当前位置: 首页 > 期刊 > 《中华医学杂志》 > 1993年第10期
编号:10226537
加压素受体拮抗剂对鼠缺血性脑损伤保护作用研究

     作者:刘新峰 金泳清

    单位:210002南京部队南京总医院神经内科

    关键词:

    中华医学杂志931018 我们以往的研究提示,脑内加压素水平的升高,可促进缺血性脑水肿形成[1]。本研究采用侧脑室微量注射特异性V1、V2及V1/V2加压素受体拮抗剂技术,观察了它们对缺血性脑水肿、各脑区cAMP含量及Na+、K+-ATP酶活力的影响。以探讨加压素受体拮抗剂对缺血性脑损伤的作用和机理。

    一、材料和方法

    1.加压素V1受体拮抗剂[d(CH2)5Tyr(Me)AVP]、V2受体拮抗剂[d(CH2)5 DⅠle2, DⅠle4, Ala(NH2)9AVP]、V1/V2受体拮抗剂[d(CH2)5 Tyr(Et)DAVP]均由美国Manning M教授馈赠。ATP为美国Sigma公司产品,批号A-6144。

    2.实验动物采用蒙古种沙士鼠,用戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉后,取颈正中切口,分离出双侧颈总动脉。V1、V2及V1/V2组在结扎双侧颈总动脉缺血30分钟,分别向侧脑室注射V1受体拮抗剂5μg、V2受体拮抗剂5μgV1/V2受体拮抗剂10μg(均溶于6μl生理盐水中),继续缺血至120分种,快速断头取脑。缺血对照组结扎双侧颈总动脉缺血30分钟时,向侧脑室注射6μl生理盐水,继续缺血至120分钟。正常对照组仅作同样的手术操作,但不结扎双侧颈总动脉。

    3.采用Marmarou等[2]报道的溴代苯-煤油密度梯度法测定大脑皮质比重,以判断脑水肿情况。脑组织Na+、K+-ATP酶海力测定根据MacMillan[3]和李建新等[4]报道的方法进行,蛋白定量采用,改良劳氏法。脑组织cAMP含量采用放射免疫分析法测定,药盒上由上海中医学院同位素室提供。

    4.数据以±S表示,采用t检验,秩和检验及相关回归分析。

    二、结果

    1.加压素受体拮抗剂对缺血性脑水肿的影响:V2、V1/V2拮抗剂组额、枕叶皮质比重与缺血对照组比较显著增高(P〈0.01),即缺血性脑水肿明显减轻。而V1拮抗组额、枕叶质比重与缺血对照组比无明显差异(P〉0.05),但显著低于正常对照组(P〈0.01),即V1受体拮抗剂对缺血性脑水肿没有影响。

    2.加压素受体拮抗剂对各脑区cAMP的影响:缺血性脑皮质、下丘脑和纹状体cAMP含量分别为3.5±0.4、3.97±0.5及3.4±0.4pmol/mg均显著低于正常对照组的2.0±0.3、2.4±0.4±及2.1±0.4pmol/mg(P〈0.05或P〈0.01),而无明显缺血的桥延部0.4pmol/mg(P〈0.05或P〈0.01),而无明显缺血差异桥延部cAMP含量与正常对照组比较无明显差异(P〉0.05)。测脑室注射V2拮抗剂组的皮质、纹状体、下丘脑、桥延部cAMP含量分别为2.1±0.2、2.6±0.3、2.8±0.3及2.2±0.2pmol/mg,V1/V2组的皮质、下丘脑和桥延分别为2.1±0.3、3.0±0.4及2.1±0.3pmol/mg,与相应缺血对照组比较均显著降低(P〈0.05或P〈0.01)。而V1拮抗剂组各脑区cAMP含量与缺血对照组比较无明显差异(P〉0.05),但除桥延以外的其它3个脑区cAMP均显著高于正常对照组。

    3.加压素受体拮抗剂对脑组织Na+、K+-ATP酶活力的影响:V2、V1/V2拮抗剂组的额、枕皮质Na+、K+-ATP酶活力分别为188.5±8.9、173.2±9.2及175.8±7.5、178.3±10.5nmol pi*min-1/mg蛋白;缺血对照组额皮质、枕皮质分别为139.86.7及140.5±8.3nmol pi*min-1/mg蛋白,二者比较差异显著(P〈0.05);但两组的枕皮质及V1/V2组的额皮质的Na+、K+-ATP酶活力仍显著低于正常对照组水平(额、枕皮质分别为204.2±9.9及209.7±9.1nmol pi*min-1/mg蛋白,P〈0.05,P〈0.01)。而V1拮抗剂组额、枕皮质的Na+、K+-ATP酶活力分别为146.7±8.7及138.9±7.7nmol pi*min-1/mg蛋白,与缺血对照组比较无明显差异(P〉0.05)。

    三、讨论

    1.加压素受体主要分为Ca2+介导的V1受体和cAMP介导的V2受体,前者主要分布于血管平滑肌,后者主要分布于肾脏。但最近的研究表明,V1、V2受体的分布可能不只局限于血管平滑肌和肾脏,如V2受体就可能存在于大脑的某些脑区[5]。本实验观察到,给动物侧脑室注射V2和V1/V2受体拮抗剂后,缺血性脑水肿明显减轻;而同样应用V1受体拮抗剂却对缺血性脑水肿没有影响。提示特异性的V2受体拮抗剂对缺血民生脑损伤有保护作用,且也支持脑内可能存在加压素受体的推论,表明脑内可能以V2受体为主,而与V1受体的关系也许不大。

    2.cAMP是介导加压素V2受体作用的第二信使,本实验结果提示,侧脑室注射V2、V1/V2受体拮抗剂后,各脑区cAMP均显著低于缺血对对照组水平,而V1受体拮抗剂对脑区cAMP无明显影响,可见特异性V2受体拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用可能是通过第二信使cAMP介导的细胞内机制的变化来实现的。

    3.缺血性脑损伤的发生,与脑细胞膜Na+、K+-ATP酶活力的降低密切相关。本实验也观察到,缺血性脑皮质的Na+、K+-ATP酶活力显著降低,而V2、V1/V2拮抗剂能显著提高缺血脑组织的Na+、K+-ATP酶活力。脑组织的Na+、K+-ATP酶主要存在于脑细胞膜上,其活力的升高,可能使异常的离子泵功能有所修复,从而对缺血性脑损伤起到一定的保护作用。

    为此,特异性的加压素V2受体拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用的机理可能是通过对V2受体的拮抗,使cAMP生成减少而导致细胞内机制的改变,产生保护脑细胞膜Na+、K+-ATP酶活力的效应,从而发挥其对缺血脑损伤的保护作用。

    参考文献

    1 刘新峰,史荫绵.精氨酸加压素与沙土鼠急性缺血性脑水肿实验研究(1).中华神经精神科杂志,1992,25:232.

    2 Marmarou A, Po U W, Shulman K, et al. A simple gravimetric technique for measurement of cerebral edema. J Neurosurg, 1978, 49:530.

    3 Macmillan V. Cerebral Na+、K+-ATPase activity during exposure to and recovery from acute ischemia. J Cereb Flow Metab, 1982, 2:457.

    4 李建新,魏尧梅.人红细胞膜Na+、K+-ATP酶的研究.第二军医大学学报,1983,4:275.

    5 Cornett LE, Dorsa DM. Vasopressin receptor subtypes in dorsal hindbrain and renal mudulla. Peptides, 1985, 6:85

    (收稿:1992-12-16 修回:1993-07-10)
    婵犵數濮烽弫鎼佸磿閹寸姴绶ら柦妯侯棦濞差亝鍋愰悹鍥皺椤︻厼鈹戦悩缁樻锭婵炲眰鍊濋、姘舵焼瀹ュ棛鍘卞┑鐐村灥瀹曨剟寮搁妶鍡愪簻闁冲搫鍟崢鎾煛鐏炲墽鈽夐柍钘夘樀瀹曪繝鎮欏顔介獎闂備礁鎼ˇ顐﹀疾濠婂吘娑㈠礃椤旇壈鎽曞┑鐐村灦鑿ら柡瀣叄閻擃偊宕堕妸锕€鐨戦梺绋款儐閹歌崵绮嬮幒鏂哄亾閿濆簼绨介柛鏃撶畱椤啴濡堕崱妤€娼戦梺绋款儐閹瑰洭寮诲☉銏″亹鐎规洖娲㈤埀顒佸笚娣囧﹪宕f径濠傤潓闂佸疇顫夐崹鍨暦閸洖鐓橀柣鎰靛墰娴滄瑩姊虹拠鏌ヮ€楃紒鐘茬Ч瀹曟洟宕¢悙宥嗙☉閳藉濮€閻橀潧濮︽俊鐐€栫敮鎺椝囬鐐村€堕柨鏃傜摂濞堜粙鏌i幇顒佲枙闁稿孩姊归〃銉╂倷閸欏鏋犲銈冨灪濡啫鐣烽妸鈺婃晣闁绘劙娼ч幖绋库攽閻樺灚鏆╅柛瀣█楠炴捇顢旈崱妤冪瓘闂佽鍨奸悘鎰洪鍕吅闂佺粯锚閸氣偓缂佹顦靛娲箰鎼达絿鐣甸梺鐟板槻椤戝鐣烽悽绋块唶婵犮埄浜濆Λ鍐极閸屾粎椹抽悗锝庝簻婵″ジ姊绘担鍛婃喐闁稿鍋ら獮鎰板箮閽樺鎽曢梺鍝勬储閸ㄥ綊鐛姀銈嗙厸闁搞儮鏅涘瓭婵犵鈧尙鐭欓柡宀嬬秮婵偓闁宠桨鑳舵禒鈺冪磽閸屾氨孝闁挎洦浜悰顔界節閸ャ劍娅㈤梺缁樓圭亸娆撴偪閳ь剚淇婇悙顏勨偓鏍箰妤e啫纾婚柣鏂挎憸椤╃兘鏌熼幍顔碱暭闁抽攱鍨块弻娑㈡晜鐠囨彃绗岄梺鑽ゅ枑閸f潙煤椤忓嫀褔鏌涢妷顔惧帥婵炶偐鍠栧娲礃閸欏鍎撻梺鐟板暱濮橈妇鎹㈠鑸碘拻濞达絽鎳欒ぐ鎺戝珘妞ゆ帒鍊婚惌娆撴煙閻戞﹩娈曢柛濠傜仛閵囧嫰寮崹顔规寖缂佺偓鍎抽妶鎼佸蓟閿熺姴绀冮柕濞垮劗閸嬫挾绮欓幐搴㈢槑濠电姷鏁告慨顓㈠箯閸愵喖绀嬮柛顭戝亞閺夊綊鏌f惔銏╁晱闁哥姵鐗犻幃銉╂偂鎼达絾娈惧┑顔姐仜閸嬫挸鈹戦埄鍐憙妞わ附濞婇弻娑㈠箻閺夋垹浠哥紓浣虹帛缁嬫捇鍩€椤掍胶鈯曞畝锝呮健閹本绻濋崑鑺ユ閹晠宕f径瀣瀾闂備浇妗ㄧ欢锟犲闯閿濆鈧線寮撮姀鈩冩珕闂佽姤锚椤︿粙鍩€椤掍胶鈽夐柍瑙勫灴閺佸秹宕熼锛勬崟濠电姭鎷冮崨顔界彧缂備緡鍠楅悷锔炬崲濠靛鐐婇柕濞у啫绠版繝鐢靛О閸ㄧ厧鈻斿☉銏℃櫇闁靛牆顦Ч鏌ユ煛閸モ晛鏋戦柛娆忕箻閺岋綁鎮㈤悡搴濆枈濠碘槅鍨崑鎾绘⒒娴h姤銆冪紒鈧担铏圭煋闁圭虎鍠楅崑鈺傜節闂堟侗鍎忕紒鈧崘鈹夸簻妞ゆ挾鍠庨悘锝夋煙鐎电ǹ鍘存慨濠勭帛閹峰懐绮电€n亝鐣伴梻浣告憸婵敻骞戦崶褏鏆︽繝闈涳功閻も偓濠电偞鍨兼ご鎼佸疾閿濆洨纾介柛灞剧懅閸斿秴鐣濋敐鍛仴闁糕斂鍨藉顕€宕奸悢鍝勫箺闂備胶鎳撻顓㈠磿閹寸偟鐟规繛鎴欏灪閻撴洟鏌¢崒姘变虎闁哄棴缍侀弻鈥崇暆鐎n剛鐦堥悗瑙勬礃鐢帡锝炲┑瀣垫晣闁绘﹢娼ч獮鈧紓鍌氬€搁崐鐑芥倿閿曞倶鈧啴宕ㄥ銈呮喘閺屽棗顓奸崨顖氬Е婵$偑鍊栫敮鎺楀窗濮橆兗缂氶柟閭﹀枤绾惧吋銇勯弮鍥т汗缂佺姴顭烽弻銊モ攽閸繀妲愰梺杞扮閸熸潙鐣烽幒鎴僵闁告鍋為幉銏ゆ⒒娴h棄鍚瑰┑鐐╁亾缂傚倸鍊归懝楣冨煝瀹ュ鏅查柛銉㈡櫇閻撳姊洪崜鑼帥闁哥姵鎹囬崺鈧い鎺嶇缁楁帗銇勯锝囩疄妞ゃ垺锕㈤幃鈺咁敃閿濆孩缍岄梻鍌氬€风欢姘缚瑜嶇叅闁靛牆鎮垮ú顏勎╅柍杞拌兌閸旓箑顪冮妶鍡楃瑨闁稿妫濆銊╂偋閸垻顔曟繝銏f硾椤戝洤煤鐎电硶鍋撶憴鍕8闁搞劏濮ゆ穱濠囧醇閺囩偟鍊為梺闈浨归崕鐑樺閺囥垺鐓熼柣鏂挎憸閻苯顭胯椤ㄥ牓寮鍢夋棃宕崘顏嗏棨濠电姰鍨奸崺鏍礉閺嶎厼纾婚柨婵嗩槹閻撴洟鏌曟径妯虹仩妞も晩鍓欓埥澶愬箻閻熸壆姣㈢紓浣介哺鐢岣胯箛娑樜╃憸蹇涙偩婵傚憡鈷戠憸鐗堝俯濡垵鈹戦悙鈺佷壕闂備浇顕栭崰妤冨垝閹捐绠板┑鐘插暙缁剁偛顭跨捄铏圭伇婵﹦鍋撶换婵嬫偨闂堟稐绮跺銈嗘处閸樹粙骞堥妸锔哄亝闁告劑鍔嶅Σ顒勬⒑閸濆嫮鈻夐柛妯恒偢瀹曞綊宕掗悙瀵稿帾婵犵數鍋熼崑鎾斥枍閸℃稒鐓曢悗锝冨妼婵″ジ妫佹径鎰叆婵犻潧妫欓崳褰掓煛閸℃瑥鏋戝ǎ鍥э躬椤㈡稑顫濋崡鐐╁徍婵犳鍠栭敃銉ヮ渻娴犲鈧線寮撮姀鈩冩珳闂佺硶鍓濋悷锕傤敇婵犳碍鈷掑ù锝堟鐢盯鏌熺喊鍗炰簽闁瑰箍鍨归埞鎴犫偓锝庡墮缁侊箓鏌f惔顖滅У闁哥姵鐗滅划濠氭晲閸℃瑧鐦堟繝鐢靛Т閸婃悂顢旈锔界厵闁哄鍋勬慨鍌涙叏婵犲啯銇濇鐐村姈閹棃鏁愰崒娑辨綌闂傚倷绀侀幖顐︽偋濠婂牆绀堥柣鏃堫棑閺嗭箓鏌i悢绋款棎闁割偒浜弻娑㈠即閵娿儱瀛e┑鐐存綑鐎氼剟鈥旈崘顔嘉ч柛鈩冾殘閻熸劙姊虹紒妯洪嚋缂佺姵鎸搁锝夊箮缁涘鏅滈梺鍓插亞閸犳捇宕㈤柆宥嗏拺闁荤喓澧楅幆鍫㈢磼婢跺缍戦柣锝囨暬瀹曞崬鈽夊▎鎴濆笚闁荤喐绮嶇划鎾崇暦濠婂喚娼╂い鎺戭槹閸嶇敻姊洪棃娴ュ牓寮插⿰鍫濈;闁稿瞼鍋為悡銉╂煟閺傛寧鎯堢€涙繈鏌i悢鍝ユ嚂缂佺姵鎹囬悰顕€寮介鐐殿啇濡炪倖鎸鹃崑鐔哥椤栨粎纾藉ù锝嗗絻娴滅偓绻濋姀锝嗙【闁愁垱娲濋妵鎰板箳閹寸媭妲梻浣呵圭换妤呭磻閹邦兘鏋旈柕鍫濐槹閳锋垹绱撴担璐細缂佺姵鐗犻弻锝夊煛婵犲倻浠╅梺浼欑悼閸忔﹢寮幘缁樺亹闁肩⒈鍓﹀Σ浼存⒒娴h棄浜归柍宄扮墦瀹曟粌顫濇0婵囨櫓闂佺鎻梽鍕煕閹达附鍋i柛銉岛閸嬫捇鎼归銈勭按闂傚倷绀侀幉锟犲蓟閵婏富娈介柟闂寸閻撴繈鏌熼幑鎰靛殭缂佺媴缍侀弻锝夊箛椤撶喓绋囧銈呭閹告悂鍩為幋锔藉亹閻犲泧鍐х矗闂備礁鎽滈崳銉╁垂閸洜宓侀柛鈩冪☉绾惧吋鎱ㄩ敐搴″箹缂傚秴锕獮鍐煛閸涱厾顔岄梺鍦劋缁诲倹淇婇柨瀣瘈闁汇垽娼цⅴ闂佺ǹ顑嗛幑鍥蓟閻斿皝鏋旈柛顭戝枟閻忔挾绱掓ィ鍐暫缂佺姵鐗犲濠氭偄鐞涒€充壕闁汇垻娅ラ悷鐗堟瘎闂佽崵鍠愮划搴㈡櫠濡ゅ懏鍋傞柨鐔哄Т閽冪喐绻涢幋娆忕仼缂佺姵濞婇弻锟犲磼濮樿鲸鐨戦梺鍝勵儏閹冲酣鍩為幋锔藉€烽柛娆忣槸濞咃綁姊绘担绋跨盎缂佽尙鍋撶粚杈ㄧ節閸パ咁啋濡炪倖妫佹慨銈呪枍閵忋倖鈷戦悹鎭掑妼濞呮劙鏌熼崙銈嗗

   闂傚倷娴囬褍霉閻戣棄鏋佸┑鐘宠壘绾捐鈹戦悩鍙夋悙缂佹劖顨婇弻锟犲炊閳轰焦鐏侀梺宕囨嚀缁夋挳鍩為幋锔藉亹闁告瑥顦伴幃娆忊攽閳藉棗浜濋柨鏇樺灲瀵鈽夐姀鐘栥劑鏌曡箛濠傚⒉闁绘繃鐗犻幃宄扳堪閸愩劎鐩庨梺鐟板殩閹凤拷  闂傚倸鍊搁崐鐑芥嚄閼哥數浠氱紓鍌欒兌缁垶銆冮崨鏉戠厺鐎广儱顦崡鎶芥煏韫囨洖校闁诲寒鍓熷铏圭磼濡搫顫庨梺绋跨昂閸婃繂鐣烽弴鐐垫殕闁告洦鍓涢崢浠嬫⒑闁稑宓嗘繛浣冲嫭娅犳い鏂款潟娴滄粓骞栭幖顓炵仭閻庢熬鎷�  闂傚倸鍊峰ù鍥х暦閸偅鍙忛柡澶嬪殮濞差亜围闁搞儻绲芥禍鐐叏濡厧甯堕柣蹇ラ檮閵囧嫰濮€閿涘嫭鍣板Δ鐘靛仜椤戝寮崘顔肩劦妞ゆ帒鍊婚惌鍡涙煕閺囥劌鐏¢柣鎾跺枑娣囧﹪顢涘┑鎰缂備浇灏畷鐢垫閹炬剚鍚嬮煫鍥ㄦ煥椤忥拷  闂傚倸鍊搁崐鐑芥嚄閸洖绠犻柟鎹愵嚙鐟欙箓鎮楅敐搴″闁搞劍绻堥獮鏍庨鈧俊鑲╃棯閹佸仮闁哄本娲樼换娑㈡倷椤掍胶褰呴梻浣告啞椤ㄥ棙绻涙繝鍥ц摕闁斥晛鍟欢鐐烘倵閿濆簼绨介柛鏃偳归埞鎴﹀煡閸℃浼堥梺鐟板殩閹凤拷