肿瘤及肿瘤化疗患者外周血单个核细胞诱生γ干扰素的测定
作者：颉东旭 于 兰 莫蓬琼 肖永良 张 辉 周红梅
单位：730050兰州部队总医院实验科
关键词：
中华医学杂志930717 γ-干扰素(interferon-gamma,IFNγ)是高活性、多功能的诱生蛋白，检测各种肿瘤患者外周血单个核细胞诱生的IFNγ，对探讨肿瘤发病机制及临床诊治具有重要作用。我们利用国内已有的IFNγ单克隆抗体，建立了人IFNγ的免疫放射量度分析，并检测了正常人，肿瘤及肿瘤化疗患者的外周血单个核细胞诱生IFNγ的量。现报道如下。
一、资料和方法
1.人重组IFNγ及其单克隆抗体A3，系上海第二军医大学微生物教研室赠。A3的中和活性为4×105IU/mg。IFNγ比活性为2×107IU/mg，纯度大于99%。29例正常对照系体检的健康人；34例未化疗的肿瘤患者及化疗在3个疗程以上肿瘤患者19例，均有病理报告所证实。
, http://www.100md.com
2.免疫放射量度分析：在试管中顺序加入A35μg；500μCi125I，50μg氯铵T，2分钟后，加入500μg偏重亚硫酸钠，搅动2分钟。然后用G-25柱洗脱纯化，收集第一峰，加入1%苯磺酸。
3.测定及数据处理：将A3倍比稀释，包被96孔板，4℃过夜，加入不同含量的重组IFN-γ，孵育后，加入不同稀释度的125I-A3，反应后用γ计数器测定各孔计数，选择最适工作滴度。然后测定标本，每组均做复孔，并设空白对照，以浓度为自变量，计数为因变量，进行曲线回归优选，用优选函数，计算标本中的IFNγ含量。
4.方法学考核：(1)125I利用率及标记蛋白活性判定：取未上柱前标记混合物2μl及第一峰最高管10μl，各加入10%三氯醋酸1ml，充分摇匀，离心测总放射性及沉淀的放射性。(2)将高含量样品作不同倍数稀释，添加标准品，计算回收率，批内及批间变异系数，交叉反应选用IFN-α2b(美国Schering公司产品，IFNβ来自中国医学科学院)。
, 百拇医药
5.IFNγ诱生：空腹抽取肝素抗凝血2ml，用Ficoll剂分离单个核细胞，加入10%甲基二代氨基甲酸铵，PRMI1640，调细胞数目至1×106/ml，培养液内含25U/ml的PHA(我科自制)，37℃培养72小时，收集上清液冻存。
6.主要化疗药物及用量：19例肿瘤化疗患者包括手术后和未手术患者，主要化疗药物为环磷酰胺600～800mg；阿霉素20～40mg，甲基苄肼50～100mg；强的松20mg，8～10天为一疗程，所选化疗患者均为3个疗程以上。34例未化疗的肿瘤患者，没有服用上述任何一种药物。
二、结果及讨论
IFNγ免疫放射量度分析优选函数为：lny＝BlnX+A(A、B为常数)，优选时由计算机给出，标准曲线相关系数：γ＝0.985。125I利用率为67%，纯化后三氯醋酸沉淀率为96%，符合放免测定要求。125I-A3比放射活性2.38MBq/mg。线线回收试验符合优选函数，回收率为1±0.17。平均批内变异系数为7.40%，批间变异系数为17.3%。检测范围为1×102～2.5×105IU/L，与IFNα，IFNβ均不交叉。目前国外常用的IFNγ固相免疫放射分析检测盒用聚苯乙烯小球作固相载体，最低可检测2×102IU/L，批内变异系数为7.13%，回收率为1±0.18。我们的结果与此相近。
, http://www.100md.com
检测人外周血单个核细胞诱生IFNγ量表明，29例正常人为(x±s)：(2.76±1.05)×104IU/L；34例未化疗的肿瘤病人为(3.11±1.33)×104IU/L；19例化疗病人为(3.74±3.35)×103IU/L。正常人和未化疗的肿瘤病人外周血单个核细胞诱生IFNγ量相近(P>0.05)，肿瘤病人的外周血单个核细胞诱生IFNγ的能力并无异常。Commes等[J Clin Immunol,1989,9:65]对多发性骨髓瘤患者的研究表明，这类患者与正常人相比，外周血单个核细胞诱生IFNγ的能力也无异常。
多次化疗患者单个核细胞产生IFNγ的量显著低于正常人及未化疗的肿瘤患者(P<0.05)，已知IFNγ主要生产细胞为CD+4，CD+8，多次放疗和化疗的患者血液中的白细胞显著下降，因此，化疗可能使得CD+4、CD+8细胞受到严重破坏。
(收稿：1992-08-05 修回：1993-03-28), 百拇医药
单位：730050兰州部队总医院实验科
关键词：
中华医学杂志930717 γ-干扰素(interferon-gamma,IFNγ)是高活性、多功能的诱生蛋白，检测各种肿瘤患者外周血单个核细胞诱生的IFNγ，对探讨肿瘤发病机制及临床诊治具有重要作用。我们利用国内已有的IFNγ单克隆抗体，建立了人IFNγ的免疫放射量度分析，并检测了正常人，肿瘤及肿瘤化疗患者的外周血单个核细胞诱生IFNγ的量。现报道如下。
一、资料和方法
1.人重组IFNγ及其单克隆抗体A3，系上海第二军医大学微生物教研室赠。A3的中和活性为4×105IU/mg。IFNγ比活性为2×107IU/mg，纯度大于99%。29例正常对照系体检的健康人；34例未化疗的肿瘤患者及化疗在3个疗程以上肿瘤患者19例，均有病理报告所证实。
, http://www.100md.com
2.免疫放射量度分析：在试管中顺序加入A35μg；500μCi125I，50μg氯铵T，2分钟后，加入500μg偏重亚硫酸钠，搅动2分钟。然后用G-25柱洗脱纯化，收集第一峰，加入1%苯磺酸。
3.测定及数据处理：将A3倍比稀释，包被96孔板，4℃过夜，加入不同含量的重组IFN-γ，孵育后，加入不同稀释度的125I-A3，反应后用γ计数器测定各孔计数，选择最适工作滴度。然后测定标本，每组均做复孔，并设空白对照，以浓度为自变量，计数为因变量，进行曲线回归优选，用优选函数，计算标本中的IFNγ含量。
4.方法学考核：(1)125I利用率及标记蛋白活性判定：取未上柱前标记混合物2μl及第一峰最高管10μl，各加入10%三氯醋酸1ml，充分摇匀，离心测总放射性及沉淀的放射性。(2)将高含量样品作不同倍数稀释，添加标准品，计算回收率，批内及批间变异系数，交叉反应选用IFN-α2b(美国Schering公司产品，IFNβ来自中国医学科学院)。
, 百拇医药
5.IFNγ诱生：空腹抽取肝素抗凝血2ml，用Ficoll剂分离单个核细胞，加入10%甲基二代氨基甲酸铵，PRMI1640，调细胞数目至1×106/ml，培养液内含25U/ml的PHA(我科自制)，37℃培养72小时，收集上清液冻存。
6.主要化疗药物及用量：19例肿瘤化疗患者包括手术后和未手术患者，主要化疗药物为环磷酰胺600～800mg；阿霉素20～40mg，甲基苄肼50～100mg；强的松20mg，8～10天为一疗程，所选化疗患者均为3个疗程以上。34例未化疗的肿瘤患者，没有服用上述任何一种药物。
二、结果及讨论
IFNγ免疫放射量度分析优选函数为：lny＝BlnX+A(A、B为常数)，优选时由计算机给出，标准曲线相关系数：γ＝0.985。125I利用率为67%，纯化后三氯醋酸沉淀率为96%，符合放免测定要求。125I-A3比放射活性2.38MBq/mg。线线回收试验符合优选函数，回收率为1±0.17。平均批内变异系数为7.40%，批间变异系数为17.3%。检测范围为1×102～2.5×105IU/L，与IFNα，IFNβ均不交叉。目前国外常用的IFNγ固相免疫放射分析检测盒用聚苯乙烯小球作固相载体，最低可检测2×102IU/L，批内变异系数为7.13%，回收率为1±0.18。我们的结果与此相近。
, http://www.100md.com
检测人外周血单个核细胞诱生IFNγ量表明，29例正常人为(x±s)：(2.76±1.05)×104IU/L；34例未化疗的肿瘤病人为(3.11±1.33)×104IU/L；19例化疗病人为(3.74±3.35)×103IU/L。正常人和未化疗的肿瘤病人外周血单个核细胞诱生IFNγ量相近(P>0.05)，肿瘤病人的外周血单个核细胞诱生IFNγ的能力并无异常。Commes等[J Clin Immunol,1989,9:65]对多发性骨髓瘤患者的研究表明，这类患者与正常人相比，外周血单个核细胞诱生IFNγ的能力也无异常。
多次化疗患者单个核细胞产生IFNγ的量显著低于正常人及未化疗的肿瘤患者(P<0.05)，已知IFNγ主要生产细胞为CD+4，CD+8，多次放疗和化疗的患者血液中的白细胞显著下降，因此，化疗可能使得CD+4、CD+8细胞受到严重破坏。
(收稿：1992-08-05 修回：1993-03-28), 百拇医药