NEU癌基因产物P185在乳腺肿瘤中的分布
作者：桂开林 张哉根 张建中 谢 青
单位：250031中国人民解放军空军济南医院病理科(桂开林)，第三军医大学第二附属医院病理科(张哉根、谢 青)，国防科工委第五一四医院病理科(张建中)
关键词：
中华医学杂志931121 近年来，国外有学者曾用NEU癌基因产物P185(简称P185c-neu)对人体腺肿瘤进行初步研究〔1〕。我们应用抗P185c-neu单克隆抗体及ABC法对乳腺病变组织进行标记，观察了乳腺病变组织中P185c-neu表达与肿瘤生物学行为的关系，并对其在乳腺肿瘤的组织发生及预后评价中的意义进行探讨。
一、材料与方法
1.材料：乳腺病变组织101例及正常乳腺组织7例均取自外科手术切除标本。根据1982年WHO乳腺肿瘤的组织学分类，分为恶性组(69例)与良性组(32例)，恶性组又分为非浸润组(5例)和浸润组(64例)。临床分期按国际抗癌联盟TNM分类标准进行分期，并作了随访。所有标本均经10%甲醛液固定，常规包埋切片。
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2.试剂：抗P185c-neu单克隆抗体和标准ABC试剂盒分别为美国Oncogene Science及Vector Lab产品。
3.染色：(1)常规脱蜡；(2)3%羊血清，37℃，3分钟；(3)第一抗体(1∶40)，4℃过夜；(4)第二抗体(1∶100)，37℃，30分钟；(5)ABC法(1∶100)，37℃，30分钟；(6)DAB显色；(7)苏木精复染。在(1)和(7)之间均有PBS洗3次，每次3分钟。用PBS代替第一抗体作为阴性对照。
4.观察方法：每张切片均经三位病理医师在光学显微镜下作双盲法观察。染色强度以正常乳腺上皮为阴性标准，分为弱(+)、中(++)、强(+++)阳性3级。各组染色强度按χ2检验方法进行统计学处理。
二、结果
1.一般染色特点：101例乳腺病变组织及7例正常乳腺组织染色强度见表1。最常见的P185c-neu阳性反应为胞浆内弥漫性棕黄色细颗粒状(图1)。所有切片背景清晰，对照染色切片均为阴性。
, 百拇医药
表1 NEU癌基因产物P185在乳腺癌变组织及正常组织中表达(例数) 组织类型
例数
染色强度
-
+
++
+++
导管内癌
5
0
3
2
, http://www.100md.com 0
浸润性导管癌
43
1
10
9
11
浸润性小叶癌
7
4
3
0
0
粘液性癌
, 百拇医药
3
1
2
0
0
乳头状癌
4
3
1
0
0
髓样癌
2
0
, http://www.100md.com
2
0
0
大汗腺样癌
1
0
0
1
0
派杰氏病
4
3
1
0
, http://www.100md.com
0
导管内乳头状癌
21
6
9
2
4
乳腺腺病
7
2
3
1
1
乳腺纤维腺瘤
, http://www.100md.com
4
4
0
0
0
正常乳腺组织
7
7
0
0
0
合 计
108
43
, 百拇医药
34
15
16
图1 浸润性导管癌胞浆P185呈弥漫性阳性反应 ABC×60
2.P185c-neu阳性与肿瘤组织学类型的关系：(1)69例乳腺癌中45例呈不同程度地P185c-neu阳性，其中弱阳性22例，中度阳性12例，强阳性11例。中、强度阳性占33%。(2)浸润组：43例浸润性导管癌中有20例显中度以上阳性，占46.5%。浸润性导管癌和导管内癌阳性反应强；余19例浸润性小叶癌、粘液性癌、乳头状癌及髓样癌阳性反应较弱。1例大汗腺样癌为中度阳性(图2)。(3)32例良性组中，P185c-meu表达轻度阳性12例，中度阳性3例，强阳性5例(图3)。
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图2 大汗腺样癌胞浆P185呈弥漫性阳性反应 ABC×200
图3 乳腺小叶明显增生胞浆呈P185阳性反应 ABC×60
3.P185c-neu阳性与肿瘤生物学行为的关系：P185c-neu染色强度与肿瘤临床特征的关系见表2。恶性组除5例导管内癌和4例派杰氏病例，69例乳腺癌中41例(85%)有癌组织周围浸润，这些病例多见于原发灶P185c-neu表达增强者。41例中有20例(49%)浸润灶P185c-neu表达增强(图4)。浸润组64例标本中，42例发生了淋巴结转移。在这42例中有6例作了淋巴结转移灶癌细胞P185c-neu染色，除1例轻度阳性外，其余5例均为阴性。P185c-neu阳性与乳腺癌临床分期的关系：I期(n=20)14例，III期(n=29)23例。I期与III期比较差异有非常显著意义(χ2=7.78,P<0.01)。
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图4 浸润性导管癌胞浆P185亦呈阳性反应 ABC×60
表2 69例乳腺癌临床特征与P185c-neu表达的关系 类型
例数
染色强度
-
+
++
+++
(%)
肿瘤周围
浸润组
, 百拇医药 41
6
14
11
10
(85)
非浸润组
28
18
8
1
1
(35)
淋巴结转移
, 百拇医药
转移组
42
10
12
10
10
(76)
非转移组
27
14
10
2
1
(48)
, 百拇医药
肿瘤直径
>3cm
39
10
13
9
7
(74)
≤3cm
30
14
9
3
4
, 百拇医药
(53)
4.P185c-neu阳性与预后的关系：69例乳腺癌有39例进行了随访，其中P185c-neu表达阳性患者15例，其中有9例在5年内复发死亡，其中P185c-neu表达轻、中、强阳性分别为1例、4例和4例。7例阴性患者中只有1例在5年内复发死亡。P185c-neu染色阴性与阳性组肿瘤之5年生存率差异有显著意义(χ2=4.0,P<0.05)。
三、讨论
NEU(又称C-erbB-2和HER-2)基因是一种为膜受体编码的原癌基因(Proto-onc),其扩增或突变所表达的基因产物属于酷氨酸激家族的一种糖蛋白。这种癌基因产物目前有多克隆抗体(21N，20N)〔2〕和单克隆抗体(P185c-neu)〔3〕，三种抗体均可识别分子量为185000基因产物。研究发现，此基因在扩增时能过量表达基因产物〔4〕，这些产物能使正常细胞转化为恶性肿瘤。我们在乳腺癌旁正常乳腺腺泡或导管上皮细胞未见P185c-neu表达，而导管乳头状瘤及腺病增生活跃区观察到导管或腺泡上皮不典型增生细胞亦有P185过量表达，提示P185c-neu单克隆抗体具有对乳腺良、恶性肿瘤鉴别诊断的临床应用价值。临床资料也表明P185c-neu过量表达的乳腺癌患者较易发生癌浸润、淋巴结转移和复发，而且P185c-neu表达中强阳性患者5年生存率明显低于轻度阳性或阴性患者；乳腺癌临床I期与III期之间P185c-neu染色亦有明显差异。上述结果提示P185过量表达可反映乳腺癌的生物学行为，对判断预后可能有一定的意义。
, 百拇医药
另外，本组资料中原位导管癌的病例虽较少，但5例中有2例为P185c-neu中度阳性，而且中度以上不典型增生细胞P185c-neu亦过量表达，说明P185c-neu在乳腺肿瘤早期癌变中起着重要作用。
注：本工作完成在中国人民解放军空军重庆医院
参考文献
1 Gusterson BA,et al.C-erbB-2 expression in benign and malignant breast disease.Br J Cancer,1988,58∶448
2 Mccann,A,et al.C-erbB-2 oncoprotein expression in primary human tumors.Cancer,1990,65∶88
3 Rilke F,et al.Prognostic significance of HER-2/NEU expression in breast cancer and its relationship to other prognostic factors.Int J Cancer,1991,49∶44.
4 Yonemura,Y,et al.Expression of c-erbB-2 oncoprotein in gastric carcinoma.Cancer,1991,67∶2914
(收稿：1993-03-10 修回：1993-07-05), http://www.100md.com
单位：250031中国人民解放军空军济南医院病理科(桂开林)，第三军医大学第二附属医院病理科(张哉根、谢 青)，国防科工委第五一四医院病理科(张建中)
关键词：
中华医学杂志931121 近年来，国外有学者曾用NEU癌基因产物P185(简称P185c-neu)对人体腺肿瘤进行初步研究〔1〕。我们应用抗P185c-neu单克隆抗体及ABC法对乳腺病变组织进行标记，观察了乳腺病变组织中P185c-neu表达与肿瘤生物学行为的关系，并对其在乳腺肿瘤的组织发生及预后评价中的意义进行探讨。
一、材料与方法
1.材料：乳腺病变组织101例及正常乳腺组织7例均取自外科手术切除标本。根据1982年WHO乳腺肿瘤的组织学分类，分为恶性组(69例)与良性组(32例)，恶性组又分为非浸润组(5例)和浸润组(64例)。临床分期按国际抗癌联盟TNM分类标准进行分期，并作了随访。所有标本均经10%甲醛液固定，常规包埋切片。
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2.试剂：抗P185c-neu单克隆抗体和标准ABC试剂盒分别为美国Oncogene Science及Vector Lab产品。
3.染色：(1)常规脱蜡；(2)3%羊血清，37℃，3分钟；(3)第一抗体(1∶40)，4℃过夜；(4)第二抗体(1∶100)，37℃，30分钟；(5)ABC法(1∶100)，37℃，30分钟；(6)DAB显色；(7)苏木精复染。在(1)和(7)之间均有PBS洗3次，每次3分钟。用PBS代替第一抗体作为阴性对照。
4.观察方法：每张切片均经三位病理医师在光学显微镜下作双盲法观察。染色强度以正常乳腺上皮为阴性标准，分为弱(+)、中(++)、强(+++)阳性3级。各组染色强度按χ2检验方法进行统计学处理。
二、结果
1.一般染色特点：101例乳腺病变组织及7例正常乳腺组织染色强度见表1。最常见的P185c-neu阳性反应为胞浆内弥漫性棕黄色细颗粒状(图1)。所有切片背景清晰，对照染色切片均为阴性。
, 百拇医药
表1 NEU癌基因产物P185在乳腺癌变组织及正常组织中表达(例数) 组织类型
例数
染色强度
-
+
++
+++
导管内癌
5
0
3
2
, http://www.100md.com 0
浸润性导管癌
43
1
10
9
11
浸润性小叶癌
7
4
3
0
0
粘液性癌
, 百拇医药
3
1
2
0
0
乳头状癌
4
3
1
0
0
髓样癌
2
0
, http://www.100md.com
2
0
0
大汗腺样癌
1
0
0
1
0
派杰氏病
4
3
1
0
, http://www.100md.com
0
导管内乳头状癌
21
6
9
2
4
乳腺腺病
7
2
3
1
1
乳腺纤维腺瘤
, http://www.100md.com
4
4
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0
0
正常乳腺组织
7
7
0
0
0
合 计
108
43
, 百拇医药
34
15
16
图1 浸润性导管癌胞浆P185呈弥漫性阳性反应 ABC×60
2.P185c-neu阳性与肿瘤组织学类型的关系：(1)69例乳腺癌中45例呈不同程度地P185c-neu阳性，其中弱阳性22例，中度阳性12例，强阳性11例。中、强度阳性占33%。(2)浸润组：43例浸润性导管癌中有20例显中度以上阳性，占46.5%。浸润性导管癌和导管内癌阳性反应强；余19例浸润性小叶癌、粘液性癌、乳头状癌及髓样癌阳性反应较弱。1例大汗腺样癌为中度阳性(图2)。(3)32例良性组中，P185c-meu表达轻度阳性12例，中度阳性3例，强阳性5例(图3)。
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图2 大汗腺样癌胞浆P185呈弥漫性阳性反应 ABC×200
图3 乳腺小叶明显增生胞浆呈P185阳性反应 ABC×60
3.P185c-neu阳性与肿瘤生物学行为的关系：P185c-neu染色强度与肿瘤临床特征的关系见表2。恶性组除5例导管内癌和4例派杰氏病例，69例乳腺癌中41例(85%)有癌组织周围浸润，这些病例多见于原发灶P185c-neu表达增强者。41例中有20例(49%)浸润灶P185c-neu表达增强(图4)。浸润组64例标本中，42例发生了淋巴结转移。在这42例中有6例作了淋巴结转移灶癌细胞P185c-neu染色，除1例轻度阳性外，其余5例均为阴性。P185c-neu阳性与乳腺癌临床分期的关系：I期(n=20)14例，III期(n=29)23例。I期与III期比较差异有非常显著意义(χ2=7.78,P<0.01)。
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图4 浸润性导管癌胞浆P185亦呈阳性反应 ABC×60
表2 69例乳腺癌临床特征与P185c-neu表达的关系 类型
例数
染色强度
-
+
++
+++
(%)
肿瘤周围
浸润组
, 百拇医药 41
6
14
11
10
(85)
非浸润组
28
18
8
1
1
(35)
淋巴结转移
, 百拇医药
转移组
42
10
12
10
10
(76)
非转移组
27
14
10
2
1
(48)
, 百拇医药
肿瘤直径
>3cm
39
10
13
9
7
(74)
≤3cm
30
14
9
3
4
, 百拇医药
(53)
4.P185c-neu阳性与预后的关系：69例乳腺癌有39例进行了随访，其中P185c-neu表达阳性患者15例，其中有9例在5年内复发死亡，其中P185c-neu表达轻、中、强阳性分别为1例、4例和4例。7例阴性患者中只有1例在5年内复发死亡。P185c-neu染色阴性与阳性组肿瘤之5年生存率差异有显著意义(χ2=4.0,P<0.05)。
三、讨论
NEU(又称C-erbB-2和HER-2)基因是一种为膜受体编码的原癌基因(Proto-onc),其扩增或突变所表达的基因产物属于酷氨酸激家族的一种糖蛋白。这种癌基因产物目前有多克隆抗体(21N，20N)〔2〕和单克隆抗体(P185c-neu)〔3〕，三种抗体均可识别分子量为185000基因产物。研究发现，此基因在扩增时能过量表达基因产物〔4〕，这些产物能使正常细胞转化为恶性肿瘤。我们在乳腺癌旁正常乳腺腺泡或导管上皮细胞未见P185c-neu表达，而导管乳头状瘤及腺病增生活跃区观察到导管或腺泡上皮不典型增生细胞亦有P185过量表达，提示P185c-neu单克隆抗体具有对乳腺良、恶性肿瘤鉴别诊断的临床应用价值。临床资料也表明P185c-neu过量表达的乳腺癌患者较易发生癌浸润、淋巴结转移和复发，而且P185c-neu表达中强阳性患者5年生存率明显低于轻度阳性或阴性患者；乳腺癌临床I期与III期之间P185c-neu染色亦有明显差异。上述结果提示P185过量表达可反映乳腺癌的生物学行为，对判断预后可能有一定的意义。
, 百拇医药
另外，本组资料中原位导管癌的病例虽较少，但5例中有2例为P185c-neu中度阳性，而且中度以上不典型增生细胞P185c-neu亦过量表达，说明P185c-neu在乳腺肿瘤早期癌变中起着重要作用。
注：本工作完成在中国人民解放军空军重庆医院
参考文献
1 Gusterson BA,et al.C-erbB-2 expression in benign and malignant breast disease.Br J Cancer,1988,58∶448
2 Mccann,A,et al.C-erbB-2 oncoprotein expression in primary human tumors.Cancer,1990,65∶88
3 Rilke F,et al.Prognostic significance of HER-2/NEU expression in breast cancer and its relationship to other prognostic factors.Int J Cancer,1991,49∶44.
4 Yonemura,Y,et al.Expression of c-erbB-2 oncoprotein in gastric carcinoma.Cancer,1991,67∶2914
(收稿：1993-03-10 修回：1993-07-05), http://www.100md.com