气相色谱法厌氧菌半定量分析及临床应用
作者：师锦波 申虹 张子扬 李世福
单位：(长春第一汽车制造厂职工医院外科，130011)
关键词：
中华医学杂志920420
我们对几种腹腔感染性疾病采取直接临床标本进行气相色谱检测对厌氧菌进行半定量分析，并附以厌氧菌培养对照，以求了解不同疾病和同一种疾病不同阶段厌氧菌密度，以观察疾病的进程和指导治疗。
一、材料与方法
1、材料来源：标本共88份。其中急性单纯性阑尾炎阑尾腔内容物10份，急性化脓性和坏疽性阑尾炎阑尾腔脓汁17份，胆管结石胆管胆汁22份，胆道术后T型管胆汁19份，慢性胆囊结石胆囊胆汁9份，急性化脓性胆囊炎胆囊胆汁11份。各种标本均取3ml，立即行色谱检测前处理。另取1ml行厌氧菌和需氧菌培养。
, http://www.100md.com
2、临床标本的处理：标本按VPI手册[Anaerobe laboratory manual 4th ed. Virginia: The Virginia Polytechnic Institute and State University Anaerobe Laboratory Blacksbury, 1977;134]方法进行前处理。将临床标本酸化至pH2。分别用乙醚法提取挥发性脂肪酸(VFA)和甲酯衍生物制备法提取非挥发性脂肪酸(NVFA)。
3、标准液和标准曲线的制备：将各种短链脂肪酸分别配制成5、10、20及30mmol/L不同浓度。其中每种脂肪酸选3种浓度进样各1μl，做出色谱图。常规测出峰值，按峰值和浓度确定座标上的位置，经矫正后绘出曲线。
4、气相色谱检测条件：1001型气相色谱仪，(上海分析仪器厂产品)，氢焰检测器，不锈钢柱，白色担体，固定液为改性聚乙二醇20mol/L。载气为99.99%氮气。每次开机先做一套标准脂肪酸色谱图。本实验所用各种条件均保持不变，进样量、采取标本量、脂肪酸提取时浓缩量等也需保持一致。
, 百拇医药
二、结果与分析
色谱图中丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、异己酸在需氧菌或兼性菌中不能检出或含量极微[厌氧菌的分离和鉴定。南昌：江西科学出版社，1986；125]。本组88份标本中50份含有厌氧菌特定脂肪酸。其中急性单纯性阑尾炎5份(5/10)，化脓性及坏疽性阑尾炎15份(15/17)，胆管结石术中胆汁8份(8/22)，胆管结石术后T型管胆汁13份(13/19)，急性化脓性胆囊炎胆汁9份(9/11)，慢性胆囊结石胆汁无厌氧菌。可见厌氧菌感染化脓性阑尾炎高于单纯性阑尾炎，胆管结石术后T型管胆汁高于胆管结石术中胆汁，急性化脓胆囊炎高于慢性胆囊结石(P均<0.05)。
本组88份标本中86份做了需氧菌和厌氧菌培养。76份培养出需氧菌(88%)，42份培养出厌氧菌。气相色谱和厌氧菌培养结果符合者77份，符合率为90%。
在此基础上行定量分析，可见同一类疾病不同的发病阶段及不同的疾病患病部位厌氧菌的量不同。显示厌氧菌在一些疾病的发生、发展和转归中起重要作用。本组单纯性阑尾炎其特定脂肪酸均<5mmol/L，而急性化脓及坏疽性阑尾炎5～10mmol/L者15个，>10mmol/L者6个。表明急性化脓及坏疽性阑尾炎不仅厌氧菌感染率比急性单纯性阑尾炎高，细菌密度也大大高于后者。提示急性阑尾炎发病过程的细菌学和不同阶段的变化。同样胆管结石术后T型管胆汁特定脂肪酸含量5～10mmol/L7个，而胆管结石术中胆汁仅有1个在5～10mmol/L，其余均<5mmol/L，前者不仅厌氧菌感染率比后者高，而细菌密度也高于后者。提示临床工作者必须注意T型管引流的细菌感染问题。急性化脓性胆囊炎胆汁特定脂肪酸<5mmol/L9个，>10mmol/L 1个，而慢性胆囊结石胆汁未检出特定脂肪酸。提示胆囊结石的形成可能和厌氧菌关系不大，而胆管结石的形成和厌氧菌有一定的关系。, 百拇医药
单位：(长春第一汽车制造厂职工医院外科，130011)
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我们对几种腹腔感染性疾病采取直接临床标本进行气相色谱检测对厌氧菌进行半定量分析，并附以厌氧菌培养对照，以求了解不同疾病和同一种疾病不同阶段厌氧菌密度，以观察疾病的进程和指导治疗。
一、材料与方法
1、材料来源：标本共88份。其中急性单纯性阑尾炎阑尾腔内容物10份，急性化脓性和坏疽性阑尾炎阑尾腔脓汁17份，胆管结石胆管胆汁22份，胆道术后T型管胆汁19份，慢性胆囊结石胆囊胆汁9份，急性化脓性胆囊炎胆囊胆汁11份。各种标本均取3ml，立即行色谱检测前处理。另取1ml行厌氧菌和需氧菌培养。
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2、临床标本的处理：标本按VPI手册[Anaerobe laboratory manual 4th ed. Virginia: The Virginia Polytechnic Institute and State University Anaerobe Laboratory Blacksbury, 1977;134]方法进行前处理。将临床标本酸化至pH2。分别用乙醚法提取挥发性脂肪酸(VFA)和甲酯衍生物制备法提取非挥发性脂肪酸(NVFA)。
3、标准液和标准曲线的制备：将各种短链脂肪酸分别配制成5、10、20及30mmol/L不同浓度。其中每种脂肪酸选3种浓度进样各1μl，做出色谱图。常规测出峰值，按峰值和浓度确定座标上的位置，经矫正后绘出曲线。
4、气相色谱检测条件：1001型气相色谱仪，(上海分析仪器厂产品)，氢焰检测器，不锈钢柱，白色担体，固定液为改性聚乙二醇20mol/L。载气为99.99%氮气。每次开机先做一套标准脂肪酸色谱图。本实验所用各种条件均保持不变，进样量、采取标本量、脂肪酸提取时浓缩量等也需保持一致。
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二、结果与分析
色谱图中丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、异己酸在需氧菌或兼性菌中不能检出或含量极微[厌氧菌的分离和鉴定。南昌：江西科学出版社，1986；125]。本组88份标本中50份含有厌氧菌特定脂肪酸。其中急性单纯性阑尾炎5份(5/10)，化脓性及坏疽性阑尾炎15份(15/17)，胆管结石术中胆汁8份(8/22)，胆管结石术后T型管胆汁13份(13/19)，急性化脓性胆囊炎胆汁9份(9/11)，慢性胆囊结石胆汁无厌氧菌。可见厌氧菌感染化脓性阑尾炎高于单纯性阑尾炎，胆管结石术后T型管胆汁高于胆管结石术中胆汁，急性化脓胆囊炎高于慢性胆囊结石(P均<0.05)。
本组88份标本中86份做了需氧菌和厌氧菌培养。76份培养出需氧菌(88%)，42份培养出厌氧菌。气相色谱和厌氧菌培养结果符合者77份，符合率为90%。
在此基础上行定量分析，可见同一类疾病不同的发病阶段及不同的疾病患病部位厌氧菌的量不同。显示厌氧菌在一些疾病的发生、发展和转归中起重要作用。本组单纯性阑尾炎其特定脂肪酸均<5mmol/L，而急性化脓及坏疽性阑尾炎5～10mmol/L者15个，>10mmol/L者6个。表明急性化脓及坏疽性阑尾炎不仅厌氧菌感染率比急性单纯性阑尾炎高，细菌密度也大大高于后者。提示急性阑尾炎发病过程的细菌学和不同阶段的变化。同样胆管结石术后T型管胆汁特定脂肪酸含量5～10mmol/L7个，而胆管结石术中胆汁仅有1个在5～10mmol/L，其余均<5mmol/L，前者不仅厌氧菌感染率比后者高，而细菌密度也高于后者。提示临床工作者必须注意T型管引流的细菌感染问题。急性化脓性胆囊炎胆汁特定脂肪酸<5mmol/L9个，>10mmol/L 1个，而慢性胆囊结石胆汁未检出特定脂肪酸。提示胆囊结石的形成可能和厌氧菌关系不大，而胆管结石的形成和厌氧菌有一定的关系。, 百拇医药