泪腺上皮性肿瘤α-1抗胰蛋白酶的免疫组化研究
作者：赵 平* 孙宪丽** 李辽青** 贺占国*** 李 彬**
单位：
关键词：免疫组织化学；肿瘤；腺上皮；α-1抗胰蛋白酶
泪腺上皮性肿瘤α 摘 要 应用α-1抗胰蛋白酶多克隆抗体对10例多形性腺瘤和10例腺样囊腺癌进行原位免疫标记研究。结果表明，10例多形性腺瘤均呈阳性反应；10例腺样囊腺癌中，7例呈阴性反应，3例阳性反应。但腺样囊腺癌的阳性反应程度明显低于多形性腺瘤。说明泪腺腺样囊腺癌的蛋白酶抑制物活性明显降低是该肿瘤具有较强的组织浸润力的原因之一。而且，α-1抗胰蛋白酶的免疫组化测定有助于泪腺上皮性肿瘤的良、恶性判断。
分类号 R777.210.4
Immunohistochemical study on the expression of Alpha-1 proteinase inhibitor in lacrimal gland epithelial tumors/Zhao Ping…∥Ophthalmol CHN.-1998，7(3).-178～180(Department of Ophthalmology，3rd Hospital，Hebei University of Medical Sciences，Shijiazhuang 050051)
, http://www.100md.com
To identify the expression of Alpha-1 proteinase inhibitor in 10 cases of pleomorphic adenoma of lacrimal gland and 10 cases of adenoid cystic carcinoma of lacrimal gland，immunohistochemical staining was employed.The positive reaction of anti-Alpha-1 proteinase inhibitor were observed in 10 cases of pleomorphic adenoma and 3 cases of adenoid cystic carcinoma，although the higher intensity of positive reaction was shown in the later.Our result demonstrated that the decrease of the activity of Alpha-1 proteinase inhibitor was one of the causes that the tumor was possessed of the stronger activity of infiltrating the tissues.Moreover，the immunohistochemical examination of the expression of Alpha-1 proteinase inhibitor was helpful to determine the malignancy of the epithelial tumors of lacrimal gland.
, 百拇医药
Subject terms Immunohistochemistry；Neoplasms，glandular epithelial；Alpha-1 antitrypsin
近年的研究表明，正常组织细胞和肿瘤细胞可产生大量的蛋白分解酶，而这些分解酶又受到各种各样蛋白酶抑制物的调节[1]。蛋白酶抑制物不仅可抑制浸润细胞对正常组织的降解作用[1]，而且可防止肿瘤细胞的增殖和播散[2]。目前，蛋白酶抑制物在一些正常组织及良性、恶性肿瘤组织内的分布、活性有些报道[1，3—5]，其在不同肿瘤组织内的分布差异有可能作为肿瘤恶性度判断的辅助指标，具有重要的临床病理学意义。本文应用α-1抗胰蛋白酶(属一类蛋白酶抑制物)多克隆抗体对泪腺上皮性肿瘤进行原位免疫标记研究，并就其在泪腺上皮性肿瘤不同组织学类型细胞中的染色情况及病理学意义进行讨论。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料来源
20例泪腺上皮性肿瘤组织标本(含多形性腺瘤10例，腺样囊腺癌10例)均选自北京市眼科研究所病理室1986年1月～1993年10月间存档的术后石蜡包埋组织。各例标本均切取5μm厚组织片各2张，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。
1.2 免疫组化染色
免疫组化染色采用ABC法。石蜡切片脱蜡、水化。胰蛋白酶消化30分钟，PBS液洗涤，1%牛血清白蛋白浸育30分钟，加入1∶50稀释的α-1抗胰蛋白酶(Dako公司)。PBS液洗涤，加入1∶100稀释的羊抗兔IgG抗体。PBS液洗涤，加入ABC复合物，PBS洗涤。DAB显色10～30分钟。PBS液洗涤。复染后封片。
2 结果
本研究结果显示，10例多形性腺瘤组织均为α-1抗胰蛋白酶阳性反应的棕黄色着色。呈棕黄色阳性染色的区域主要是细胞的聚集区、单层细胞排列的腺管区及间质组织中的部分散在细胞(图1)。细胞呈阳性染色的部分主要是细胞的胞浆区。但棕黄色着色程度不等，有些细胞近胞膜处染色程度加强(图1)。其中3例复发性多形性腺瘤，与初发病例相比，α-1抗胰蛋白酶阳性染色程度无明显不同。
, 百拇医药
在10例腺样囊腺癌中，7例组织细胞均呈阴性着色，偶可见到间质组织呈阳性棕黄色着色(图2)。但着色程度较淡。3例腺样囊腺癌组织的部分区域，可见阳性染色细胞的胞质呈均匀一致的弱阳性染色，其棕黄色着色程度明显弱于多形性腺瘤细胞的阳性着色。而且，也无近细胞膜区的染色加强现象。
各类肿瘤的瘤细胞核均呈阴性染色。
3 讨论
泪腺上皮性肿瘤为眼眶肿瘤。其组织类型有多种，以多形性腺瘤最为常见，约占50%。腺样囊腺癌居第二位，约占25%～30%[6]。多形性腺瘤与腺样囊腺癌在组织形态学和临床行为及预后等方面有很大区别[6，7]。
多形性腺瘤主要由上皮细胞和间质组织组成，以形态学的多形性为特征。其临床表现为缓慢生长的无痛性肿块，不侵犯周围组织，完整摘除即可治愈。但该肿瘤手术切除后易复发和恶性变，故临床上认为属交界性肿瘤。恶变区组织可表现为低分化癌、腺样囊腺癌等组织学改变。
, 百拇医药
腺样囊腺癌的组织学主要表现为筛网型、导管型和实体型。筛网型是该肿瘤的典型特征。然而，当这些特征性形态结构仅存在于肿瘤的某一区域或典型结构不明显时，腺样囊腺癌的病理学诊断仍存在一些困难。该肿瘤组织侵袭力较强，易浸润神经、眼外肌、眶骨等，常在一年内出现疼痛、上睑下垂、复视，最终多死于颅中窝扩散和器官转移。故属恶性肿瘤。
为了解两种类型肿瘤的生物学行为，特别是功能性蛋白质表达的异质性，我们对α-1抗胰蛋白酶在该类肿瘤的分布进行了免疫组织化学测定。α-1抗胰蛋白酶是蛋白分解酶在释放状态下维持组织基本机能的一种酶类，又称抗分解酶。分解酶与抗分解酶之间的平衡具有调节细胞间结合能力的作用。因此，分解酶与抗分解酶的存在优势，又是评价肿瘤浸润能力及细胞增殖力的客观指标[5]。一些学者[1]已证实乳腺正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤细胞都含有相同的蛋白酶抑制物。但在恶性肿瘤组织其蛋白酶抑制物的活性则明显降低。最近，石本惠子[5]对泪腺上皮性肿瘤的研究发现，10例多形性腺瘤细胞均为α-1蛋白酶抑制物阳性染色，间质组织为弱阳性或阴性染色。而2例腺样囊腺癌的细胞和间质组织成分均为阴性染色。我们的研究结果也证实多形性腺瘤细胞均为α-1抗胰蛋白酶阳性染色。复发病例与初发病例相比，其染色程度无明显差异。在10例腺样囊腺癌中，7例组织细胞呈阴性染色，3例组织部分区域细胞虽呈阳性染色，但棕黄色染色程度明显减弱。与多形性腺瘤相比，腺样囊腺癌细胞阳性染色率(30%)具有非常显著性差异(P<0.01)。由此可见，与恶性度高的腺样囊腺癌相比，α-1抗胰蛋白酶在结节形成能力强的多形性腺瘤具有明显的存在优势。而且，α-1抗胰蛋白酶活性降低所致的细胞间粘接能力减弱是腺样囊腺癌具有较强的组织浸润力的原因之一。因此，α-1抗胰蛋白酶的免疫组织化学测定可作为泪腺上皮性肿瘤良恶性判断的客观指标，具有病理学诊断的意义。与上述作者[5]的研究结果不同，在10例腺样囊腺癌中，有3例呈α-1抗胰蛋白酶的弱阳性表达。这是否意味着呈阳性反应的腺样囊腺癌比阴性反应者恶性度低、组织浸润力和增殖力差，尚有待于进一步的临床病理学研究。
, 百拇医药
图1 多形性腺瘤细胞呈棕黄色，近胞膜处染色程度加强，箭头示
图2 腺样囊腺癌绷组织细胞呈现阴性染色
*河北医科大学，050051石家庄市
**北京市眼科研究所
***石家计白求恩国际和平医院病理科
4 参考文献
1 Waxler B，Corey J，Wezeman FH.Low molecular weight proteinase inhibitors (1) Quantification and isolation of activity from benign and malignant human breast tissue samples.J Lab Clin Med，1984；104：528
, 百拇医药
2 Nichdson G.Cancer metastasis：organ colonization and the cell-surface properties of malignant cells.Biochem Biophys Acta，1982；695：113
3 Berg N，et al.Liver disease in adults with anti-trypsin dificienty.N Eng J Med，1972；287：1264
4 Aroni K，Kittas C，et al.An immunocytochemical study of the distribution of lysozyme，1-antitrypsin and 1-antichymotrypsin in the normal and pathological gall bladder.Virchows Arch A，1984；403：281
, 百拇医药
5 石本惠子，登板良雄，泽口昭一.泪腺上皮性肿疡におけるAlpha-1-proteinase Inhibitor の免疫组织化学的检讨.眼纪，1994；45(1)：35
6 Spencer WH.Opthalmic Pathology：An Atlas and Text book 3 WB Saunders Philadelphia 1986：2496
7 Lee DA，Campbell RJ，et al.A clinicopathologic study of primary adenoid cystic carcinoma of the lacrimal gland.Ophthalmology，1985；92：128
(1997-03-17收稿，1998-04-07修回), http://www.100md.com
单位：
关键词：免疫组织化学；肿瘤；腺上皮；α-1抗胰蛋白酶
泪腺上皮性肿瘤α 摘 要 应用α-1抗胰蛋白酶多克隆抗体对10例多形性腺瘤和10例腺样囊腺癌进行原位免疫标记研究。结果表明，10例多形性腺瘤均呈阳性反应；10例腺样囊腺癌中，7例呈阴性反应，3例阳性反应。但腺样囊腺癌的阳性反应程度明显低于多形性腺瘤。说明泪腺腺样囊腺癌的蛋白酶抑制物活性明显降低是该肿瘤具有较强的组织浸润力的原因之一。而且，α-1抗胰蛋白酶的免疫组化测定有助于泪腺上皮性肿瘤的良、恶性判断。
分类号 R777.210.4
Immunohistochemical study on the expression of Alpha-1 proteinase inhibitor in lacrimal gland epithelial tumors/Zhao Ping…∥Ophthalmol CHN.-1998，7(3).-178～180(Department of Ophthalmology，3rd Hospital，Hebei University of Medical Sciences，Shijiazhuang 050051)
, http://www.100md.com
To identify the expression of Alpha-1 proteinase inhibitor in 10 cases of pleomorphic adenoma of lacrimal gland and 10 cases of adenoid cystic carcinoma of lacrimal gland，immunohistochemical staining was employed.The positive reaction of anti-Alpha-1 proteinase inhibitor were observed in 10 cases of pleomorphic adenoma and 3 cases of adenoid cystic carcinoma，although the higher intensity of positive reaction was shown in the later.Our result demonstrated that the decrease of the activity of Alpha-1 proteinase inhibitor was one of the causes that the tumor was possessed of the stronger activity of infiltrating the tissues.Moreover，the immunohistochemical examination of the expression of Alpha-1 proteinase inhibitor was helpful to determine the malignancy of the epithelial tumors of lacrimal gland.
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Subject terms Immunohistochemistry；Neoplasms，glandular epithelial；Alpha-1 antitrypsin
近年的研究表明，正常组织细胞和肿瘤细胞可产生大量的蛋白分解酶，而这些分解酶又受到各种各样蛋白酶抑制物的调节[1]。蛋白酶抑制物不仅可抑制浸润细胞对正常组织的降解作用[1]，而且可防止肿瘤细胞的增殖和播散[2]。目前，蛋白酶抑制物在一些正常组织及良性、恶性肿瘤组织内的分布、活性有些报道[1，3—5]，其在不同肿瘤组织内的分布差异有可能作为肿瘤恶性度判断的辅助指标，具有重要的临床病理学意义。本文应用α-1抗胰蛋白酶(属一类蛋白酶抑制物)多克隆抗体对泪腺上皮性肿瘤进行原位免疫标记研究，并就其在泪腺上皮性肿瘤不同组织学类型细胞中的染色情况及病理学意义进行讨论。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料来源
20例泪腺上皮性肿瘤组织标本(含多形性腺瘤10例，腺样囊腺癌10例)均选自北京市眼科研究所病理室1986年1月～1993年10月间存档的术后石蜡包埋组织。各例标本均切取5μm厚组织片各2张，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。
1.2 免疫组化染色
免疫组化染色采用ABC法。石蜡切片脱蜡、水化。胰蛋白酶消化30分钟，PBS液洗涤，1%牛血清白蛋白浸育30分钟，加入1∶50稀释的α-1抗胰蛋白酶(Dako公司)。PBS液洗涤，加入1∶100稀释的羊抗兔IgG抗体。PBS液洗涤，加入ABC复合物，PBS洗涤。DAB显色10～30分钟。PBS液洗涤。复染后封片。
2 结果
本研究结果显示，10例多形性腺瘤组织均为α-1抗胰蛋白酶阳性反应的棕黄色着色。呈棕黄色阳性染色的区域主要是细胞的聚集区、单层细胞排列的腺管区及间质组织中的部分散在细胞(图1)。细胞呈阳性染色的部分主要是细胞的胞浆区。但棕黄色着色程度不等，有些细胞近胞膜处染色程度加强(图1)。其中3例复发性多形性腺瘤，与初发病例相比，α-1抗胰蛋白酶阳性染色程度无明显不同。
, 百拇医药
在10例腺样囊腺癌中，7例组织细胞均呈阴性着色，偶可见到间质组织呈阳性棕黄色着色(图2)。但着色程度较淡。3例腺样囊腺癌组织的部分区域，可见阳性染色细胞的胞质呈均匀一致的弱阳性染色，其棕黄色着色程度明显弱于多形性腺瘤细胞的阳性着色。而且，也无近细胞膜区的染色加强现象。
各类肿瘤的瘤细胞核均呈阴性染色。
3 讨论
泪腺上皮性肿瘤为眼眶肿瘤。其组织类型有多种，以多形性腺瘤最为常见，约占50%。腺样囊腺癌居第二位，约占25%～30%[6]。多形性腺瘤与腺样囊腺癌在组织形态学和临床行为及预后等方面有很大区别[6，7]。
多形性腺瘤主要由上皮细胞和间质组织组成，以形态学的多形性为特征。其临床表现为缓慢生长的无痛性肿块，不侵犯周围组织，完整摘除即可治愈。但该肿瘤手术切除后易复发和恶性变，故临床上认为属交界性肿瘤。恶变区组织可表现为低分化癌、腺样囊腺癌等组织学改变。
, 百拇医药
腺样囊腺癌的组织学主要表现为筛网型、导管型和实体型。筛网型是该肿瘤的典型特征。然而，当这些特征性形态结构仅存在于肿瘤的某一区域或典型结构不明显时，腺样囊腺癌的病理学诊断仍存在一些困难。该肿瘤组织侵袭力较强，易浸润神经、眼外肌、眶骨等，常在一年内出现疼痛、上睑下垂、复视，最终多死于颅中窝扩散和器官转移。故属恶性肿瘤。
为了解两种类型肿瘤的生物学行为，特别是功能性蛋白质表达的异质性，我们对α-1抗胰蛋白酶在该类肿瘤的分布进行了免疫组织化学测定。α-1抗胰蛋白酶是蛋白分解酶在释放状态下维持组织基本机能的一种酶类，又称抗分解酶。分解酶与抗分解酶之间的平衡具有调节细胞间结合能力的作用。因此，分解酶与抗分解酶的存在优势，又是评价肿瘤浸润能力及细胞增殖力的客观指标[5]。一些学者[1]已证实乳腺正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤细胞都含有相同的蛋白酶抑制物。但在恶性肿瘤组织其蛋白酶抑制物的活性则明显降低。最近，石本惠子[5]对泪腺上皮性肿瘤的研究发现，10例多形性腺瘤细胞均为α-1蛋白酶抑制物阳性染色，间质组织为弱阳性或阴性染色。而2例腺样囊腺癌的细胞和间质组织成分均为阴性染色。我们的研究结果也证实多形性腺瘤细胞均为α-1抗胰蛋白酶阳性染色。复发病例与初发病例相比，其染色程度无明显差异。在10例腺样囊腺癌中，7例组织细胞呈阴性染色，3例组织部分区域细胞虽呈阳性染色，但棕黄色染色程度明显减弱。与多形性腺瘤相比，腺样囊腺癌细胞阳性染色率(30%)具有非常显著性差异(P<0.01)。由此可见，与恶性度高的腺样囊腺癌相比，α-1抗胰蛋白酶在结节形成能力强的多形性腺瘤具有明显的存在优势。而且，α-1抗胰蛋白酶活性降低所致的细胞间粘接能力减弱是腺样囊腺癌具有较强的组织浸润力的原因之一。因此，α-1抗胰蛋白酶的免疫组织化学测定可作为泪腺上皮性肿瘤良恶性判断的客观指标，具有病理学诊断的意义。与上述作者[5]的研究结果不同，在10例腺样囊腺癌中，有3例呈α-1抗胰蛋白酶的弱阳性表达。这是否意味着呈阳性反应的腺样囊腺癌比阴性反应者恶性度低、组织浸润力和增殖力差，尚有待于进一步的临床病理学研究。
, 百拇医药
图1 多形性腺瘤细胞呈棕黄色，近胞膜处染色程度加强，箭头示
图2 腺样囊腺癌绷组织细胞呈现阴性染色
*河北医科大学，050051石家庄市
**北京市眼科研究所
***石家计白求恩国际和平医院病理科
4 参考文献
1 Waxler B，Corey J，Wezeman FH.Low molecular weight proteinase inhibitors (1) Quantification and isolation of activity from benign and malignant human breast tissue samples.J Lab Clin Med，1984；104：528
, 百拇医药
2 Nichdson G.Cancer metastasis：organ colonization and the cell-surface properties of malignant cells.Biochem Biophys Acta，1982；695：113
3 Berg N，et al.Liver disease in adults with anti-trypsin dificienty.N Eng J Med，1972；287：1264
4 Aroni K，Kittas C，et al.An immunocytochemical study of the distribution of lysozyme，1-antitrypsin and 1-antichymotrypsin in the normal and pathological gall bladder.Virchows Arch A，1984；403：281
, 百拇医药
5 石本惠子，登板良雄，泽口昭一.泪腺上皮性肿疡におけるAlpha-1-proteinase Inhibitor の免疫组织化学的检讨.眼纪，1994；45(1)：35
6 Spencer WH.Opthalmic Pathology：An Atlas and Text book 3 WB Saunders Philadelphia 1986：2496
7 Lee DA，Campbell RJ，et al.A clinicopathologic study of primary adenoid cystic carcinoma of the lacrimal gland.Ophthalmology，1985；92：128
(1997-03-17收稿，1998-04-07修回), http://www.100md.com