中国人遗传性脊髓小脑型共济失调患者三核苷酸突变频率的分布
作者：唐北沙 王德安 夏家辉 邓汉湘 戴和平 刘春宇 潘 乾 龙志高 金丽娟 张宝荣 强丽娟 李 晨 赵节绪
单位：410008 长沙，湖南医科大学湘雅医院神经病研究所(唐北沙、金丽娟)；湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室(夏家辉、邓汉湘、戴和平、王德安、刘春宇、潘 乾、龙志高)；浙江医科大学附属第二医院神经内科(张宝荣)；江苏省常州市第二人民医院神经内科(强丽娟)；青岛医学院附属医院神经内科(李 晨)；白求恩医科大学第一临床医院神经内科(赵节绪)
关键词：脊髓小脑变性；小脑性共济失调；基因
中华医学杂志971106 目的 评价SCA1、SCA2、MJD/SCA3CAG三核苷酸扩增突变(CAG)n在中国人遗传性脊髓小脑型共济失调(SCA)患者的分布频率。方法 应用聚合酶链式反应(PCR)和变性聚丙烯胺凝胶电泳技术，检测分析了50名中国人常染色体显性遗传SCA家系(其中患者79例)的SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n。结果 在50个SCA家系中，1个SCA家系有SCA1(CAG)n突变，3个SCA家系有SCA2(CAG)n突变，24个SCA家系有MJD/SCA3(CAG)n突变，阳性率分别为2.0%、6.0%、48.0%。2例SCA1患者CAG三核苷酸重复数为53和62次，而正常人为12～36次。7例SCA2患者CAG三核苷酸重复数43～47次，而正常人为22～30次。42例MJD/SCA3患者CAG三核苷酸重复数63～78次，而正常人为15～38次。另有22个SCA家系28例患者，SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n突变检测在正常范围内。结论 中国SCA主要为MJD/SCA 3型，属于非葡萄牙型MJD；而SCA1型、SCA2型少见。
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SCA1, SCA2, MJD/SCA3 (CAG)n mutation detection and analysis in patients with hereditary spinocerebellar ataxia from Chinese families Tang Beisha, Wang Dean, Xia Jiahui, et al. Department of neurology, Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008
Objective To assess the frequency of the SCA1, SCA2, MJD/SCA3 CAG trinucleotide repeat expansions ((CAG)n) among individuals diagnosed with hereditary spinocerebellar ataxia (SCA) from Chinese families. Method The SCA1, SCA2, MJD/SCA3 (CAG)n mutation were detected with the polymerose chain reaction (PCR), denaturing polyacrylamide gel and silver staining technique in 79 patients with autosomal dominant SCA from 50 Chinese families. Results Among 50 kindreds, 2%(1/50) had the SCA1 (CAG)n, 6% (3/50) had the SCA2 (CAG)n, whereas 48%(24/50) were positive for the MJD/SCA3 (CAG)n. Thus, together SCA1, SCA2 and MJD/SCA3 represent 56%(28/50) of the autosomal dominant ataxias in our group. In two SCA1 patients the CAG repeat was expanded to 53～62 repeats, whereas in normal ivdividuals was 12～36 repeats. In seven SCA2 patients the CAG repeat was expanded to 43～47 repeats, whereas in normal ivdividuals was 22～30 repeats. In forty-two MJD/SCA3 patients the CAG repeat was expanded to 63～78 repeats, whereas in normal ivdividuals was 15～38 repeats. The SCA1, SCA2，MJD/SCA3(CAG)n mutation were excluded in the other 28 SCA patients from 22 families. Conclusion The frequency of MJD/SCA3 is substantially higher than that of SCA1 and SCA2 in the autosomal dominant SCA from Chinese families. Chinese patients with MJD/SCA3 are non-Portuguese patients with MJD/SCA3. Clinical expressions of the various SCAs overlap one another, making a diagnostic classification based on phenotype inaccurate in many instances. It is important for SCA clinical study to make a SCA gene diagnosis and genomic classification.
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Key words Spinocerebellar degeneration Cerebellar ataxia Gene
(Natl Med J China, 1997, 77：819-822)
遗传性脊髓小脑型共济失调(spinocerebellar ataxia, SCA)是一类包括Machado-Joseph Disease MJD)等多种亚型共济失调在内的进行性神经系统退行性疾病，多为常染色体显性遗传。近年来，国外学者通过遗传连锁分析，先后发现该类疾病在多条染色体区带上存在着相关的致病基因[1]，肯定了该类疾病遗传异质性的存在。并克隆了SCA1[2]、SCA2[3]、MJD/SCA3[4]的致病基因，发现与CAG三核苷酸重复异常((CAG)n)相关。为评价SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n在中国人SCA患者的分布频率，我们对中国人50个SCA家系的79例SCA患者进行了SCA1(CAG)n、SCA2(CAG)n和MJD/SCA3(CAG)n检测分析，现将结果报道如下。
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对象和方法
一、对象
共收集50个SCA家系，其中湖南省39个，浙江省5个，江西、江苏、山东、吉林、黑龙江、甘肃省各1个。其中有79例SCA患者，82例有血缘关系“正常者”，34例无血缘关系正常者，均为汉族。SCA患者临床诊断按Harding标准[5]。遗传形式为常染色体显性遗传。79例SCA患者，男42例，女37例，现平均年龄38.50(18～67)岁，平均发病年龄29.5(8～52)岁，平均病程10.0(1～28)年。
二、方法
1.PCR引物：(1) SCA1引物是根据6p22～p23上SCA1基因的DNA顺序设计[2]，其序列为：Repl(5′-AACTGGAAATGTG GACGTA-3′)，Rep2(5′-CAACATGGGCAG TCTGAG-3′)。(2) SCA2引物是根据12q23～q24.1上SCA2基因的DNA顺序设计[3]，其序列为：SCA2-A(5′-GGGCCCCTCACCATGTCG-3)，SCA2-B(5-CGGGCTTGCGGACATTGG-3′)。(3) MJD/SCA3引物是根据14q24.3-ter上MJD基因的DNA顺序设计[4]，其序列为：MJD 52(5-CCAGTGACTACTTTGATTCG-3′)，MJD70 (5′-CTTACCTAGATCACTCC CAA-3′)。
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2.DNA提取：抽取家系中各位SCA患者及成员外周血10ml，按常规方法提取总DNA作为PCR模板。
3.PCR检测技术：(1) SCA1：在100μl PCR反应总体积中，加dNTPs至终浓度200 nmol/L，引物5 pmol，Taq酶5U，模板DNA 200ng，甲酰胺4μl，混合后加液体石蜡油覆盖。94℃变性60秒，72℃延伸90秒，57℃退火60秒，重复32个循环，最后延伸5分钟。取4μl PCR扩增产物在6%变性聚丙烯胺凝胶中电泳。银染显带，根据产物的长度计算出CAG重复次数。(2) SCA2：在100μl PCR反应总体积中，加dNTPs至终浓度200nmol/L，引物5 pmol，Taq酶5U，模板DNA 200ng，甲酰胺4μl，混合后加液体石蜡油覆盖。95℃预变性5分钟，96℃变性90秒，72℃延伸90秒，60℃退火60秒，重复35个循环，最后延伸5分钟。取4μl PCR扩增产物在6%变性聚丙烯胺凝胶中电泳。银染显带，根据产物的长度计算出CAG重复次数。(3) MJD/SCA3：在100μl PCR反应总体积中，加dNTPs至终浓度2 00nmol/L，引物5 pmol，Taq酶5U，模板DNA 200ng，甲酰胺4μl，混合后加液体石蜡油覆盖。94℃变性90秒，72℃延伸180秒，55℃退火90秒，重复30个循环，最后延伸5分钟。取4μl PCR扩增产物在6%变性聚丙烯胺凝胶中电泳。银染显带，根据产物的长度计算出CAG重复次数。
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结果
一、SCA1(CAG)n突变检测
34例正常人CAG三核苷酸重复数为12～36次；1个家系2例SCA1患者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数为53～62次，超出正常范围；其余49个家系77例SCA患者的等位基因CAG三核苷酸重复数为17～35次；SCA1家系有1例无症状者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数53次，超出正常范围(图1)。
M0543等为DNA样品编号，均来自同一家系(SCA007)；M0234和M0254是
SCA1患者；M0252是位“无症状者”；PCR扩增片段299bp，CAG重复数62次
图1 SCA1(CAG)n突变PCR检测结果
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二、SCA2(CAG)n突变检测
34例正常人CAG三核苷酸重复数为12～30次；3个家系7例SCA2患者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数为43～47次，超出正常范围；其余47个家系72例SCA患者的等位基因CAG三核苷酸重复数为13～30次(图2)。
M0670等为DNA样品编号，来自3个家系(SCA018、SCA030、SCA037)；除M0527和
M0614是正常者，余均为SCA2患者；PCR扩增片段242bp，CAG重复数47次
图2 SCA2(CAG)n突变PCR检测结果
三、MJD/SCA3(CAG)n突变检测
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34例正常人CAG三核苷酸重复数为15～38次；24个家系中42例MJD/SCA3患者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数为63～78次之间，超出正常范围；其余26个家系37例SCA患者的等位基因CAG三核苷酸重复数为14～38次；MJD/SCA3家系有11例无症状者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数65～76次，超出正常范围(图3)。
M0584等为DNA样品编号，均来自同一家系(SCA028)；M0584、M0589、M0605、M0592是MJD/SCA3患者；M0591、M0585、M0603、M0598是“无
症状者”；PCR扩增片段424bp，CAG重复数75次
图3 MJD(CAG)n突变PCR检测结果
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SCA有明显的临床和遗传异质性。故根据临床表现特征对该病所作的分型(表型分型)没有被普遍接受。SCA基因突变检测为此类疾病建立一个诊断确切、唯一有效的分类方法(基因分型)。Orr、Imbert、Kawaguchi等[2～5]分别克隆SCA1、SCA2、MJD/SCA3致病基因，发现这三个基因内均有一个不稳定的CAG三核苷酸重复异常。SCA1患者CAG三核苷酸重复数为43～81次，而正常人为17～39次。MJD患者CAG三核苷酸重复数为68～79次，而正常人为13～36次。SCA2患者CAG三核苷酸重复数为37～50次，而正常人为17～29次。Stevanin等[6]经遗传连锁分析发现，某些临床表现与MJD不一样的SCA家系也与14号染色体长臂(14q32.1)相关，命名为SCA3。进一步研究发现，SCA3与MJD均为MJD基因突变引起，故称MJD/SCA3基因型。
经SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n突变检测，首次发现来自中国人群中1个SCA家系的2例患者及1例高危无症状者有SCA1(CAG)n突变，可确诊为SCA1基因型。3个SCA家系的7例患者有SCA2(CAG)n突变，可确诊为SCA2基因型。24个SCA家系的42例患者及11例高危无症状者有MJD(CAG)n突变，可确诊为MJD/SCA3基因型。本组50个中国人SCA家系中，SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n突变检测阳性率分别为1/50(2.00%)、3/50(6.00%)、24/50(48.00%)。提示，中国人SCA患者中，MJD/SCA3基因型为主要类型，它确实是一种全球性疾病，值得我国神经遗传病研究工作者的注意，分子遗传学基因诊断将为该型在中国的分布及研究提供可靠的诊断方法。
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本组来自湖南SCA1患者，主要特点有小脑性共济失调、眼球震颤、构音障碍、腱反射活跃等。与文献报道[7]SCA1临床表现比较，没有明显的脑干症状、锥体外系、痴呆、深感觉障碍等表现。本组来自湖南SCA2患者，主要特点有小脑性共济失调、构音障碍、肌张力下降、腱反射减弱、视力下降、痴呆等。与文献报道相似[8]，但无慢眼活动。本组MJD/SCA3患者家系除来自江西、山东、江苏、浙江、吉林、黑龙江、甘肃省各1个家系，余17个家系来自湖南，均无葡萄牙血缘关系，这表明中国的MJD/SCA3为非葡萄牙型,在全国各地均有分布，先前报道也证实[9]。本组MJD/SCA3大部分病例主要表现为小脑性共济失调、构音障碍、眼球震颤、痉挛性肌张力增高、腱反射活跃亢进、病理征阳性、意向性震颤等，可伴有眼球凸出，眼、面、舌肌搐颤，眼外肌麻痹；少数病例主要表现为运动减少、静止性震颤、舞蹈样动作等，伴有小脑性共济失调及较轻的锥体束征。按Coutinho分型[10]，前者属于MJD Ⅱ型，而后者属于MJD Ⅰ型。这表明我国MJD/SCA3临床分型，主要是MJD Ⅱ型，少数为MJDⅠ型。
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SCA2有腱反射减弱，肌张力下降和MJD/SCA3有痉挛性共济失调可与其它型SCA鉴别，但总的来说，SCA临床表现还是相近的，临床上难以鉴别。由于SCA存在临床和遗传异质性，因此，SCA基因诊断及基因型分型具有重要的临床意义。目前，我们正进行本组22个未定型SCA家系的基因定位和分型研究工作。
本课题为国家863高科学技术计划资助项目
参考文献
1 Rosenberg RN. Autosomal dominant cerebellar phenotypes: the genotype has settled the issue. Neurology, 1995, 45：1.
2 Orr HT, Chung M, Banfi S, et al. Expansion of an unstable trinucleotide CAG repeat in spinocerebellar ataxia type 1. Nat Genet, 1993, 4：221.
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3 Imbert G, Saudou F, Yvert G, et al. Cloning of the gene for spinocerebellar ataxia 2 reveals a locus with high sensitivity to expanded CAG/glutamine repeats. Nat Genet, 1996, 14：285.
4 Kawaguchi Y, Okamoto T, Taniwaki M, et al. CAG expansions in a novel gene from Machado-Joseph disease at chromosome 14q32.1. Nat Genet, 1994, 8：221.
5 Harding AE. Clinical features and classification of inherited ataxias Adv. Neurol, 1993, 61：1.
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6 Stevanin G, Cancel G, Durr A, et al. The gene for spinal cerebellar ataxia type 3 (SCA3) is located in a region of ～3 cM on chromosome 14q24.3-q32.2. Am J Hum Genet, 1995, 56：193.
7 Zoghbi H Y, Pollack M S, Lyons LA, et al. Spinocerebellar ataxia: variable age of onset and linkage to human leukocyte antigen in a large kindred. Ann Neurol, 1988, 23：580.
8 Orozco Diaz G, Nodarse Fleites A, Cordoves Sagaz R, et al. Autosomal dominant cerebellar ataxia: clinical analysis of 263 patients from a homogeneous population in Holguin, Cuba. Neurology, 1990, 40：1369.
9 王国相，周永兴，李玉芬，等.Machado-Joseph病中国临床和病理研究.中华神经科杂志，1996，29：293.
10 Sequeiros J, Coutinho P. Epidemiology and clinical aspects of Machado-Joseph disease. In: Harding AE, Deufel T, eds. Advances in neurology. vol 61. New York: Raven Press, 1993, 139.
(收稿：1997-02-19 修回：1997-08-13), 百拇医药
单位：410008 长沙，湖南医科大学湘雅医院神经病研究所(唐北沙、金丽娟)；湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室(夏家辉、邓汉湘、戴和平、王德安、刘春宇、潘 乾、龙志高)；浙江医科大学附属第二医院神经内科(张宝荣)；江苏省常州市第二人民医院神经内科(强丽娟)；青岛医学院附属医院神经内科(李 晨)；白求恩医科大学第一临床医院神经内科(赵节绪)
关键词：脊髓小脑变性；小脑性共济失调；基因
中华医学杂志971106 目的 评价SCA1、SCA2、MJD/SCA3CAG三核苷酸扩增突变(CAG)n在中国人遗传性脊髓小脑型共济失调(SCA)患者的分布频率。方法 应用聚合酶链式反应(PCR)和变性聚丙烯胺凝胶电泳技术，检测分析了50名中国人常染色体显性遗传SCA家系(其中患者79例)的SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n。结果 在50个SCA家系中，1个SCA家系有SCA1(CAG)n突变，3个SCA家系有SCA2(CAG)n突变，24个SCA家系有MJD/SCA3(CAG)n突变，阳性率分别为2.0%、6.0%、48.0%。2例SCA1患者CAG三核苷酸重复数为53和62次，而正常人为12～36次。7例SCA2患者CAG三核苷酸重复数43～47次，而正常人为22～30次。42例MJD/SCA3患者CAG三核苷酸重复数63～78次，而正常人为15～38次。另有22个SCA家系28例患者，SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n突变检测在正常范围内。结论 中国SCA主要为MJD/SCA 3型，属于非葡萄牙型MJD；而SCA1型、SCA2型少见。
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SCA1, SCA2, MJD/SCA3 (CAG)n mutation detection and analysis in patients with hereditary spinocerebellar ataxia from Chinese families Tang Beisha, Wang Dean, Xia Jiahui, et al. Department of neurology, Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008
Objective To assess the frequency of the SCA1, SCA2, MJD/SCA3 CAG trinucleotide repeat expansions ((CAG)n) among individuals diagnosed with hereditary spinocerebellar ataxia (SCA) from Chinese families. Method The SCA1, SCA2, MJD/SCA3 (CAG)n mutation were detected with the polymerose chain reaction (PCR), denaturing polyacrylamide gel and silver staining technique in 79 patients with autosomal dominant SCA from 50 Chinese families. Results Among 50 kindreds, 2%(1/50) had the SCA1 (CAG)n, 6% (3/50) had the SCA2 (CAG)n, whereas 48%(24/50) were positive for the MJD/SCA3 (CAG)n. Thus, together SCA1, SCA2 and MJD/SCA3 represent 56%(28/50) of the autosomal dominant ataxias in our group. In two SCA1 patients the CAG repeat was expanded to 53～62 repeats, whereas in normal ivdividuals was 12～36 repeats. In seven SCA2 patients the CAG repeat was expanded to 43～47 repeats, whereas in normal ivdividuals was 22～30 repeats. In forty-two MJD/SCA3 patients the CAG repeat was expanded to 63～78 repeats, whereas in normal ivdividuals was 15～38 repeats. The SCA1, SCA2，MJD/SCA3(CAG)n mutation were excluded in the other 28 SCA patients from 22 families. Conclusion The frequency of MJD/SCA3 is substantially higher than that of SCA1 and SCA2 in the autosomal dominant SCA from Chinese families. Chinese patients with MJD/SCA3 are non-Portuguese patients with MJD/SCA3. Clinical expressions of the various SCAs overlap one another, making a diagnostic classification based on phenotype inaccurate in many instances. It is important for SCA clinical study to make a SCA gene diagnosis and genomic classification.
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Key words Spinocerebellar degeneration Cerebellar ataxia Gene
(Natl Med J China, 1997, 77：819-822)
遗传性脊髓小脑型共济失调(spinocerebellar ataxia, SCA)是一类包括Machado-Joseph Disease MJD)等多种亚型共济失调在内的进行性神经系统退行性疾病，多为常染色体显性遗传。近年来，国外学者通过遗传连锁分析，先后发现该类疾病在多条染色体区带上存在着相关的致病基因[1]，肯定了该类疾病遗传异质性的存在。并克隆了SCA1[2]、SCA2[3]、MJD/SCA3[4]的致病基因，发现与CAG三核苷酸重复异常((CAG)n)相关。为评价SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n在中国人SCA患者的分布频率，我们对中国人50个SCA家系的79例SCA患者进行了SCA1(CAG)n、SCA2(CAG)n和MJD/SCA3(CAG)n检测分析，现将结果报道如下。
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对象和方法
一、对象
共收集50个SCA家系，其中湖南省39个，浙江省5个，江西、江苏、山东、吉林、黑龙江、甘肃省各1个。其中有79例SCA患者，82例有血缘关系“正常者”，34例无血缘关系正常者，均为汉族。SCA患者临床诊断按Harding标准[5]。遗传形式为常染色体显性遗传。79例SCA患者，男42例，女37例，现平均年龄38.50(18～67)岁，平均发病年龄29.5(8～52)岁，平均病程10.0(1～28)年。
二、方法
1.PCR引物：(1) SCA1引物是根据6p22～p23上SCA1基因的DNA顺序设计[2]，其序列为：Repl(5′-AACTGGAAATGTG GACGTA-3′)，Rep2(5′-CAACATGGGCAG TCTGAG-3′)。(2) SCA2引物是根据12q23～q24.1上SCA2基因的DNA顺序设计[3]，其序列为：SCA2-A(5′-GGGCCCCTCACCATGTCG-3)，SCA2-B(5-CGGGCTTGCGGACATTGG-3′)。(3) MJD/SCA3引物是根据14q24.3-ter上MJD基因的DNA顺序设计[4]，其序列为：MJD 52(5-CCAGTGACTACTTTGATTCG-3′)，MJD70 (5′-CTTACCTAGATCACTCC CAA-3′)。
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2.DNA提取：抽取家系中各位SCA患者及成员外周血10ml，按常规方法提取总DNA作为PCR模板。
3.PCR检测技术：(1) SCA1：在100μl PCR反应总体积中，加dNTPs至终浓度200 nmol/L，引物5 pmol，Taq酶5U，模板DNA 200ng，甲酰胺4μl，混合后加液体石蜡油覆盖。94℃变性60秒，72℃延伸90秒，57℃退火60秒，重复32个循环，最后延伸5分钟。取4μl PCR扩增产物在6%变性聚丙烯胺凝胶中电泳。银染显带，根据产物的长度计算出CAG重复次数。(2) SCA2：在100μl PCR反应总体积中，加dNTPs至终浓度200nmol/L，引物5 pmol，Taq酶5U，模板DNA 200ng，甲酰胺4μl，混合后加液体石蜡油覆盖。95℃预变性5分钟，96℃变性90秒，72℃延伸90秒，60℃退火60秒，重复35个循环，最后延伸5分钟。取4μl PCR扩增产物在6%变性聚丙烯胺凝胶中电泳。银染显带，根据产物的长度计算出CAG重复次数。(3) MJD/SCA3：在100μl PCR反应总体积中，加dNTPs至终浓度2 00nmol/L，引物5 pmol，Taq酶5U，模板DNA 200ng，甲酰胺4μl，混合后加液体石蜡油覆盖。94℃变性90秒，72℃延伸180秒，55℃退火90秒，重复30个循环，最后延伸5分钟。取4μl PCR扩增产物在6%变性聚丙烯胺凝胶中电泳。银染显带，根据产物的长度计算出CAG重复次数。
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结果
一、SCA1(CAG)n突变检测
34例正常人CAG三核苷酸重复数为12～36次；1个家系2例SCA1患者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数为53～62次，超出正常范围；其余49个家系77例SCA患者的等位基因CAG三核苷酸重复数为17～35次；SCA1家系有1例无症状者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数53次，超出正常范围(图1)。
M0543等为DNA样品编号，均来自同一家系(SCA007)；M0234和M0254是
SCA1患者；M0252是位“无症状者”；PCR扩增片段299bp，CAG重复数62次
图1 SCA1(CAG)n突变PCR检测结果
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二、SCA2(CAG)n突变检测
34例正常人CAG三核苷酸重复数为12～30次；3个家系7例SCA2患者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数为43～47次，超出正常范围；其余47个家系72例SCA患者的等位基因CAG三核苷酸重复数为13～30次(图2)。
M0670等为DNA样品编号，来自3个家系(SCA018、SCA030、SCA037)；除M0527和
M0614是正常者，余均为SCA2患者；PCR扩增片段242bp，CAG重复数47次
图2 SCA2(CAG)n突变PCR检测结果
三、MJD/SCA3(CAG)n突变检测
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34例正常人CAG三核苷酸重复数为15～38次；24个家系中42例MJD/SCA3患者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数为63～78次之间，超出正常范围；其余26个家系37例SCA患者的等位基因CAG三核苷酸重复数为14～38次；MJD/SCA3家系有11例无症状者，其中一个等位基因CAG三核苷酸重复数65～76次，超出正常范围(图3)。
M0584等为DNA样品编号，均来自同一家系(SCA028)；M0584、M0589、M0605、M0592是MJD/SCA3患者；M0591、M0585、M0603、M0598是“无
症状者”；PCR扩增片段424bp，CAG重复数75次
图3 MJD(CAG)n突变PCR检测结果
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SCA有明显的临床和遗传异质性。故根据临床表现特征对该病所作的分型(表型分型)没有被普遍接受。SCA基因突变检测为此类疾病建立一个诊断确切、唯一有效的分类方法(基因分型)。Orr、Imbert、Kawaguchi等[2～5]分别克隆SCA1、SCA2、MJD/SCA3致病基因，发现这三个基因内均有一个不稳定的CAG三核苷酸重复异常。SCA1患者CAG三核苷酸重复数为43～81次，而正常人为17～39次。MJD患者CAG三核苷酸重复数为68～79次，而正常人为13～36次。SCA2患者CAG三核苷酸重复数为37～50次，而正常人为17～29次。Stevanin等[6]经遗传连锁分析发现，某些临床表现与MJD不一样的SCA家系也与14号染色体长臂(14q32.1)相关，命名为SCA3。进一步研究发现，SCA3与MJD均为MJD基因突变引起，故称MJD/SCA3基因型。
经SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n突变检测，首次发现来自中国人群中1个SCA家系的2例患者及1例高危无症状者有SCA1(CAG)n突变，可确诊为SCA1基因型。3个SCA家系的7例患者有SCA2(CAG)n突变，可确诊为SCA2基因型。24个SCA家系的42例患者及11例高危无症状者有MJD(CAG)n突变，可确诊为MJD/SCA3基因型。本组50个中国人SCA家系中，SCA1、SCA2、MJD/SCA3(CAG)n突变检测阳性率分别为1/50(2.00%)、3/50(6.00%)、24/50(48.00%)。提示，中国人SCA患者中，MJD/SCA3基因型为主要类型，它确实是一种全球性疾病，值得我国神经遗传病研究工作者的注意，分子遗传学基因诊断将为该型在中国的分布及研究提供可靠的诊断方法。
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本组来自湖南SCA1患者，主要特点有小脑性共济失调、眼球震颤、构音障碍、腱反射活跃等。与文献报道[7]SCA1临床表现比较，没有明显的脑干症状、锥体外系、痴呆、深感觉障碍等表现。本组来自湖南SCA2患者，主要特点有小脑性共济失调、构音障碍、肌张力下降、腱反射减弱、视力下降、痴呆等。与文献报道相似[8]，但无慢眼活动。本组MJD/SCA3患者家系除来自江西、山东、江苏、浙江、吉林、黑龙江、甘肃省各1个家系，余17个家系来自湖南，均无葡萄牙血缘关系，这表明中国的MJD/SCA3为非葡萄牙型,在全国各地均有分布，先前报道也证实[9]。本组MJD/SCA3大部分病例主要表现为小脑性共济失调、构音障碍、眼球震颤、痉挛性肌张力增高、腱反射活跃亢进、病理征阳性、意向性震颤等，可伴有眼球凸出，眼、面、舌肌搐颤，眼外肌麻痹；少数病例主要表现为运动减少、静止性震颤、舞蹈样动作等，伴有小脑性共济失调及较轻的锥体束征。按Coutinho分型[10]，前者属于MJD Ⅱ型，而后者属于MJD Ⅰ型。这表明我国MJD/SCA3临床分型，主要是MJD Ⅱ型，少数为MJDⅠ型。
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SCA2有腱反射减弱，肌张力下降和MJD/SCA3有痉挛性共济失调可与其它型SCA鉴别，但总的来说，SCA临床表现还是相近的，临床上难以鉴别。由于SCA存在临床和遗传异质性，因此，SCA基因诊断及基因型分型具有重要的临床意义。目前，我们正进行本组22个未定型SCA家系的基因定位和分型研究工作。
本课题为国家863高科学技术计划资助项目
参考文献
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7 Zoghbi H Y, Pollack M S, Lyons LA, et al. Spinocerebellar ataxia: variable age of onset and linkage to human leukocyte antigen in a large kindred. Ann Neurol, 1988, 23：580.
8 Orozco Diaz G, Nodarse Fleites A, Cordoves Sagaz R, et al. Autosomal dominant cerebellar ataxia: clinical analysis of 263 patients from a homogeneous population in Holguin, Cuba. Neurology, 1990, 40：1369.
9 王国相，周永兴，李玉芬，等.Machado-Joseph病中国临床和病理研究.中华神经科杂志，1996，29：293.
10 Sequeiros J, Coutinho P. Epidemiology and clinical aspects of Machado-Joseph disease. In: Harding AE, Deufel T, eds. Advances in neurology. vol 61. New York: Raven Press, 1993, 139.
(收稿：1997-02-19 修回：1997-08-13), 百拇医药