晚期血吸虫病毒患者中性粒细胞吞噬功能的研究
作者：熊 勇 桂稀恩 杨自成 骆名其 胡 军
单位：430071 武汉湖北医科大学附属第二医院(熊 勇，桂稀恩，杨自成，骆名其)；江陵县血吸虫病防治研究所(胡 军)
关键词：
中华医学杂志930620 研究晚期血吸虫病(晚血)巨脾型及脾切除患者嗜中性白细胞(polymorphnuclear neutrophils，PMN)吞噬功能，对探讨晚血患者抗感染免疫及脾切除对其影响有重要意义。现将我们对此方面的研究报道如下。
一、材料与方法
1.研究对象：晚血患者67例，其中巨脾型29例，男17例，女12例，年龄43.6±14.5岁；脾切除患者38例，男27例，女11例，年龄41.7±10.8岁；正常人39例，男20例，女19例，年龄33.7±6.8岁。全部研究对象HBsAG、抗HBc、抗HCV阴性。
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2.PMN吞噬、杀菌功能及血清调理作用的检测：参照Harvey等80年代建立的同位素技术检测PMN吞噬、杀菌功能的实验方法〔1，2〕。(1)PMN悬液及靶菌悬液制备：分离静脉血PMN，以培养液(RPMI1640)调整至2×106/ml；白色念珠菌37℃生长24小时为靶菌，调整至8×106/ml。(2)吞噬功能：实验管含待检者PMN悬液0.4ml、靶菌0.5ml、待检者血清0.05ml、培养液0.05ml；对照管含靶菌0.5ml、待检者血清0.05ml、培养液0.45ml。置入37℃水浴恒温振荡器孵育，每10分钟颠倒混匀1次，50分钟完成第1次孵育。从各管中取0.1ml加入培养板，另加培养液0.1ml、3H-Uridin(7×105Bq/ml)0.01ml，37℃孵育50min，完成第2次孵育。用多头细胞收集器收获后液内测量分钟计数(cpm)。吞噬指数(PI)按以下公式计算：
PI＝(1-(试验管cpm)/(对照管cpm))×5
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(3)杀菌功能：同上完成第1次孵育，超声处理50S(3mA)以释放吞入的靶菌，以下步骤同PI检测。杀菌指数(KI)计算方法同PI。(4)血清调理作用：患者血清与正常人PMN或正常血清与晚血PMN混合孵育，所测PI、KI与正常血清混合正常PMN所测PI、KI进行比较。
3.血清纤维结合蛋白(Fn)及白细胞计数和分类：采用免疫单向扩散法检测Fn浓度。按常规方法进行白细胞计数及分类。
二、结果
1.晚血患者PMN吞噬杀菌功能及脾切除对其影响：37例晚血患者PMN的PI为2.4±0.6、KI为2.0±0.5，均明显低于20例正常人PI(3.3±0.4，P<0.01)及KI(3.0±0.4，P<0.01)；但巨脾患者(19例)的PI(2.4±0.6)及KI(2.0±0.4)与切脾患者(18例)的PI(2.5±0.7)及KI(2.1±0.7)比较，差异无显著意义(P>0.05)。
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2.血清调理试验：为探讨晚血患者吞噬功能障碍是PMN缺陷或血清调理作用降低所致，进行以下试验：(1)22例正常人PMN在晚血患者血清作用下PI(2.7±0.7)及KI)2.2±0.7)明显低于正常人PMN在自身血清调理下的PI(3.3±0.4)及KI(2.9±0.4)，两项指标均P<0.01。(2)12例晚血患者PMN在正常血清调理下的PI为3.3±0.5，与26例正常人的PMN在自身血清调理下的PI值(3.3±0.4)比较差别无显著意义(P>0.05)。(3)分别将11例巨脾患者及切脾患者血清与正常人PMN孵育检测PI及KI，前者PI为2.7±0.5，KI为2.2±0.6，后者PI为2.7±0.9，KI为2.3±0.8，两项指标均P>0.05。
3.晚血患者血清Fn浓度及脾切除对其影响：43例晚血患者Fn为0.09±0.07g/L，30例正常人Fn为0.21±0.06g/L，P<0.01；切脾患者(21例)Fn为0.12±0.08g/L，巨脾患者(22例)Fn为0.05±0.04g/L，P<0.05。
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4.切脾对PMN的影响：切脾患者(26例)的PMN为4.0±1.6×109/L，巨脾患者(21例)患者PMN为2.5±1.6×109/L，P<0.01。
三、讨论
本研究表明，巨脾型晚血患者PMN吞噬及杀菌功能明显低于正常人。由于晚血患者PMN在正常血清调理下吞噬功能可恢复正常，而正常人PMN在晚血患者血清作用下吞噬功能明显降低，揭示晚血患者吞噬功能障碍的主要原因是血清调理作用下降而不是PMN本身的缺陷。吞噬及杀菌功能障碍可能是晚血患者并发细菌感染的重要原因之一。
正常脾脏切除后Tuftsin生成障碍，机体抗细菌感染功能下降，凶险感染发生率增高，因此应对切除正常脾脏(如脾外伤)持慎重态度。本文资料表明，与外伤切脾患者不同，晚血巨脾患者脾切除后吞噬杀菌功能及血清调理作用未进一步下降。吞噬作用受多种因素影响，Tuftsin只是其中之一。Fn是一种非抗体非补体的重要调理素，巨脾切除后Fn浓度回升。据文献报道，晚血切脾患者抗体、补体未下降，红细胞C3b花环形成率增加〔3～5〕。这些都可能是脾切除后晚血患者吞噬杀菌功能未进一步受损的原因。此外，切除巨脾能有效解除脾功能亢进，PMN数量回升，这对改善患者吞噬功能也有不可忽视的作用。
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本研究得到张治道、李奉资助，特此致谢。
参考文献
1 Harvey DM,Sheppard KJ,Fletcher J.A method for measuring rate of neutrophil phagocytosis of staphylococcus epidermidis or Candida guillier mondii using uptak of tritiated uridine.J Immunol Meth,1986,93:259.
2 Husseini RH,Hoadley ME,Hutchinson JJP,et al.Intracellular Killing of Candida albicans byhuman polymorphonuclear leucocytes:comparison of three methods of assessment.J Immunol Meth,1985,81:215.
3 王锡麟，周岳明.血吸虫病患者脾切除后免疫功能的探讨.中华外科杂志，1988，26：483.
4 李锡官.晚期血吸虫病血清补体水平的检测及其临床意义.南京医学院学报，1988，8：123.
5 马北了，桂稀恩，史海安.脾切除对巨脾型晚期血吸虫病患者免疫功能的影响.腹部外科杂志，1991，4：156.
(收稿：1992-10-24 修回：1993-03-29), 百拇医药
单位：430071 武汉湖北医科大学附属第二医院(熊 勇，桂稀恩，杨自成，骆名其)；江陵县血吸虫病防治研究所(胡 军)
关键词：
中华医学杂志930620 研究晚期血吸虫病(晚血)巨脾型及脾切除患者嗜中性白细胞(polymorphnuclear neutrophils，PMN)吞噬功能，对探讨晚血患者抗感染免疫及脾切除对其影响有重要意义。现将我们对此方面的研究报道如下。
一、材料与方法
1.研究对象：晚血患者67例，其中巨脾型29例，男17例，女12例，年龄43.6±14.5岁；脾切除患者38例，男27例，女11例，年龄41.7±10.8岁；正常人39例，男20例，女19例，年龄33.7±6.8岁。全部研究对象HBsAG、抗HBc、抗HCV阴性。
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2.PMN吞噬、杀菌功能及血清调理作用的检测：参照Harvey等80年代建立的同位素技术检测PMN吞噬、杀菌功能的实验方法〔1，2〕。(1)PMN悬液及靶菌悬液制备：分离静脉血PMN，以培养液(RPMI1640)调整至2×106/ml；白色念珠菌37℃生长24小时为靶菌，调整至8×106/ml。(2)吞噬功能：实验管含待检者PMN悬液0.4ml、靶菌0.5ml、待检者血清0.05ml、培养液0.05ml；对照管含靶菌0.5ml、待检者血清0.05ml、培养液0.45ml。置入37℃水浴恒温振荡器孵育，每10分钟颠倒混匀1次，50分钟完成第1次孵育。从各管中取0.1ml加入培养板，另加培养液0.1ml、3H-Uridin(7×105Bq/ml)0.01ml，37℃孵育50min，完成第2次孵育。用多头细胞收集器收获后液内测量分钟计数(cpm)。吞噬指数(PI)按以下公式计算：
PI＝(1-(试验管cpm)/(对照管cpm))×5
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(3)杀菌功能：同上完成第1次孵育，超声处理50S(3mA)以释放吞入的靶菌，以下步骤同PI检测。杀菌指数(KI)计算方法同PI。(4)血清调理作用：患者血清与正常人PMN或正常血清与晚血PMN混合孵育，所测PI、KI与正常血清混合正常PMN所测PI、KI进行比较。
3.血清纤维结合蛋白(Fn)及白细胞计数和分类：采用免疫单向扩散法检测Fn浓度。按常规方法进行白细胞计数及分类。
二、结果
1.晚血患者PMN吞噬杀菌功能及脾切除对其影响：37例晚血患者PMN的PI为2.4±0.6、KI为2.0±0.5，均明显低于20例正常人PI(3.3±0.4，P<0.01)及KI(3.0±0.4，P<0.01)；但巨脾患者(19例)的PI(2.4±0.6)及KI(2.0±0.4)与切脾患者(18例)的PI(2.5±0.7)及KI(2.1±0.7)比较，差异无显著意义(P>0.05)。
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2.血清调理试验：为探讨晚血患者吞噬功能障碍是PMN缺陷或血清调理作用降低所致，进行以下试验：(1)22例正常人PMN在晚血患者血清作用下PI(2.7±0.7)及KI)2.2±0.7)明显低于正常人PMN在自身血清调理下的PI(3.3±0.4)及KI(2.9±0.4)，两项指标均P<0.01。(2)12例晚血患者PMN在正常血清调理下的PI为3.3±0.5，与26例正常人的PMN在自身血清调理下的PI值(3.3±0.4)比较差别无显著意义(P>0.05)。(3)分别将11例巨脾患者及切脾患者血清与正常人PMN孵育检测PI及KI，前者PI为2.7±0.5，KI为2.2±0.6，后者PI为2.7±0.9，KI为2.3±0.8，两项指标均P>0.05。
3.晚血患者血清Fn浓度及脾切除对其影响：43例晚血患者Fn为0.09±0.07g/L，30例正常人Fn为0.21±0.06g/L，P<0.01；切脾患者(21例)Fn为0.12±0.08g/L，巨脾患者(22例)Fn为0.05±0.04g/L，P<0.05。
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4.切脾对PMN的影响：切脾患者(26例)的PMN为4.0±1.6×109/L，巨脾患者(21例)患者PMN为2.5±1.6×109/L，P<0.01。
三、讨论
本研究表明，巨脾型晚血患者PMN吞噬及杀菌功能明显低于正常人。由于晚血患者PMN在正常血清调理下吞噬功能可恢复正常，而正常人PMN在晚血患者血清作用下吞噬功能明显降低，揭示晚血患者吞噬功能障碍的主要原因是血清调理作用下降而不是PMN本身的缺陷。吞噬及杀菌功能障碍可能是晚血患者并发细菌感染的重要原因之一。
正常脾脏切除后Tuftsin生成障碍，机体抗细菌感染功能下降，凶险感染发生率增高，因此应对切除正常脾脏(如脾外伤)持慎重态度。本文资料表明，与外伤切脾患者不同，晚血巨脾患者脾切除后吞噬杀菌功能及血清调理作用未进一步下降。吞噬作用受多种因素影响，Tuftsin只是其中之一。Fn是一种非抗体非补体的重要调理素，巨脾切除后Fn浓度回升。据文献报道，晚血切脾患者抗体、补体未下降，红细胞C3b花环形成率增加〔3～5〕。这些都可能是脾切除后晚血患者吞噬杀菌功能未进一步受损的原因。此外，切除巨脾能有效解除脾功能亢进，PMN数量回升，这对改善患者吞噬功能也有不可忽视的作用。
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本研究得到张治道、李奉资助，特此致谢。
参考文献
1 Harvey DM,Sheppard KJ,Fletcher J.A method for measuring rate of neutrophil phagocytosis of staphylococcus epidermidis or Candida guillier mondii using uptak of tritiated uridine.J Immunol Meth,1986,93:259.
2 Husseini RH,Hoadley ME,Hutchinson JJP,et al.Intracellular Killing of Candida albicans byhuman polymorphonuclear leucocytes:comparison of three methods of assessment.J Immunol Meth,1985,81:215.
3 王锡麟，周岳明.血吸虫病患者脾切除后免疫功能的探讨.中华外科杂志，1988，26：483.
4 李锡官.晚期血吸虫病血清补体水平的检测及其临床意义.南京医学院学报，1988，8：123.
5 马北了，桂稀恩，史海安.脾切除对巨脾型晚期血吸虫病患者免疫功能的影响.腹部外科杂志，1991，4：156.
(收稿：1992-10-24 修回：1993-03-29), 百拇医药