倍，LDL-C为19.3倍，HDL-C在第45天才显著升高，第60天为对照组的2.2倍(表1)。
表1 动脉粥样硬化家兔血浆胆固醇变化(mmol/L，
) 时间(天)T-C
LDL-C
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HDL-C
HDL-C/LDL-C
0
100(1.58±0.33△)
100(0.55±0.15△)
100(0.60±0.16△)
1.2
15
657±132**
811±564**
, 百拇医药 119±15
0.17
30
986±169**
1324±446**
125±46
0.11
45
1141±123**
1804±603**
169±95*
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0.13
60
1452±282**
1932±436**
228±65**
0.13
△绝对数值；其余数值是以0天值为100的相对值；*P<0.05；**P<0.01；下同
LPO测定：由表2可见T-LPO和LDL-LPO，在第15天，实验组已开始升高，并随时间延长更为明显。而HDL-LPO仅略有升高，无统计学意义。
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VE的变化：由表3可见，血浆总VE在第45天开始下降，至第60天无进一步变化。每100mgLDL-C的VE含量在第15天已大幅度降低，以后的变化幅度较小。每100mgHDL-C的VE含量只是在第45天才出现有统计学意义地下降。
表2 动脉粥样硬化家兔血浆LPO变化(μmol/L，
) 时间(天)T-LPO
LDL-LPO
HDL-LPO
0
100(4.28±0.89△)
100(2.07±0.92△)
, 百拇医药
100(1.90±0.85△)
15
147±44*
122±51*…
30
171±55**
182±40**
111±31
45
201±52**
195±54**
, 百拇医药
111±40
60
287±33**
227±48**
106±29
表3 动脉粥样硬化家兔的VE变化(
)时间(天)
T-VE(μg/ml)
LDL-VE(μg/mgLDL-C)
HDL-VE(μg/mg HDL-C)
, 百拇医药
0
100(14.61±5.20△)
100(3.84±1.77△)
100(7.26±2.61△)
15
96±26
9.56±4.25**
88±21
30
100±37
6.96±1.49**
, 百拇医药
105±59
45
73±26*
5.70±3.47**
68±22*
60
74±16*
7.75±5.07**
23±9**
SeGSHPX和TXB2的变化：实验组SeGSHPx在前45天无明显变化，第60天显著降低。而TXB2在第15天已升高，并随喂养时间延长，增高越明显(表4)。表4 动脉粥样硬化家兔的SeGSHPx和TXB2的变化(
) 时间(天), 百拇医药
SeGSHPx(氧化NADPHμmol/min*ml-1 )
TXB2(ng/L)
0
100(0.050±0.016△)
100(287±158△)
15
104±26
133±54*
30
104±77
, 百拇医药
188±81*
45
85±42
234±70**
60
35±19*
246±90**
3、主动脉弓组织的胆固醇、LDL-C和LPO变化：主动脉弓组织的总胆固醇和LDL-C含量在实验组明显为高于对照组。实验组家兔LPO含量也显著高于对照组(附图)。
附图 家兔主动脉组织胆固醇、LDL-C、LPO含量
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三、讨论
本组结果血浆LPO、VE含量和SeGSHPx活性降低，胆固醇和TXB2含量增加以及组织LPO含量的变化，说明实验性动脉粥样硬化动物，受到脂质过氧化损伤和抗氧化能力下降，与我们先前的工作相一致[7，8]。提示血浆LPO含量的变化主要发生在LDL组分中。LDL是血浆LPO的载体。已知LDL含量的增高与动脉粥样硬化的发生呈正相关。因此本实验通过LDL和HDL中胆固醇、LPO和VE含量的变化，进一步说明脂质过氧化与动脉粥样硬化发生发展的关系。
参考文献
1 Heinrich W, et al A simple specific method for precipitation of low density lipoproteins I Lipid Research. 1983;24:904.
, 百拇医药
2 王同明等，生物化学及检验技术，第一版，南京：江苏科技出版社，1986：382-3。
3 Yagi K, A Simple fluorometric assay for lipoperoxide in blood plasma Biochem Med 1976;15:212.
4 Ohkawa H, et al. Assay for lipid peroxide in animal tissues by thiobarbituric acid reaction Anal Biochem 1979;95:351.
5 Paglia DE, et al. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. J Lab Clin Med, 1976;70:158.
6 Taylor SL, et al. Sensitive fluorometric method for tissue tocopherol analysis Lipids 1976;11:530.
7 Chenet Y, et al. Lipoperoxidative damage in patients with coronary heart disease Med Sci Res 1988;16:1059.
8 陈瑗，周玫，脂质过氧化作用与动脉粥样硬化，生物化学与生物物理进展 1989；16：278。, http://www.100md.com