肿瘤浸润淋巴细胞在肝癌患者的术后应用
作者：张一心 尤其俋 汪晓莺
单位：226001 江苏南通医学院附属医院肿属医院肿肿瘤科(张一心、尤其俋)；南通医学院微生物教研室(汪晓莺)
关键词：
中华医学杂志971125 作者从1993年5月～1996年6月对我院15例原发性肝癌手术切除患者中的12例进行了肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输治疗，现将结果报道如下。
一、对象和方法
1.对象：15例原发性肝癌患者均来自于我院肿瘤科门诊，其中男11例，女4例，年龄30～65岁，平均50.2岁，均经术前B超及CT证实。肿瘤直径≤5cm 5例，≥5cm 10例。所选病例术前均未经过化疗、放疗和其他治疗，无脑及肺转移，无严重心、肺功能不全。手术后病理证实均为肝细胞癌。
, 百拇医药
2.方法：(1) TIL细胞的分离、培养和增殖：将手术切除的肿瘤块立即在无菌条件下去除肿瘤表面坏死组织和结缔组织，将瘤体5～10g剪成0.5mm×0.5mm×1.0mm左右的组织碎块、悬浮于酶消化液中消化3～4小时，过钢网，制成细胞悬液，将细胞悬液悬于双层淋巴细胞分离液中作非连续性密度梯度离心，分别收获上、下层细胞。上层多为肿瘤细胞，用于培养或常规冰存，下层细胞即为TIL细胞，将TIL细胞置于含抗生素的白介素2(1 000U/ml)的完全培养基中培养，至细胞数增殖到1～2×109/ml时为一次临床输注量。
(2) TIL的杀伤活性测定：将分离的TIL细胞浓度调整为1×106/ml，悬浮于10% AB型血清200U/ml庆大霉素，1 000U/ml白介素2的 RPMI 1640培养液中，置37℃，5% CO2培养箱内，3～5天换液一次，随时调整细胞浓度。靶细胞为自身肿瘤细胞。采用3H-TDR释放试验测定阶段的TIL杀伤活性，以3H-TDR释放百分率表示。计算公式：细胞杀伤率(%)=[1-(实验组PM值)/(对照组PM值)]×100%。
, 百拇医药
(3) 自 体TIL细胞回输治疗：在手术后20～25天TIL细胞大量扩增，杀伤活性达到高峰，培养液中的肿瘤细胞完全消失。患者在接受回输前5天开始肌注γIL-24 000U，每次经静脉输注1×109～2×109/ml的TIL细胞，一周回输一次，共2～4周。设自身对照，在手术前及回输结束(2～4周)后一周分别测定外周血T细胞亚群及SIL-2R水平，观察机体临床症状及免疫状态的变化。
二、结果
1.TIL回输后临床症状的变化：15例患者中，3例培养的标本取得较小，细胞培养未达到要求的数量而未予输注。12例患者接受TIL回输后临 床症状改善明显，食欲增加，体重在术后两个月平均增加2.48kg，体力恢复快，无白细胞下降。除个别病例在输注TIL时有一过性发热、皮疹外无明显的副作用。
2.TIL细胞回输后与术前比较：SIL-2R水平有所下降，CD3、CD4升高，CD8下降，CD4/CD8比值增高，各项指标分别比较，经t检验处理，差异有显著意义(附表)。
, 百拇医药
附表 术前和TIL回输后T细胞亚群、SIL-2R水平比较(
±s) 组别
例数
SIL-
2R水平
T细胞亚群(%)
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
术前
, 百拇医药
12
638.6
64±8
30±4
28±3
1.1±0.2
回输
TIL后
12
546.1
78±8
38±5
25±4
, http://www.100md.com
1.5±0.3
P值
<0.05
<0.05
<0.01
<0.05
<0.05
3.临床随访资料：接受TIL输注治疗的12例患者均得到随访。其中，生存超过1年9例(75%)。生存2年以上4例(33%)，生存3年以上2例，1年内死亡3例。术后2年有2例有复发，复发部位予酒精注射治疗，至今仍存活。3例死亡者1例死于术后脑转移，2例死于肝衰竭。其中1例原发肿块<5cm，另两例肿块>5cm。
三、讨论
, http://www.100md.com
肿瘤浸润淋巴细胞的临床应用是继LAK细胞疗法之后的又一新的杀伤自体肿瘤细胞的免疫治疗方法。据Rosenberg[1]报道，TIL比LAK杀伤肿瘤细胞能力强50～100倍，Kradin等[2]也报道应用TIL对原发性肺癌进行治疗,并对输入的TIL进行了111In标记，在输入的不同时间行γ-摄像扫描，发现输入TIL48小时后，放射大多集中于肺肿瘤组织，表明TIL的靶向作用较强。李东复等[3]对肺癌的TIL应用临床治疗，结果表明患者免疫功能明显增强。我们的资料表明：TIL的实验室活性20～25天达到高峰，对自身肿瘤细胞杀伤能力强。临床应用，经T细胞亚群测定表明，免疫功能在回输治疗后有所增强；临床症状亦有不同程度的改善。肝原发肿块>5cm死亡、复发相对较多，这可能与残余癌细胞相对较多及肝内微小转移灶的存在有关。TIL回输治疗为肝癌的免疫辅助治疗增加了一种安全有效的方法，它作为肝癌综合治疗一种，对提高机体免疫力，对术后特异性杀伤残留癌细胞，消灭微小转移灶，延长生存期有较大的作用。 参考文献
, 百拇医药
1 Rosenberg SA.Use of tumor-infitrating lymphocytes and interleukin-2 in immunotherapy of patients wish metastatic melanoma. N Eng J Med ,1988, 319：1676.
2 Kradin RL, Kurnick JT, Lazarus DS, et al. Tumour-infiltrating lymphcytes and interleukin-2 in treatment of aduanced Cancer. Lancet, 1989, 1：577.
3 李东复，陈光利，王树和，等.肺癌术后患者肿瘤浸润淋巴细胞的临床疗效观察.中华肿瘤杂志，1995，17：152.
(收稿：1996-12-30 修回：1997-08-26), http://www.100md.com
单位：226001 江苏南通医学院附属医院肿属医院肿肿瘤科(张一心、尤其俋)；南通医学院微生物教研室(汪晓莺)
关键词：
中华医学杂志971125 作者从1993年5月～1996年6月对我院15例原发性肝癌手术切除患者中的12例进行了肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输治疗，现将结果报道如下。
一、对象和方法
1.对象：15例原发性肝癌患者均来自于我院肿瘤科门诊，其中男11例，女4例，年龄30～65岁，平均50.2岁，均经术前B超及CT证实。肿瘤直径≤5cm 5例，≥5cm 10例。所选病例术前均未经过化疗、放疗和其他治疗，无脑及肺转移，无严重心、肺功能不全。手术后病理证实均为肝细胞癌。
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2.方法：(1) TIL细胞的分离、培养和增殖：将手术切除的肿瘤块立即在无菌条件下去除肿瘤表面坏死组织和结缔组织，将瘤体5～10g剪成0.5mm×0.5mm×1.0mm左右的组织碎块、悬浮于酶消化液中消化3～4小时，过钢网，制成细胞悬液，将细胞悬液悬于双层淋巴细胞分离液中作非连续性密度梯度离心，分别收获上、下层细胞。上层多为肿瘤细胞，用于培养或常规冰存，下层细胞即为TIL细胞，将TIL细胞置于含抗生素的白介素2(1 000U/ml)的完全培养基中培养，至细胞数增殖到1～2×109/ml时为一次临床输注量。
(2) TIL的杀伤活性测定：将分离的TIL细胞浓度调整为1×106/ml，悬浮于10% AB型血清200U/ml庆大霉素，1 000U/ml白介素2的 RPMI 1640培养液中，置37℃，5% CO2培养箱内，3～5天换液一次，随时调整细胞浓度。靶细胞为自身肿瘤细胞。采用3H-TDR释放试验测定阶段的TIL杀伤活性，以3H-TDR释放百分率表示。计算公式：细胞杀伤率(%)=[1-(实验组PM值)/(对照组PM值)]×100%。
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(3) 自 体TIL细胞回输治疗：在手术后20～25天TIL细胞大量扩增，杀伤活性达到高峰，培养液中的肿瘤细胞完全消失。患者在接受回输前5天开始肌注γIL-24 000U，每次经静脉输注1×109～2×109/ml的TIL细胞，一周回输一次，共2～4周。设自身对照，在手术前及回输结束(2～4周)后一周分别测定外周血T细胞亚群及SIL-2R水平，观察机体临床症状及免疫状态的变化。
二、结果
1.TIL回输后临床症状的变化：15例患者中，3例培养的标本取得较小，细胞培养未达到要求的数量而未予输注。12例患者接受TIL回输后临 床症状改善明显，食欲增加，体重在术后两个月平均增加2.48kg，体力恢复快，无白细胞下降。除个别病例在输注TIL时有一过性发热、皮疹外无明显的副作用。
2.TIL细胞回输后与术前比较：SIL-2R水平有所下降，CD3、CD4升高，CD8下降，CD4/CD8比值增高，各项指标分别比较，经t检验处理，差异有显著意义(附表)。
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附表 术前和TIL回输后T细胞亚群、SIL-2R水平比较(
±s) 组别例数
SIL-
2R水平
T细胞亚群(%)
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
术前
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12
638.6
64±8
30±4
28±3
1.1±0.2
回输
TIL后
12
546.1
78±8
38±5
25±4
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1.5±0.3
P值
<0.05
<0.05
<0.01
<0.05
<0.05
3.临床随访资料：接受TIL输注治疗的12例患者均得到随访。其中，生存超过1年9例(75%)。生存2年以上4例(33%)，生存3年以上2例，1年内死亡3例。术后2年有2例有复发，复发部位予酒精注射治疗，至今仍存活。3例死亡者1例死于术后脑转移，2例死于肝衰竭。其中1例原发肿块<5cm，另两例肿块>5cm。
三、讨论
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肿瘤浸润淋巴细胞的临床应用是继LAK细胞疗法之后的又一新的杀伤自体肿瘤细胞的免疫治疗方法。据Rosenberg[1]报道，TIL比LAK杀伤肿瘤细胞能力强50～100倍，Kradin等[2]也报道应用TIL对原发性肺癌进行治疗,并对输入的TIL进行了111In标记，在输入的不同时间行γ-摄像扫描，发现输入TIL48小时后，放射大多集中于肺肿瘤组织，表明TIL的靶向作用较强。李东复等[3]对肺癌的TIL应用临床治疗，结果表明患者免疫功能明显增强。我们的资料表明：TIL的实验室活性20～25天达到高峰，对自身肿瘤细胞杀伤能力强。临床应用，经T细胞亚群测定表明，免疫功能在回输治疗后有所增强；临床症状亦有不同程度的改善。肝原发肿块>5cm死亡、复发相对较多，这可能与残余癌细胞相对较多及肝内微小转移灶的存在有关。TIL回输治疗为肝癌的免疫辅助治疗增加了一种安全有效的方法，它作为肝癌综合治疗一种，对提高机体免疫力，对术后特异性杀伤残留癌细胞，消灭微小转移灶，延长生存期有较大的作用。 参考文献
, 百拇医药
1 Rosenberg SA.Use of tumor-infitrating lymphocytes and interleukin-2 in immunotherapy of patients wish metastatic melanoma. N Eng J Med ,1988, 319：1676.
2 Kradin RL, Kurnick JT, Lazarus DS, et al. Tumour-infiltrating lymphcytes and interleukin-2 in treatment of aduanced Cancer. Lancet, 1989, 1：577.
3 李东复，陈光利，王树和，等.肺癌术后患者肿瘤浸润淋巴细胞的临床疗效观察.中华肿瘤杂志，1995，17：152.
(收稿：1996-12-30 修回：1997-08-26), http://www.100md.com