加压素受体拮抗剂对鼠缺血性脑损伤保护作用研究
作者：刘新峰 金泳清
单位：210002南京部队南京总医院神经内科
关键词：
中华医学杂志931018 我们以往的研究提示，脑内加压素水平的升高，可促进缺血性脑水肿形成[1]。本研究采用侧脑室微量注射特异性V1、V2及V1/V2加压素受体拮抗剂技术，观察了它们对缺血性脑水肿、各脑区cAMP含量及Na+、K+-ATP酶活力的影响。以探讨加压素受体拮抗剂对缺血性脑损伤的作用和机理。
一、材料和方法
1.加压素V1受体拮抗剂[d(CH2)5Tyr(Me)AVP]、V2受体拮抗剂[d(CH2)5 DⅠle2， DⅠle4， Ala(NH2)9AVP]、V1/V2受体拮抗剂[d(CH2)5 Tyr(Et)DAVP]均由美国Manning M教授馈赠。ATP为美国Sigma公司产品，批号A-6144。
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2.实验动物采用蒙古种沙士鼠，用戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉后，取颈正中切口，分离出双侧颈总动脉。V1、V2及V1/V2组在结扎双侧颈总动脉缺血30分钟，分别向侧脑室注射V1受体拮抗剂5μg、V2受体拮抗剂5μgV1/V2受体拮抗剂10μg(均溶于6μl生理盐水中)，继续缺血至120分种，快速断头取脑。缺血对照组结扎双侧颈总动脉缺血30分钟时，向侧脑室注射6μl生理盐水，继续缺血至120分钟。正常对照组仅作同样的手术操作，但不结扎双侧颈总动脉。
3.采用Marmarou等[2]报道的溴代苯-煤油密度梯度法测定大脑皮质比重，以判断脑水肿情况。脑组织Na+、K+-ATP酶海力测定根据MacMillan[3]和李建新等[4]报道的方法进行，蛋白定量采用，改良劳氏法。脑组织cAMP含量采用放射免疫分析法测定，药盒上由上海中医学院同位素室提供。
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4.数据以
±S表示，采用t检验，秩和检验及相关回归分析。
二、结果
1.加压素受体拮抗剂对缺血性脑水肿的影响：V2、V1/V2拮抗剂组额、枕叶皮质比重与缺血对照组比较显著增高(P〈0.01)，即缺血性脑水肿明显减轻。而V1拮抗组额、枕叶质比重与缺血对照组比无明显差异(P〉0.05)，但显著低于正常对照组(P〈0.01)，即V1受体拮抗剂对缺血性脑水肿没有影响。
2.加压素受体拮抗剂对各脑区cAMP的影响：缺血性脑皮质、下丘脑和纹状体cAMP含量分别为3.5±0.4、3.97±0.5及3.4±0.4pmol/mg均显著低于正常对照组的2.0±0.3、2.4±0.4±及2.1±0.4pmol/mg(P〈0.05或P〈0.01)，而无明显缺血的桥延部0.4pmol/mg(P〈0.05或P〈0.01)，而无明显缺血差异桥延部cAMP含量与正常对照组比较无明显差异(P〉0.05)。测脑室注射V2拮抗剂组的皮质、纹状体、下丘脑、桥延部cAMP含量分别为2.1±0.2、2.6±0.3、2.8±0.3及2.2±0.2pmol/mg，V1/V2组的皮质、下丘脑和桥延分别为2.1±0.3、3.0±0.4及2.1±0.3pmol/mg，与相应缺血对照组比较均显著降低(P〈0.05或P〈0.01)。而V1拮抗剂组各脑区cAMP含量与缺血对照组比较无明显差异(P〉0.05)，但除桥延以外的其它3个脑区cAMP均显著高于正常对照组。
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3.加压素受体拮抗剂对脑组织Na+、K+-ATP酶活力的影响：V2、V1/V2拮抗剂组的额、枕皮质Na+、K+-ATP酶活力分别为188.5±8.9、173.2±9.2及175.8±7.5、178.3±10.5nmol pi*min-1/mg蛋白；缺血对照组额皮质、枕皮质分别为139.86.7及140.5±8.3nmol pi*min-1/mg蛋白，二者比较差异显著(P〈0.05)；但两组的枕皮质及V1/V2组的额皮质的Na+、K+-ATP酶活力仍显著低于正常对照组水平(额、枕皮质分别为204.2±9.9及209.7±9.1nmol pi*min-1/mg蛋白，P〈0.05，P〈0.01)。而V1拮抗剂组额、枕皮质的Na+、K+-ATP酶活力分别为146.7±8.7及138.9±7.7nmol pi*min-1/mg蛋白，与缺血对照组比较无明显差异(P〉0.05)。
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三、讨论
1.加压素受体主要分为Ca2+介导的V1受体和cAMP介导的V2受体，前者主要分布于血管平滑肌，后者主要分布于肾脏。但最近的研究表明，V1、V2受体的分布可能不只局限于血管平滑肌和肾脏，如V2受体就可能存在于大脑的某些脑区[5]。本实验观察到，给动物侧脑室注射V2和V1/V2受体拮抗剂后，缺血性脑水肿明显减轻；而同样应用V1受体拮抗剂却对缺血性脑水肿没有影响。提示特异性的V2受体拮抗剂对缺血民生脑损伤有保护作用，且也支持脑内可能存在加压素受体的推论，表明脑内可能以V2受体为主，而与V1受体的关系也许不大。
2.cAMP是介导加压素V2受体作用的第二信使，本实验结果提示，侧脑室注射V2、V1/V2受体拮抗剂后，各脑区cAMP均显著低于缺血对对照组水平，而V1受体拮抗剂对脑区cAMP无明显影响，可见特异性V2受体拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用可能是通过第二信使cAMP介导的细胞内机制的变化来实现的。
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3.缺血性脑损伤的发生，与脑细胞膜Na+、K+-ATP酶活力的降低密切相关。本实验也观察到，缺血性脑皮质的Na+、K+-ATP酶活力显著降低，而V2、V1/V2拮抗剂能显著提高缺血脑组织的Na+、K+-ATP酶活力。脑组织的Na+、K+-ATP酶主要存在于脑细胞膜上，其活力的升高，可能使异常的离子泵功能有所修复，从而对缺血性脑损伤起到一定的保护作用。
为此，特异性的加压素V2受体拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用的机理可能是通过对V2受体的拮抗，使cAMP生成减少而导致细胞内机制的改变，产生保护脑细胞膜Na+、K+-ATP酶活力的效应，从而发挥其对缺血脑损伤的保护作用。
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参考文献
1 刘新峰，史荫绵.精氨酸加压素与沙土鼠急性缺血性脑水肿实验研究(1).中华神经精神科杂志，1992，25：232.
2 Marmarou A, Po U W, Shulman K, et al. A simple gravimetric technique for measurement of cerebral edema. J Neurosurg, 1978, 49:530.
3 Macmillan V. Cerebral Na+、K+-ATPase activity during exposure to and recovery from acute ischemia. J Cereb Flow Metab, 1982, 2:457.
4 李建新，魏尧梅.人红细胞膜Na+、K+-ATP酶的研究.第二军医大学学报，1983，4：275.
5 Cornett LE, Dorsa DM. Vasopressin receptor subtypes in dorsal hindbrain and renal mudulla. Peptides, 1985, 6:85
(收稿：1992-12-16 修回：1993-07-10), 百拇医药
单位：210002南京部队南京总医院神经内科
关键词：
中华医学杂志931018 我们以往的研究提示，脑内加压素水平的升高，可促进缺血性脑水肿形成[1]。本研究采用侧脑室微量注射特异性V1、V2及V1/V2加压素受体拮抗剂技术，观察了它们对缺血性脑水肿、各脑区cAMP含量及Na+、K+-ATP酶活力的影响。以探讨加压素受体拮抗剂对缺血性脑损伤的作用和机理。
一、材料和方法
1.加压素V1受体拮抗剂[d(CH2)5Tyr(Me)AVP]、V2受体拮抗剂[d(CH2)5 DⅠle2， DⅠle4， Ala(NH2)9AVP]、V1/V2受体拮抗剂[d(CH2)5 Tyr(Et)DAVP]均由美国Manning M教授馈赠。ATP为美国Sigma公司产品，批号A-6144。
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2.实验动物采用蒙古种沙士鼠，用戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉后，取颈正中切口，分离出双侧颈总动脉。V1、V2及V1/V2组在结扎双侧颈总动脉缺血30分钟，分别向侧脑室注射V1受体拮抗剂5μg、V2受体拮抗剂5μgV1/V2受体拮抗剂10μg(均溶于6μl生理盐水中)，继续缺血至120分种，快速断头取脑。缺血对照组结扎双侧颈总动脉缺血30分钟时，向侧脑室注射6μl生理盐水，继续缺血至120分钟。正常对照组仅作同样的手术操作，但不结扎双侧颈总动脉。
3.采用Marmarou等[2]报道的溴代苯-煤油密度梯度法测定大脑皮质比重，以判断脑水肿情况。脑组织Na+、K+-ATP酶海力测定根据MacMillan[3]和李建新等[4]报道的方法进行，蛋白定量采用，改良劳氏法。脑组织cAMP含量采用放射免疫分析法测定，药盒上由上海中医学院同位素室提供。
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4.数据以
±S表示，采用t检验，秩和检验及相关回归分析。二、结果
1.加压素受体拮抗剂对缺血性脑水肿的影响：V2、V1/V2拮抗剂组额、枕叶皮质比重与缺血对照组比较显著增高(P〈0.01)，即缺血性脑水肿明显减轻。而V1拮抗组额、枕叶质比重与缺血对照组比无明显差异(P〉0.05)，但显著低于正常对照组(P〈0.01)，即V1受体拮抗剂对缺血性脑水肿没有影响。
2.加压素受体拮抗剂对各脑区cAMP的影响：缺血性脑皮质、下丘脑和纹状体cAMP含量分别为3.5±0.4、3.97±0.5及3.4±0.4pmol/mg均显著低于正常对照组的2.0±0.3、2.4±0.4±及2.1±0.4pmol/mg(P〈0.05或P〈0.01)，而无明显缺血的桥延部0.4pmol/mg(P〈0.05或P〈0.01)，而无明显缺血差异桥延部cAMP含量与正常对照组比较无明显差异(P〉0.05)。测脑室注射V2拮抗剂组的皮质、纹状体、下丘脑、桥延部cAMP含量分别为2.1±0.2、2.6±0.3、2.8±0.3及2.2±0.2pmol/mg，V1/V2组的皮质、下丘脑和桥延分别为2.1±0.3、3.0±0.4及2.1±0.3pmol/mg，与相应缺血对照组比较均显著降低(P〈0.05或P〈0.01)。而V1拮抗剂组各脑区cAMP含量与缺血对照组比较无明显差异(P〉0.05)，但除桥延以外的其它3个脑区cAMP均显著高于正常对照组。
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3.加压素受体拮抗剂对脑组织Na+、K+-ATP酶活力的影响：V2、V1/V2拮抗剂组的额、枕皮质Na+、K+-ATP酶活力分别为188.5±8.9、173.2±9.2及175.8±7.5、178.3±10.5nmol pi*min-1/mg蛋白；缺血对照组额皮质、枕皮质分别为139.86.7及140.5±8.3nmol pi*min-1/mg蛋白，二者比较差异显著(P〈0.05)；但两组的枕皮质及V1/V2组的额皮质的Na+、K+-ATP酶活力仍显著低于正常对照组水平(额、枕皮质分别为204.2±9.9及209.7±9.1nmol pi*min-1/mg蛋白，P〈0.05，P〈0.01)。而V1拮抗剂组额、枕皮质的Na+、K+-ATP酶活力分别为146.7±8.7及138.9±7.7nmol pi*min-1/mg蛋白，与缺血对照组比较无明显差异(P〉0.05)。
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三、讨论
1.加压素受体主要分为Ca2+介导的V1受体和cAMP介导的V2受体，前者主要分布于血管平滑肌，后者主要分布于肾脏。但最近的研究表明，V1、V2受体的分布可能不只局限于血管平滑肌和肾脏，如V2受体就可能存在于大脑的某些脑区[5]。本实验观察到，给动物侧脑室注射V2和V1/V2受体拮抗剂后，缺血性脑水肿明显减轻；而同样应用V1受体拮抗剂却对缺血性脑水肿没有影响。提示特异性的V2受体拮抗剂对缺血民生脑损伤有保护作用，且也支持脑内可能存在加压素受体的推论，表明脑内可能以V2受体为主，而与V1受体的关系也许不大。
2.cAMP是介导加压素V2受体作用的第二信使，本实验结果提示，侧脑室注射V2、V1/V2受体拮抗剂后，各脑区cAMP均显著低于缺血对对照组水平，而V1受体拮抗剂对脑区cAMP无明显影响，可见特异性V2受体拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用可能是通过第二信使cAMP介导的细胞内机制的变化来实现的。
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3.缺血性脑损伤的发生，与脑细胞膜Na+、K+-ATP酶活力的降低密切相关。本实验也观察到，缺血性脑皮质的Na+、K+-ATP酶活力显著降低，而V2、V1/V2拮抗剂能显著提高缺血脑组织的Na+、K+-ATP酶活力。脑组织的Na+、K+-ATP酶主要存在于脑细胞膜上，其活力的升高，可能使异常的离子泵功能有所修复，从而对缺血性脑损伤起到一定的保护作用。
为此，特异性的加压素V2受体拮抗剂对缺血性脑损伤的保护作用的机理可能是通过对V2受体的拮抗，使cAMP生成减少而导致细胞内机制的改变，产生保护脑细胞膜Na+、K+-ATP酶活力的效应，从而发挥其对缺血脑损伤的保护作用。
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参考文献
1 刘新峰，史荫绵.精氨酸加压素与沙土鼠急性缺血性脑水肿实验研究(1).中华神经精神科杂志，1992，25：232.
2 Marmarou A, Po U W, Shulman K, et al. A simple gravimetric technique for measurement of cerebral edema. J Neurosurg, 1978, 49:530.
3 Macmillan V. Cerebral Na+、K+-ATPase activity during exposure to and recovery from acute ischemia. J Cereb Flow Metab, 1982, 2:457.
4 李建新，魏尧梅.人红细胞膜Na+、K+-ATP酶的研究.第二军医大学学报，1983，4：275.
5 Cornett LE, Dorsa DM. Vasopressin receptor subtypes in dorsal hindbrain and renal mudulla. Peptides, 1985, 6:85
(收稿：1992-12-16 修回：1993-07-10), 百拇医药