人体肿瘤裸鼠肾包膜下移植及药敏检测
作者：刘弘志 孙曾一 唐惟瑜 许立功 徐元鼎 印建芳
单位：210009南京江苏省肿瘤防治研究所(刘弘志)；上海医科大学肿瘤医院(孙曾一、唐惟瑜、许立功)，病理解剖教研室(徐元鼎、印建芳)
关键词：
中华医学杂志930321 本研究采用裸鼠肾包膜下移植法(SRCA)进行人癌原代移植与药敏检测，探讨该法对个体化治疗的意义及提高移植成功率之可能性。
一、材料与方法
1.肿瘤标本：取自上海医科大学肿瘤医院门诊患者(1988年5月～1990年12月)，每例患者1份标本。
2.实验动物：BALB/c-nu/nu裸小鼠，沪医实验动物单项合格证21-7号，上海生物制品研究所提供。每次实验用5～6周龄裸鼠20只，雌雄兼用。
, 百拇医药
3.裸鼠用药剂量(mg/kg)按文献〔1，2〕资料而定。环磷酰胺30.0，甲氨喋呤2.0，长春新硷0.2，阿霉素2.0，顺铂1.5，丝裂霉素0.4，5-氟脲嘧啶25.0，博莱霉素10.0，地塞米松10.0，鬼臼乙叉甙32.0及放线菌素D0.1。
4.肾包膜下移植：经快速切片初步确定病理类型后，选取瘤细胞丰富的无菌活组织标本尽快移植。切开裸鼠腹壁，用套管针将约1mm3的小瘤块种植于肾包膜下方，光镜测量移植瘤大小TS0〔3〕，单位为omμ(1omμ＝0.1mm)。每只裸鼠作双侧移植，每份标本计40个移植瘤。
5.药敏检测：移植后第3天，将裸鼠随机分为10组，每组2只。用药组8组，每组注射1种抗癌药，每日1次-×7天。对照组2组则注射生理盐水。移植后第10天处死动物，测TS10，计算移植瘤平均大小变化△TS(△TS＝△TS10-△TS0)〔4〕。
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6.组织学检验：移植时剩余瘤块与生长10天后的移植瘤均经石蜡切片作病理诊断，部分标本进行超微结构观察。
二、结果
共检测人癌标本21份，用裸鼠420只。其中胃癌、肺癌各5份、乳腺癌2份及恶性淋巴瘤9份。以对照组△TS≥-0.5omμ为标准〔5〕，药敏试验可评价率为86%(18/21)。
1.移植瘤生长情况：18次可评价实验共有移植瘤642个。其中对照组移植瘤127个，在生长第10天时呈正生长者63.0%(80/127)，零生长8.7%(11/127)，负生长者28.3%(36/127)。可见不同类型人体肿瘤在裸鼠体内的生长能力有差异。
2.移植瘤对药物的反应：以用药组△TS≤-1.0omμ为该药敏感标准〔6〕，18次可评价实验检测抗癌药11种共137次，其中敏感72次，不敏感65次。从药敏检测结果可看出，不同病理类型的种瘤对抗癌药的反应并不雷同，同类肿瘤的药物反应也有差别。
, 百拇医药
3.组织学检验：检查13次试验的383个移植瘤，光镜瘤细胞可见率为77.8%(298/383)。镜下可见移植瘤细胞增殖分裂活跃，肿瘤向宿主肾皮质浸润生长，未见炎细胞浸润；移植瘤细胞形态与原肿瘤大致相同。药物作用后，移植瘤细胞出现空泡变性、大核或多核、分裂相减少或消失，直至坏死与纤维化。有时可见少量形态未变的瘤细胞，分布于被杀伤的大片瘤细胞之中。
4.超微结构观察：可见人癌细胞线粒体大小不一、线粒体嵴不规则等恶性细胞特征，以及上皮细胞特有的桥粒结构。人癌移植瘤细胞的超微结构与原肿瘤基本一致。
三、讨论
裸鼠SRCA的实验周期为11天，比皮下移植法缩短一半以上。本法药敏检测结果重复性好，可用于临床。但因实验成本高昂、移植成功率低等原因，用于临床药敏预测的报道并不多见。本研究的体会如下：
1.移植成功率：裸鼠人癌异种移植的成功率平均为30%左右，乳癌与淋巴瘤仅有16%～17%〔7〕。本研究采用快速切片筛选标本，并将给药时间延至移植后第3天开始，提高了移植成功率。
, 百拇医药
2.国外多采用单侧SECA，但也有报道肯定双侧移植。国内亦有报道〔2〕，裸鼠双侧SRCA移植瘤生长速度相似，癌灶均匀，误差小。本研究采用双侧SRCA，节省实验费用近50%。
3.本实验肿瘤对化疗药物的反应差异较大，进一步证实化疗的个体化及治疗前进行药敏预测的重要性。
4.部分移移瘤中可见耐药瘤细胞。如能识别、分离与培养这些耐药细胞，对提高化疗疗效有重要意义。
本研究证实裸鼠肾包膜下移植瘤能保持原肿瘤的形态学特征，无宿主排斥反应，本法药敏结果有利于个体化治疗，值得进一步研究。
参考文献
1 Bogden AE,Ketton DE,Cobb WR,et al.A rapid screen-ing method for testing chemotherapeutic agents against human tumor xenogrfts.In:Houchens DP,Ovejera AA,eds.Proceedings of the symposium on the use of athymic(nude)mice in cancer research.New York:Gustav Fisher,1978:231-250.
, http://www.100md.com
2 张素胤，殳裕华，张家骝，等。8种抗癌药物对裸小鼠肾包膜下接种的人肺腺癌移植瘤(LAX-83)生长的影响。中国药理学报，1989，10：450.
3 Maenpaa,Kangas L,Gr
nroos M.Predictive testing of vulvar and cervical cancers to chemotherapy by the subrenal capsule assay.Eur J Cancer Clin Oncol,1985,21:1141.
4 Eedlstein MB,Smink T,Ruiter DJ,et al.Improvements and limitations of the subrenal capsule assay for deter-mining tumor sensitivity to cytostatic drugs.Eru J Cancer Clin Oncol ,1984,20:1549.
, 百拇医药
5 Stratton JA,Kucera PR,Micha JP,et al.The subrenal capsule tumor implant assay as a predictor of clinical re-sponse to chemotherapy:3 years of experience.Gynecol Oncol,1984,19:336.
6 Favre R,Marotia L,Drancourt M,et al.6-day subrenal capsule assey (SRCA)as a predictor of the response of advanced cancer to chemotherapy.Eur J Cancer Clin Oncol,1986,22:1171.
7 Sharkey FE,Fogh JM,Hajdu SI,et al Experience in sru-gical pathology with human tumor growth in the nude mouse.In:Fogh J,Giovanella BC,eds .The nude mice in experimental and clinical research.New York:Academic Press,1978:187-214.
8 Kurten C,Kau R,Kumazawa H,et al.The anti-tumor effect of in vitro tumor-stimulated autologous peripheral blood lymphocytes measured by the subrenal capsule as-say .Arch Otorhinloaryngol ,1989,246:105.
(收稿：1992-05-30 修回：1992-12-04), 百拇医药
单位：210009南京江苏省肿瘤防治研究所(刘弘志)；上海医科大学肿瘤医院(孙曾一、唐惟瑜、许立功)，病理解剖教研室(徐元鼎、印建芳)
关键词：
中华医学杂志930321 本研究采用裸鼠肾包膜下移植法(SRCA)进行人癌原代移植与药敏检测，探讨该法对个体化治疗的意义及提高移植成功率之可能性。
一、材料与方法
1.肿瘤标本：取自上海医科大学肿瘤医院门诊患者(1988年5月～1990年12月)，每例患者1份标本。
2.实验动物：BALB/c-nu/nu裸小鼠，沪医实验动物单项合格证21-7号，上海生物制品研究所提供。每次实验用5～6周龄裸鼠20只，雌雄兼用。
, 百拇医药
3.裸鼠用药剂量(mg/kg)按文献〔1，2〕资料而定。环磷酰胺30.0，甲氨喋呤2.0，长春新硷0.2，阿霉素2.0，顺铂1.5，丝裂霉素0.4，5-氟脲嘧啶25.0，博莱霉素10.0，地塞米松10.0，鬼臼乙叉甙32.0及放线菌素D0.1。
4.肾包膜下移植：经快速切片初步确定病理类型后，选取瘤细胞丰富的无菌活组织标本尽快移植。切开裸鼠腹壁，用套管针将约1mm3的小瘤块种植于肾包膜下方，光镜测量移植瘤大小TS0〔3〕，单位为omμ(1omμ＝0.1mm)。每只裸鼠作双侧移植，每份标本计40个移植瘤。
5.药敏检测：移植后第3天，将裸鼠随机分为10组，每组2只。用药组8组，每组注射1种抗癌药，每日1次-×7天。对照组2组则注射生理盐水。移植后第10天处死动物，测TS10，计算移植瘤平均大小变化△TS(△TS＝△TS10-△TS0)〔4〕。
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6.组织学检验：移植时剩余瘤块与生长10天后的移植瘤均经石蜡切片作病理诊断，部分标本进行超微结构观察。
二、结果
共检测人癌标本21份，用裸鼠420只。其中胃癌、肺癌各5份、乳腺癌2份及恶性淋巴瘤9份。以对照组△TS≥-0.5omμ为标准〔5〕，药敏试验可评价率为86%(18/21)。
1.移植瘤生长情况：18次可评价实验共有移植瘤642个。其中对照组移植瘤127个，在生长第10天时呈正生长者63.0%(80/127)，零生长8.7%(11/127)，负生长者28.3%(36/127)。可见不同类型人体肿瘤在裸鼠体内的生长能力有差异。
2.移植瘤对药物的反应：以用药组△TS≤-1.0omμ为该药敏感标准〔6〕，18次可评价实验检测抗癌药11种共137次，其中敏感72次，不敏感65次。从药敏检测结果可看出，不同病理类型的种瘤对抗癌药的反应并不雷同，同类肿瘤的药物反应也有差别。
, 百拇医药
3.组织学检验：检查13次试验的383个移植瘤，光镜瘤细胞可见率为77.8%(298/383)。镜下可见移植瘤细胞增殖分裂活跃，肿瘤向宿主肾皮质浸润生长，未见炎细胞浸润；移植瘤细胞形态与原肿瘤大致相同。药物作用后，移植瘤细胞出现空泡变性、大核或多核、分裂相减少或消失，直至坏死与纤维化。有时可见少量形态未变的瘤细胞，分布于被杀伤的大片瘤细胞之中。
4.超微结构观察：可见人癌细胞线粒体大小不一、线粒体嵴不规则等恶性细胞特征，以及上皮细胞特有的桥粒结构。人癌移植瘤细胞的超微结构与原肿瘤基本一致。
三、讨论
裸鼠SRCA的实验周期为11天，比皮下移植法缩短一半以上。本法药敏检测结果重复性好，可用于临床。但因实验成本高昂、移植成功率低等原因，用于临床药敏预测的报道并不多见。本研究的体会如下：
1.移植成功率：裸鼠人癌异种移植的成功率平均为30%左右，乳癌与淋巴瘤仅有16%～17%〔7〕。本研究采用快速切片筛选标本，并将给药时间延至移植后第3天开始，提高了移植成功率。
, 百拇医药
2.国外多采用单侧SECA，但也有报道肯定双侧移植。国内亦有报道〔2〕，裸鼠双侧SRCA移植瘤生长速度相似，癌灶均匀，误差小。本研究采用双侧SRCA，节省实验费用近50%。
3.本实验肿瘤对化疗药物的反应差异较大，进一步证实化疗的个体化及治疗前进行药敏预测的重要性。
4.部分移移瘤中可见耐药瘤细胞。如能识别、分离与培养这些耐药细胞，对提高化疗疗效有重要意义。
本研究证实裸鼠肾包膜下移植瘤能保持原肿瘤的形态学特征，无宿主排斥反应，本法药敏结果有利于个体化治疗，值得进一步研究。
参考文献
1 Bogden AE,Ketton DE,Cobb WR,et al.A rapid screen-ing method for testing chemotherapeutic agents against human tumor xenogrfts.In:Houchens DP,Ovejera AA,eds.Proceedings of the symposium on the use of athymic(nude)mice in cancer research.New York:Gustav Fisher,1978:231-250.
, http://www.100md.com
2 张素胤，殳裕华，张家骝，等。8种抗癌药物对裸小鼠肾包膜下接种的人肺腺癌移植瘤(LAX-83)生长的影响。中国药理学报，1989，10：450.
3 Maenpaa,Kangas L,Gr
nroos M.Predictive testing of vulvar and cervical cancers to chemotherapy by the subrenal capsule assay.Eur J Cancer Clin Oncol,1985,21:1141.4 Eedlstein MB,Smink T,Ruiter DJ,et al.Improvements and limitations of the subrenal capsule assay for deter-mining tumor sensitivity to cytostatic drugs.Eru J Cancer Clin Oncol ,1984,20:1549.
, 百拇医药
5 Stratton JA,Kucera PR,Micha JP,et al.The subrenal capsule tumor implant assay as a predictor of clinical re-sponse to chemotherapy:3 years of experience.Gynecol Oncol,1984,19:336.
6 Favre R,Marotia L,Drancourt M,et al.6-day subrenal capsule assey (SRCA)as a predictor of the response of advanced cancer to chemotherapy.Eur J Cancer Clin Oncol,1986,22:1171.
7 Sharkey FE,Fogh JM,Hajdu SI,et al Experience in sru-gical pathology with human tumor growth in the nude mouse.In:Fogh J,Giovanella BC,eds .The nude mice in experimental and clinical research.New York:Academic Press,1978:187-214.
8 Kurten C,Kau R,Kumazawa H,et al.The anti-tumor effect of in vitro tumor-stimulated autologous peripheral blood lymphocytes measured by the subrenal capsule as-say .Arch Otorhinloaryngol ,1989,246:105.
(收稿：1992-05-30 修回：1992-12-04), 百拇医药