淋巴细胞形态原位免疫电镜观察
作者：苏敏 牛恕淼 袁沛雄 司履生 田东萍
单位：西安医科大学病理教研室*
关键词：
中华医学杂志920212 有关淋巴细胞与靶细胞相互作用的关系是近年来的一个重要研究课题,我们利用单克隆抗体免疫电镜技术对此进行了初步研究,以探讨细胞毒T细胞可能的杀伤机制。
一.材料和方法
选用临床及病理证实的自身免疫性甲状腺炎10例,胃肠腺癌10例.标本经PLP固定后置入分级蔗糖磷酸缓冲液脱水。液氮冷冻。恒冷切片机连续切片,厚20um。包埋前ABC免疫组化染色,倒扣胶囊法,再作500超薄切片,柠檬酸铅淡染,H-600型透射电镜观察。
主要试剂:单克隆抗体T4(与T辅助/诱导细胞反应),T3(与T抑制/杀伤细胞反应),B(与B淋巴细胞反应),I2(与活化T淋细胞,B淋巴细胞,巨噬细胞反应,抗HAL-DR抗原),H1(与HLA-ABC抗原反应)分别购自Coulter公司,Ortho 公司,Dakopatts公司等。
, http://www.100md.com
对照实验:取正常甲状腺及胃肠组各3例为正常对照组;染色对照用空白对照,替代对照及阳性对照(用淋巴结)。
二.结果
单克隆抗体ABC免疫酶染色,光镜下阳性产物呈黑色。电镜下,在阳性细胞的胞膜上,有高电子密度的产物沉积。淋巴结,甲状腺间质,胃肠癌间质中浸润的淋巴细胞呈类圆形,表面不光滑,有细小突起,细胞器少,核也呈类圆形,异染色质呈致密的斑块紧靠核膜下(图1)。
胃肠腺癌细胞HLA-ABC抗原表达减弱甚至消失,偶见个别癌细胞呈DR阳性。与癌细胞接触的淋巴细胞很少, 有T3阳性细胞,亦有T4阳必性细胞。其中部分淋巴细胞形态稍有变化。可见到胞浆极向化现象,即淋巴细胞胞浆向癌细胞侧偏移。大多数与淋巴细胞接触的癌细胞未见有特殊性的破坏迹象。自身免疫性甲状腺炎甲状腺浸润的淋巴细胞数明显较胃肠癌组织中浸润淋巴细胞为多,且大部分为I2阳性,尤其是与甲状腺滤泡上皮细胞靠近的淋巴细胞几乎均为I2阳性显示其处于极度活化状态。甲状腺滤泡上皮细胞HLA-ABC抗原表达增强,且与淋巴细胞相近的甲状腺滤泡上皮细胞均异常表达HLA-DR抗原。与甲状腺滤泡上皮细胞靠近的淋巴细胞主要为T8阳性细胞,其形态变化大,有的伸出伪足与滤泡上皮细胞形成点接触,有的以较大平面与滤泡上皮细胞接触,有的伸出伪足插入滤泡基板,打开缺口,有的已完全侵入滤泡上皮细胞内,侵入靶细胞内的T3阳性细胞形态变化更大,伸出许多伪足,状如蜘蛛,而相应的滤泡上皮细胞核则有退缩,溶解,崩溃改变。
, http://www.100md.com
对照实验。正常胃肠粘膜上皮HLA-ABC抗原阳性,但不表达HLA-DR抗原。甲状腺滤泡上皮细胞HLA-ABC抗原呈弱阳性,不表达HLA-DR抗原,几乎无单个核细胞浸润,空白及替代染色对照均为阴性反应。
三.讨论
虽然一般把肿瘤局部的淋巴细胞浸润视为机体对瘤组织的免疫反应.但肿瘤中浸润的淋巴细胞大多位于间质,真正侵入到瘤实质中的淋巴细胞很少,本驵资料也证实了这一点.仅个别与癌细胞接触的T3阳性细胞形态有轻微改变,相应的癌细胞多无明显破坏迹象.然而与异常表达DR抗原的甲状腺滤泡上皮细胞相接触的T3阳性细胞形态则出现显著变化,以变形活动方式侵入靶细胞,相应靶细胞则呈现破坏,崩解改变,提示淋巴细胞的形态变化与其细胞毒功能有密切的关联,可能是其处在极度活化状态的重要标志。
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图1 自身免疫性甲状腺炎,甲状腺间质浸润的淋巴细胞,呈类圆型,有细小突起 ABC染色×10000
图2 浸入甲状腺滤泡上皮细胞内的T8阳性细胞(↑)变形如蜘蛛,靶细胞已崩解 ABC染色×10000
*邮政编码710061, http://www.100md.com
单位：西安医科大学病理教研室*
关键词：
中华医学杂志920212 有关淋巴细胞与靶细胞相互作用的关系是近年来的一个重要研究课题,我们利用单克隆抗体免疫电镜技术对此进行了初步研究,以探讨细胞毒T细胞可能的杀伤机制。
一.材料和方法
选用临床及病理证实的自身免疫性甲状腺炎10例,胃肠腺癌10例.标本经PLP固定后置入分级蔗糖磷酸缓冲液脱水。液氮冷冻。恒冷切片机连续切片,厚20um。包埋前ABC免疫组化染色,倒扣胶囊法,再作500超薄切片,柠檬酸铅淡染,H-600型透射电镜观察。
主要试剂:单克隆抗体T4(与T辅助/诱导细胞反应),T3(与T抑制/杀伤细胞反应),B(与B淋巴细胞反应),I2(与活化T淋细胞,B淋巴细胞,巨噬细胞反应,抗HAL-DR抗原),H1(与HLA-ABC抗原反应)分别购自Coulter公司,Ortho 公司,Dakopatts公司等。
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对照实验:取正常甲状腺及胃肠组各3例为正常对照组;染色对照用空白对照,替代对照及阳性对照(用淋巴结)。
二.结果
单克隆抗体ABC免疫酶染色,光镜下阳性产物呈黑色。电镜下,在阳性细胞的胞膜上,有高电子密度的产物沉积。淋巴结,甲状腺间质,胃肠癌间质中浸润的淋巴细胞呈类圆形,表面不光滑,有细小突起,细胞器少,核也呈类圆形,异染色质呈致密的斑块紧靠核膜下(图1)。
胃肠腺癌细胞HLA-ABC抗原表达减弱甚至消失,偶见个别癌细胞呈DR阳性。与癌细胞接触的淋巴细胞很少, 有T3阳性细胞,亦有T4阳必性细胞。其中部分淋巴细胞形态稍有变化。可见到胞浆极向化现象,即淋巴细胞胞浆向癌细胞侧偏移。大多数与淋巴细胞接触的癌细胞未见有特殊性的破坏迹象。自身免疫性甲状腺炎甲状腺浸润的淋巴细胞数明显较胃肠癌组织中浸润淋巴细胞为多,且大部分为I2阳性,尤其是与甲状腺滤泡上皮细胞靠近的淋巴细胞几乎均为I2阳性显示其处于极度活化状态。甲状腺滤泡上皮细胞HLA-ABC抗原表达增强,且与淋巴细胞相近的甲状腺滤泡上皮细胞均异常表达HLA-DR抗原。与甲状腺滤泡上皮细胞靠近的淋巴细胞主要为T8阳性细胞,其形态变化大,有的伸出伪足与滤泡上皮细胞形成点接触,有的以较大平面与滤泡上皮细胞接触,有的伸出伪足插入滤泡基板,打开缺口,有的已完全侵入滤泡上皮细胞内,侵入靶细胞内的T3阳性细胞形态变化更大,伸出许多伪足,状如蜘蛛,而相应的滤泡上皮细胞核则有退缩,溶解,崩溃改变。
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对照实验。正常胃肠粘膜上皮HLA-ABC抗原阳性,但不表达HLA-DR抗原。甲状腺滤泡上皮细胞HLA-ABC抗原呈弱阳性,不表达HLA-DR抗原,几乎无单个核细胞浸润,空白及替代染色对照均为阴性反应。
三.讨论
虽然一般把肿瘤局部的淋巴细胞浸润视为机体对瘤组织的免疫反应.但肿瘤中浸润的淋巴细胞大多位于间质,真正侵入到瘤实质中的淋巴细胞很少,本驵资料也证实了这一点.仅个别与癌细胞接触的T3阳性细胞形态有轻微改变,相应的癌细胞多无明显破坏迹象.然而与异常表达DR抗原的甲状腺滤泡上皮细胞相接触的T3阳性细胞形态则出现显著变化,以变形活动方式侵入靶细胞,相应靶细胞则呈现破坏,崩解改变,提示淋巴细胞的形态变化与其细胞毒功能有密切的关联,可能是其处在极度活化状态的重要标志。
.图1 自身免疫性甲状腺炎,甲状腺间质浸润的淋巴细胞,呈类圆型,有细小突起 ABC染色×10000
图2 浸入甲状腺滤泡上皮细胞内的T8阳性细胞(↑)变形如蜘蛛,靶细胞已崩解 ABC染色×10000
*邮政编码710061, http://www.100md.com