九种胃癌免疫脂质体的制备及其特性比较
作者：徐梁 张学庸 莫简△ 樊代明 陈希陶 孙淑芬△ 郭正仁△ 王多宁△
单位：第四军大学西京医院消化病研究室*
关键词：
中华医学杂志920216 免疫脂质体由脂质体连接特异性抗体制成,集脂质体的特性和抗体的导向性于一体,成为新型药物导向载体,在肿瘤诊断和治疗中日益受到重视[1]。我们应用抗人胃癌单克隆抗体MGb2制备胃癌免疫脂质体,包入临床9种常用的抗肿瘤药物,研究其理化及免疫学特性,并比较九种胃癌免疫脂质体对人胃癌靶细胞的选择性杀伤能力,探讨免疫脂质体对抗肿瘤药物的导向作用以及用于胃癌导向治疗的可行性。
一.材料和方法
1.免疫脂质体的制备:水溶性药物丝裂霉素c,氨甲喋呤,顺铂和平阳霉素按文献方法制备逆相蒸发脂质体(REV),脂溶性药物与脂质形成脂膜后用超声法制备小单层脂质体(SUV).脂质比例为卵磷脂:胆固醇:脑磷脂,分子比5:5：1。
, 百拇医药
胃癌单克隆抗体MGb2经N-羟基琥珀酰亚胺软脂酸酯修饰,用改良去垢剂透析法插入脂质体即得免疫脂质体,同时用正常BALB/C小鼠IgG(NIgG)制备非特异脂质体.0.22um聚碳酸酯膜(Millipore产品)除菌,充氮气保存。
附表 九种胃癌免疫脂质体的特性比较
包裹药物
药物:抗体:脂质体1
包裹率2(%，
s)
免疫脂质体IC50(ml/L)
游离药物IC50
, http://www.100md.com
SGC-7901
SL 7
SGC-7901
阿霉素3
5667：48：1
47.5±6.2
0.15
8.65
0.34
表阿霉素3
7708：70：1
52.8±7.4
, http://www.100md.com
0.13
8.07
0.49
丝裂霉素
8776：34：1
2.6±1.8
0.91
11.70
0.98
氨甲喋呤
8399：47：1
8.3±2.7
0.42
, http://www.100md.com
4.01
0.49
顺铂
1240：30：1
10.3±4.4
0.23
4.50
0.31
放线菌素-D3
2300：46：1
15.7±3.8
0.80
, http://www.100md.com
6.60
1.57
平阳霉素
10515：44：1
5.5±3.0
48
286
52
长春新碱
10000：50：1
-
23
101
, http://www.100md.com
33
脂酰化-柔红霉素
7365：72：1
93.3±4.7
0.21
14.53
0.12
注:1.分子比,3次实验的均值,2.n=3,3.2h杀伤试验
2.免疫脂质体特性比较:按文献方法测定磷脂,抗体,药物含量,计算药物包裹率[2，4].ELISA测定抗体活必性,免疫脂质体包裹125I-BSA进行免疫结合试验.以人胃癌细胞SGC-7901为靶细胞,正常人胚肺细胞SL7为非靶细胞,用免疫脂质体进行48小时和2小时细胞毒试验(噻唑蓝法)[4]计算半数抑制浓度IC50,比较其选择性杀伤能力。
, 百拇医药
二.结果和讨论
本方法制备的胃癌免疫脂质体,电镜负染观察为单层脂质体,REV直径80-120nm,SUV直径20-60nm.九种药物均成功地包入免疫脂质体(表1),柔脂性药物阿霉素,表阿霉素包裹率分别为47.5%和52.8%,亲水性药物则低得多,丝裂霉素C2.6%,氨甲喋呤8.3%.柔红霉素经亲脂化处理后,包裹率从10%提高至93.3%.每个脂质体可包入103-104分子药物,易于达到导向治疗所需药物浓度.顺铂为非极性药物,易掺入双层脂膜中,量过多则影响脂质体的稳定性.抗体经修饰后插入脂质体,每个脂质体可结合30-80分子抗体,抗体活性保持良好.结合试验和免疫荧光染色均证实,免疫脂质体可特异地识别并将其内容物携带至靶细胞,而对正常细胞则无明显结合.
九种胃癌免疫脂质体对人胃癌靶细胞均具有很强的杀伤能力,对正常细胞的毒性显著减少(表1).以IC50计算,特异杀伤力是非特异杀伤力的6-70倍。48小时杀伤试验中，免疫脂质体裁对靶细胞的杀伤作用与游离药物相近,表明药物包入脂质体后仍保存其药理活性,2小时杀伤试验更接近体内作用时间,免疫脂质体对胃癌细胞的杀伤作用明显优于游离药物(P<0.01),显示出抗体导向的优势。
, 百拇医药
结果表明,所制备的九种胃癌免疫脂质体特异性杀伤力强,对正常细胞毒性小,将可能用于胃癌的导向治疗.尤其以亲脂性药物的免疫脂质体较好地解决了药物水溶性问题,更有实用价值,值得进一步研究。
参考文献
1.徐梁,等.免疫脂质体在肿瘤诊断和治疗中的应用,单克隆抗体通讯1991;7:67
2.Xu L,et al.Antibody-mediated targeting if doxorucincontaining immunoliposomes to human gastric cancetr .J Med Coll PLA 1991;6:48
3.Loughrey HC,et al .Optimized proceduresb for the coupling of proteins to liposmes .J Immumol Methods 1990;132:25
4.徐梁,等.胃癌特异性免疫脂质体导向脂酰化柔红霉素的体外实验研究.生物物理化学与生物学报1990;22:299
*西安,邮政编码 710032
△本校化学教研室, 百拇医药
单位：第四军大学西京医院消化病研究室*
关键词：
中华医学杂志920216 免疫脂质体由脂质体连接特异性抗体制成,集脂质体的特性和抗体的导向性于一体,成为新型药物导向载体,在肿瘤诊断和治疗中日益受到重视[1]。我们应用抗人胃癌单克隆抗体MGb2制备胃癌免疫脂质体,包入临床9种常用的抗肿瘤药物,研究其理化及免疫学特性,并比较九种胃癌免疫脂质体对人胃癌靶细胞的选择性杀伤能力,探讨免疫脂质体对抗肿瘤药物的导向作用以及用于胃癌导向治疗的可行性。
一.材料和方法
1.免疫脂质体的制备:水溶性药物丝裂霉素c,氨甲喋呤,顺铂和平阳霉素按文献方法制备逆相蒸发脂质体(REV),脂溶性药物与脂质形成脂膜后用超声法制备小单层脂质体(SUV).脂质比例为卵磷脂:胆固醇:脑磷脂,分子比5:5：1。
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胃癌单克隆抗体MGb2经N-羟基琥珀酰亚胺软脂酸酯修饰,用改良去垢剂透析法插入脂质体即得免疫脂质体,同时用正常BALB/C小鼠IgG(NIgG)制备非特异脂质体.0.22um聚碳酸酯膜(Millipore产品)除菌,充氮气保存。
附表 九种胃癌免疫脂质体的特性比较
包裹药物
药物:抗体:脂质体1
包裹率2(%，
s)免疫脂质体IC50(ml/L)
游离药物IC50
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SGC-7901
SL 7
SGC-7901
阿霉素3
5667：48：1
47.5±6.2
0.15
8.65
0.34
表阿霉素3
7708：70：1
52.8±7.4
, http://www.100md.com
0.13
8.07
0.49
丝裂霉素
8776：34：1
2.6±1.8
0.91
11.70
0.98
氨甲喋呤
8399：47：1
8.3±2.7
0.42
, http://www.100md.com
4.01
0.49
顺铂
1240：30：1
10.3±4.4
0.23
4.50
0.31
放线菌素-D3
2300：46：1
15.7±3.8
0.80
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6.60
1.57
平阳霉素
10515：44：1
5.5±3.0
48
286
52
长春新碱
10000：50：1
-
23
101
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33
脂酰化-柔红霉素
7365：72：1
93.3±4.7
0.21
14.53
0.12
注:1.分子比,3次实验的均值,2.n=3,3.2h杀伤试验
2.免疫脂质体特性比较:按文献方法测定磷脂,抗体,药物含量,计算药物包裹率[2，4].ELISA测定抗体活必性,免疫脂质体包裹125I-BSA进行免疫结合试验.以人胃癌细胞SGC-7901为靶细胞,正常人胚肺细胞SL7为非靶细胞,用免疫脂质体进行48小时和2小时细胞毒试验(噻唑蓝法)[4]计算半数抑制浓度IC50,比较其选择性杀伤能力。
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二.结果和讨论
本方法制备的胃癌免疫脂质体,电镜负染观察为单层脂质体,REV直径80-120nm,SUV直径20-60nm.九种药物均成功地包入免疫脂质体(表1),柔脂性药物阿霉素,表阿霉素包裹率分别为47.5%和52.8%,亲水性药物则低得多,丝裂霉素C2.6%,氨甲喋呤8.3%.柔红霉素经亲脂化处理后,包裹率从10%提高至93.3%.每个脂质体可包入103-104分子药物,易于达到导向治疗所需药物浓度.顺铂为非极性药物,易掺入双层脂膜中,量过多则影响脂质体的稳定性.抗体经修饰后插入脂质体,每个脂质体可结合30-80分子抗体,抗体活性保持良好.结合试验和免疫荧光染色均证实,免疫脂质体可特异地识别并将其内容物携带至靶细胞,而对正常细胞则无明显结合.
九种胃癌免疫脂质体对人胃癌靶细胞均具有很强的杀伤能力,对正常细胞的毒性显著减少(表1).以IC50计算,特异杀伤力是非特异杀伤力的6-70倍。48小时杀伤试验中，免疫脂质体裁对靶细胞的杀伤作用与游离药物相近,表明药物包入脂质体后仍保存其药理活性,2小时杀伤试验更接近体内作用时间,免疫脂质体对胃癌细胞的杀伤作用明显优于游离药物(P<0.01),显示出抗体导向的优势。
, 百拇医药
结果表明,所制备的九种胃癌免疫脂质体特异性杀伤力强,对正常细胞毒性小,将可能用于胃癌的导向治疗.尤其以亲脂性药物的免疫脂质体较好地解决了药物水溶性问题,更有实用价值,值得进一步研究。
参考文献
1.徐梁,等.免疫脂质体在肿瘤诊断和治疗中的应用,单克隆抗体通讯1991;7:67
2.Xu L,et al.Antibody-mediated targeting if doxorucincontaining immunoliposomes to human gastric cancetr .J Med Coll PLA 1991;6:48
3.Loughrey HC,et al .Optimized proceduresb for the coupling of proteins to liposmes .J Immumol Methods 1990;132:25
4.徐梁,等.胃癌特异性免疫脂质体导向脂酰化柔红霉素的体外实验研究.生物物理化学与生物学报1990;22:299
*西安,邮政编码 710032
△本校化学教研室, 百拇医药