异丙酚对大鼠肺动脉平滑肌合成肌醇三磷酸的抑制作用
作者：魏敏杰 盛卓人 李 智 聂 桦 王俊科
单位：110001 沈阳，中国医科大学基础医学院药理学教研室(魏敏杰、李智、聂桦)；中国医科大学附属第一临床学院麻醉学教研室(盛卓人、王俊科)
关键词：
中华医学杂志971123 异丙酚(Propofol)是一种新型静脉麻醉药，大剂量应用可抑制心血管系统，出现心率减慢、血压下降等作用。
我们应用同位素竞争蛋白结合实验，检测了异丙酚对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)合成肌醇三磷酸(IP3)的影响，探讨异丙酚舒张血管平滑肌作用与其影响IP3引起钙释放机制的关系，阐明其抑制血管平滑肌的作用机制，为进一步深入研究奠定实验基础。
一、材料与方法
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1.标本：Wistar大鼠(雄性，200～250g)，制备肺动脉环标本，去除内皮细胞(操作在0℃ Krebs buffer中进行)。
2.试剂：[3H]肌醇三磷酸测试系统(IP3)；去甲肾上腺素(NE)、5羟色胺(5HT)、钙离子载体(calcium ionophore A23187，A23187)、二甲基亚砜(DMSO)等均购自 Sigma公司；异丙酚(Propofol)由英国捷利康公司提供，用DMSO配成所需浓度。其它为市售分析纯试剂。
3.器材：4430-Backman液体闪烁计数仪(美国)；P10/35衡温水浴振荡仪(日本)；BT-31高速低温离心机(瑞典)；722-Ⅱ型分光光度计(上海)等。
4.标本反应过程：按照Pijuan等[1]的方法，将制备好的血管环标本放入盛有2ml KB液(含25mmol*L-1 LiCl，3μmol*L-1 Propranolol)的试管中，于37℃稳定2小时，随机分成实验组与对照组。实验组加 30、100和300μmol/L异丙酚，对照组加等容积DMSO溶剂，5分钟后两组均加入3μmol/L NE、100μmol/L 5HT及10μmol/L A23187，准确记录反应时间，液氮终止反应，-70℃保存，待测IP3用。
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5.统计学处理：实验数据以
±s表示，采用均数差异t检验法进行统计学处理。
与对照组比较* P<0.05
附图 异丙酚抑制IP3合成的量效关系
二、结果
1.NE、5HT及A23187促进IP3合成作用：3μmol/L NE、100μmol/L 5HT以及10μmol/L A23187均显著促进PASMC合成IP3作用。NE在孵育1分钟时作用达高峰，促进PASMC合成IP3量为基线水平的248±53(%)；100μmol/L 5HT在孵育3分钟时作用达高峰，促进PASMC合成IP3量为277±60(%)；10μmol/L A23187在孵育5分钟时作用达高峰，促进PASMC合成IP3量为273±52(%)。
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2.不同浓度异丙酚抑制IP3生物合成的作用及比较：30、100和300μmol/L异丙 酚可显著抑制3μmol/L NE、100μmol/L 5HT和 10μmol/L A23187促进IP3合成作用。以对照组的NE，5HT和A23187促进IP3合成量为100%，计算各浓度异丙酚抑制IP3合成的百分数%，得到异丙酚抑制IP3合成作用的量效关系曲线(附图)。可见异丙酚具有剂量依赖性抑制PASMC生物合成IP3的作用。
三、讨论
细胞膜的磷酸肌醇(PI)类代谢系统是将多种细胞外信号传到细胞内的重要途径。研究表明，膜受体激动后通过GTP依赖性蛋白(GTP-dependent protein，Gp)使磷脂酶C(PLC)活化，促进磷脂酰肌醇4，5-二磷酸(PIP2)水解，生成IP3和二酰基甘 油(DG)[2，3]。IP3是膜受体兴奋→细胞内钙增加信号转导过程中的重要的第二信使，准确、特异性检测细胞内IP3量是阐明膜磷脂代谢水平的重要指标。本研究应用同位素放射配体结合实验，特异性检测了NE、5HT和A23187对PASMC促进合成IP3作用的时量关系及异丙酚的影响。结果表明，3.0μmol/L NE在作用1分钟时促进IP3合成作用最强，与基础时(100%)比较，升高IP3作用达248±53(%)；100μmol/L 5HT在作用3分钟时作用达峰值，与基础时(100%)比较，升高IP3合成作用为277±60(%)；10μmol/L A23187在孵育5分钟时，促IP3合成作用达峰值，比NE和5HT出现最大作用时间延迟，提示A23187与NE、5HT促进IP3合成的机制不同。异丙酚可抑制NE、5HT和A23187促进IP3合成作用呈剂量依赖性的抑制作用。从附图可见，30、100、300μmol/L异丙酚可剂量依赖性抑制NE、5HT和A23187促进IP3合成作用，提示异丙酚通过抑制PASMC的膜受体激动后活化的PI代谢途径使IP3合成减弱，且呈良好的剂量依赖关系，说明异丙酚舒张肺动脉平滑肌作用与抑制IP3介导的细胞内钙释放(IICR)机制密切相关。有关异丙酚对[Ca2+]i水平影响的研究，还将做进一步探讨。
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本课题为国家教委留学回国人员研启动基金资助项目
参考文献
1 Pijuan V, Irene L. Norepinephrine stimulates the productol trisphophate inositol tetrakiphosphate in rat aorta. Biochem. Biophys Res Commu, 1988, 156：240.
2 Ganitkevic VY, Isenberg G. Membrane potentialmodulates inositol 1, 4,5-trisphosphate-medialedtransients guinea-pig coronary myoctes. J Physiol, 1993, 470：35.
3 Benevolensky D, Moraru Ⅱ, Watras J. Micromolarcalcium decrease affinity of inositol trisposphatereceptor in vascular smooth muscle. Biochem J， 1994, 299(Pt)：631.
(收稿：1996-11-06 修回：1997-07-28), http://www.100md.com
单位：110001 沈阳，中国医科大学基础医学院药理学教研室(魏敏杰、李智、聂桦)；中国医科大学附属第一临床学院麻醉学教研室(盛卓人、王俊科)
关键词：
中华医学杂志971123 异丙酚(Propofol)是一种新型静脉麻醉药，大剂量应用可抑制心血管系统，出现心率减慢、血压下降等作用。
我们应用同位素竞争蛋白结合实验，检测了异丙酚对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)合成肌醇三磷酸(IP3)的影响，探讨异丙酚舒张血管平滑肌作用与其影响IP3引起钙释放机制的关系，阐明其抑制血管平滑肌的作用机制，为进一步深入研究奠定实验基础。
一、材料与方法
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1.标本：Wistar大鼠(雄性，200～250g)，制备肺动脉环标本，去除内皮细胞(操作在0℃ Krebs buffer中进行)。
2.试剂：[3H]肌醇三磷酸测试系统(IP3)；去甲肾上腺素(NE)、5羟色胺(5HT)、钙离子载体(calcium ionophore A23187，A23187)、二甲基亚砜(DMSO)等均购自 Sigma公司；异丙酚(Propofol)由英国捷利康公司提供，用DMSO配成所需浓度。其它为市售分析纯试剂。
3.器材：4430-Backman液体闪烁计数仪(美国)；P10/35衡温水浴振荡仪(日本)；BT-31高速低温离心机(瑞典)；722-Ⅱ型分光光度计(上海)等。
4.标本反应过程：按照Pijuan等[1]的方法，将制备好的血管环标本放入盛有2ml KB液(含25mmol*L-1 LiCl，3μmol*L-1 Propranolol)的试管中，于37℃稳定2小时，随机分成实验组与对照组。实验组加 30、100和300μmol/L异丙酚，对照组加等容积DMSO溶剂，5分钟后两组均加入3μmol/L NE、100μmol/L 5HT及10μmol/L A23187，准确记录反应时间，液氮终止反应，-70℃保存，待测IP3用。
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5.统计学处理：实验数据以
±s表示，采用均数差异t检验法进行统计学处理。与对照组比较* P<0.05
附图 异丙酚抑制IP3合成的量效关系
二、结果
1.NE、5HT及A23187促进IP3合成作用：3μmol/L NE、100μmol/L 5HT以及10μmol/L A23187均显著促进PASMC合成IP3作用。NE在孵育1分钟时作用达高峰，促进PASMC合成IP3量为基线水平的248±53(%)；100μmol/L 5HT在孵育3分钟时作用达高峰，促进PASMC合成IP3量为277±60(%)；10μmol/L A23187在孵育5分钟时作用达高峰，促进PASMC合成IP3量为273±52(%)。
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2.不同浓度异丙酚抑制IP3生物合成的作用及比较：30、100和300μmol/L异丙 酚可显著抑制3μmol/L NE、100μmol/L 5HT和 10μmol/L A23187促进IP3合成作用。以对照组的NE，5HT和A23187促进IP3合成量为100%，计算各浓度异丙酚抑制IP3合成的百分数%，得到异丙酚抑制IP3合成作用的量效关系曲线(附图)。可见异丙酚具有剂量依赖性抑制PASMC生物合成IP3的作用。
三、讨论
细胞膜的磷酸肌醇(PI)类代谢系统是将多种细胞外信号传到细胞内的重要途径。研究表明，膜受体激动后通过GTP依赖性蛋白(GTP-dependent protein，Gp)使磷脂酶C(PLC)活化，促进磷脂酰肌醇4，5-二磷酸(PIP2)水解，生成IP3和二酰基甘 油(DG)[2，3]。IP3是膜受体兴奋→细胞内钙增加信号转导过程中的重要的第二信使，准确、特异性检测细胞内IP3量是阐明膜磷脂代谢水平的重要指标。本研究应用同位素放射配体结合实验，特异性检测了NE、5HT和A23187对PASMC促进合成IP3作用的时量关系及异丙酚的影响。结果表明，3.0μmol/L NE在作用1分钟时促进IP3合成作用最强，与基础时(100%)比较，升高IP3作用达248±53(%)；100μmol/L 5HT在作用3分钟时作用达峰值，与基础时(100%)比较，升高IP3合成作用为277±60(%)；10μmol/L A23187在孵育5分钟时，促IP3合成作用达峰值，比NE和5HT出现最大作用时间延迟，提示A23187与NE、5HT促进IP3合成的机制不同。异丙酚可抑制NE、5HT和A23187促进IP3合成作用呈剂量依赖性的抑制作用。从附图可见，30、100、300μmol/L异丙酚可剂量依赖性抑制NE、5HT和A23187促进IP3合成作用，提示异丙酚通过抑制PASMC的膜受体激动后活化的PI代谢途径使IP3合成减弱，且呈良好的剂量依赖关系，说明异丙酚舒张肺动脉平滑肌作用与抑制IP3介导的细胞内钙释放(IICR)机制密切相关。有关异丙酚对[Ca2+]i水平影响的研究，还将做进一步探讨。
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本课题为国家教委留学回国人员研启动基金资助项目
参考文献
1 Pijuan V, Irene L. Norepinephrine stimulates the productol trisphophate inositol tetrakiphosphate in rat aorta. Biochem. Biophys Res Commu, 1988, 156：240.
2 Ganitkevic VY, Isenberg G. Membrane potentialmodulates inositol 1, 4,5-trisphosphate-medialedtransients guinea-pig coronary myoctes. J Physiol, 1993, 470：35.
3 Benevolensky D, Moraru Ⅱ, Watras J. Micromolarcalcium decrease affinity of inositol trisposphatereceptor in vascular smooth muscle. Biochem J， 1994, 299(Pt)：631.
(收稿：1996-11-06 修回：1997-07-28), http://www.100md.com