阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ras产物p21蛋白的表达
作者：辛军 王晓雄 孟书礼
单位：100853 北京,解放军总医院泌尿外科
关键词：阴茎肿瘤；癌基因蛋白质p21(ras)；基因表达
中华外科杂志/980520 【摘要】 目的 探讨阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ras产物p21蛋白表达的临床意义。方法 用免疫组化ABC法检测32例阴茎癌、32例癌旁组织和16例正常阴茎组织的癌基因ras产物p21蛋白。结果 28例癌组织，8例癌旁组织中有p21蛋白表达，而16例正常阴茎组织中p21阴性。p21蛋白和病理分级、临床分期呈正相关表达，即随着分级和分期的上升阳性增强，并且癌旁组织p21蛋白表达阳性者都显示了早期复发和转移的不良预后。结论 p21蛋白可作为阴茎癌恶性程度及预后评估的参考指标。
Expression of oncogene ras product p21 protein in the tissues of penis cancer and its surrounding tissues Xin Jun, Wang Xiaoxiong, Meng Shuli.Departnent of Urology, General Hospital of People′s Liberation Army, Beijing 100853.
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To explore the clinical significance of expression of oncogene ras product p21 protein in the tissues of penis cancer and its surrounding tissues. Method Oncogen ras product p21 protein in 32 cases of penis cancer,32 cases of paracarcinoma tissues and in 16 cases of normal penis tissues were detected by immunohistochemical ABC method. Result p21 protein expressed in 28 cases of penis cancer and 8 cases of paracarcinoma tissues, but it did not express in 16 cases of normal penis. Expression of p21 protein was related to pathologcal grading and clinical stage i. e,expression of p21 protein enhanced with the increasing of grading and stage. The positive cases of p21 protein expression in paracarnoma tissue had worse impact on the prognosis of early recurrence and metastasis. Conclusion p21 protein could be used as predictor of malignant potential and prognosis of penis cancer.
, 百拇医药
【Key words】 Penile neoplasms Oncogene protein p21(ras) Gene expression
有关泌尿系肿瘤如肾癌和膀胱癌癌基因表达的变化已有较多报道[1，2]。为探讨阴茎癌癌基因表达及其与预后的关系，我们用ABC免疫组织化学技术,从分子生物学角度对阴茎癌ras基因产物p21蛋白进行了定性检测和综合分析,结果报道如下。
资料与方法
1.材料： 标本为阴茎鳞状上皮癌和癌旁组织各32例，阴茎正常组织16例(正常组织取自非泌尿系统疾病的尸体，癌旁是指距病变2 cm部位)。所有标本均经病理检查核实诊断。p21单克隆抗体和ABC试剂盒购于北京华美生物工程公司。
2.方法：将石蜡包埋的阴茎癌、癌旁组织及正常组织进行连续切片，厚度为5 μm,HE染色以核实诊断。此后免疫组化染色：(1)二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；(2)0.5%双氧水-甲醇溶液处理30分钟，除去内源酶；(3)1%牛血清白蛋白保护37℃,15分钟，PBS洗3次，每次5分钟；加ras-p21单抗,在37℃条件下反应90分钟，PBS洗片，加Biotin标记的免抗鼠IgG 37℃温育90分钟，取出后再用PBS洗片加ABC酶复合物37℃120分钟，PBS洗3次，加DAB显色水洗，用苏木素衬染，酒精脱水，二甲苯透明并封片。用四级判定法光镜下观察，不着色者为阴性，黄色者为阳性“+”，深黄色者为强阳性“++”，棕色者为极强阳性“+++”。
, 百拇医药
结果
ras基因产物p21蛋白ABC免疫组化结果见表1、2、3。由表1可知，正常组织中无p21蛋白,而癌和癌旁组织中均显示出不同程度的阳性率。虽然癌旁组织p21蛋白的表达明显低于癌组织,但这8例癌旁组织阳性者显示了极差的预后,其中4例1年内局部复发,3例出现腹股沟淋巴结转移,1例在12个月时出现肺转移。
表1 3组标本p21蛋白表达结果 组别
例数
p21阳性例数
%
阴茎癌组
32
28
, 百拇医药
87.8
阴茎癌旁组
32
8
25.0
正常阴茎组
16
0
0
表2 阴茎癌病理分级与p21蛋白的关系 病理分级
例数
p21阳性例数
%
, http://www.100md.com
+
++
+++
Ⅰ级
16
11
2
0
81.3
Ⅱ级
11
2
6
2
, http://www.100md.com
90.9
Ⅲ级
5
0
1
4
100.0
表3 阴茎癌临床分期与p21蛋白的关系 病理分级
例数
p21阳性例数
%
+
++
, 百拇医药
+++
T1
18
12
3
0
83.3
T2
10
2
5
1
80.0
, http://www.100md.com
T3
4
0
1
3
100.0
由表2可知，p21蛋白随肿瘤分级而增高。Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级比较，经相关分析，P<0.01，差异有显著意义。
由表3可知，p21蛋白随肿瘤临床分期而增高。T1和T2分别与T3比较,P<0.01，差异有显著意义。
讨论
阴茎癌多见于40～60岁有包茎或包皮过长的患者。包茎或包皮过长导致包皮内腔长期包皮垢堆积，包皮垢的长期刺激和局部慢性炎症，日久造成阴茎局部组织细胞的变性恶化。阴茎癌最常见的转移途径是淋巴结转移，患者就诊时许多有腹股沟淋巴结肿大。无淋巴结转移者经手术治疗，5年存活率大于90%，而手术时已有腹股沟淋巴结转移者则5年生存率约30%，且复发率很高[3],故早期诊断与预后关系密切。然而，在癌变早期，龟头或包皮上皮仅出现局部肥厚或丘疹状隆起，加之该病极易伴发感染，许多患者包茎或包皮不能上翻，故容易延误诊断。约50%～75%的患者确诊时有腹股沟淋巴结肿大。目前研究表明，癌基因在组织的生长发育及肿瘤的发生发展中起重要作用，特别是癌基因在肿瘤中的表达，对研究肿瘤的发生机制及其预后观察提供了分子生物学的依据[4]。p21蛋白作为肿瘤发生发展过程中的代谢产物,与肿瘤生物学特性有密切关系。当癌基因ras突变时,可导致基因活化，使基因产物p21过量表达[5]。通过对p21的检测,可以了解这类癌基因在蛋白质水平的表达,借以了解癌基因的激活、扩增等情况。
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Czerniak等[6]用PCR扩增法研究膀胱癌ras基因突变和p21关系，证明p21水平在突变肿瘤表达度高，可作为病理诊断和临床肿瘤分期的参考指标。本研究采用快速、敏感、简便的ABC免疫组化方法检测，利用生物素的特性，通过逐级放大靶系统的方法,提高了p21蛋白的阳性表达，使区别正常上皮与肿瘤组织，从而早期诊断阴茎癌成为可能。尤其是对癌旁组织的检测将对肿瘤连同周围的组织切除范围的确定，以及对在阴茎癌手术时是否做腹股沟淋巴结清除术提供了依据。实验结果表明，p21蛋白和病理分级、临床分期呈正相关表达，即随分级和分期的上升其阳性增强。这一结果与Chesa认为分化好的肿瘤p21蛋白表达比分化差的低的观点一致[7]。而癌旁组织p21蛋白阳性者则预后更差，说明p21蛋白可作为癌前病变及癌转移的早期信号指标，因为在所取的16例阴茎正常组织中无p21蛋白的表达。通过本研究，我们认为对怀疑阴茎癌取活检核实诊断或在施行阴茎癌手术时，同时检测癌基因ras产物p21蛋白是提高诊断率和指导进一步治疗(如腹股沟淋巴结清除术、放、化疗等)的有效方法，并可避免行淋巴结活检所造成的癌细胞种植，而且对肿瘤预后和术后定期随诊的监测也有着重要的临床意义。
, 百拇医药
参考文献
1马腾骧,在分子生物学水平上对膀胱癌的发生与治疗进行深入的研究.中华泌尿外科杂志，1994，15：403-404.
2Slamon DJ. Expression of celluar oncogenes in human malignancies. Science, 1984,224:256-257.
3吴阶平,主编.泌尿外科.济南:山东科学技术出版社,1995.538-539.
4Tabin C T. Mechanism of activaton of a human oncogene. Nature,1982,300:143-144.
5Der C J. Biological and biochemical properties of human ras gene mutated at codon 61. Cell, 1986,44:167-168.
6Czerniak B, Cohen GL, Etkind P. Concurrent coding and regulatory sequence of the He-ras gene in urinary bladder carcinomas. Human Pathol, 1992,23:1199-1110.
7Chesas. Expression of the p21 ras in normal and malignant human tissue:lack of associated with proliferation and malignat. Proc Natl Acad Sci USA,1987,84:3234-3235., 百拇医药
单位：100853 北京,解放军总医院泌尿外科
关键词：阴茎肿瘤；癌基因蛋白质p21(ras)；基因表达
中华外科杂志/980520 【摘要】 目的 探讨阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ras产物p21蛋白表达的临床意义。方法 用免疫组化ABC法检测32例阴茎癌、32例癌旁组织和16例正常阴茎组织的癌基因ras产物p21蛋白。结果 28例癌组织，8例癌旁组织中有p21蛋白表达，而16例正常阴茎组织中p21阴性。p21蛋白和病理分级、临床分期呈正相关表达，即随着分级和分期的上升阳性增强，并且癌旁组织p21蛋白表达阳性者都显示了早期复发和转移的不良预后。结论 p21蛋白可作为阴茎癌恶性程度及预后评估的参考指标。
Expression of oncogene ras product p21 protein in the tissues of penis cancer and its surrounding tissues Xin Jun, Wang Xiaoxiong, Meng Shuli.Departnent of Urology, General Hospital of People′s Liberation Army, Beijing 100853.
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【Abstract】 Objective To explore the clinical significance of expression of oncogene ras product p21 protein in the tissues of penis cancer and its surrounding tissues. Method Oncogen ras product p21 protein in 32 cases of penis cancer,32 cases of paracarcinoma tissues and in 16 cases of normal penis tissues were detected by immunohistochemical ABC method. Result p21 protein expressed in 28 cases of penis cancer and 8 cases of paracarcinoma tissues, but it did not express in 16 cases of normal penis. Expression of p21 protein was related to pathologcal grading and clinical stage i. e,expression of p21 protein enhanced with the increasing of grading and stage. The positive cases of p21 protein expression in paracarnoma tissue had worse impact on the prognosis of early recurrence and metastasis. Conclusion p21 protein could be used as predictor of malignant potential and prognosis of penis cancer.
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【Key words】 Penile neoplasms Oncogene protein p21(ras) Gene expression
有关泌尿系肿瘤如肾癌和膀胱癌癌基因表达的变化已有较多报道[1，2]。为探讨阴茎癌癌基因表达及其与预后的关系，我们用ABC免疫组织化学技术,从分子生物学角度对阴茎癌ras基因产物p21蛋白进行了定性检测和综合分析,结果报道如下。
资料与方法
1.材料： 标本为阴茎鳞状上皮癌和癌旁组织各32例，阴茎正常组织16例(正常组织取自非泌尿系统疾病的尸体，癌旁是指距病变2 cm部位)。所有标本均经病理检查核实诊断。p21单克隆抗体和ABC试剂盒购于北京华美生物工程公司。
2.方法：将石蜡包埋的阴茎癌、癌旁组织及正常组织进行连续切片，厚度为5 μm,HE染色以核实诊断。此后免疫组化染色：(1)二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；(2)0.5%双氧水-甲醇溶液处理30分钟，除去内源酶；(3)1%牛血清白蛋白保护37℃,15分钟，PBS洗3次，每次5分钟；加ras-p21单抗,在37℃条件下反应90分钟，PBS洗片，加Biotin标记的免抗鼠IgG 37℃温育90分钟，取出后再用PBS洗片加ABC酶复合物37℃120分钟，PBS洗3次，加DAB显色水洗，用苏木素衬染，酒精脱水，二甲苯透明并封片。用四级判定法光镜下观察，不着色者为阴性，黄色者为阳性“+”，深黄色者为强阳性“++”，棕色者为极强阳性“+++”。
, 百拇医药
结果
ras基因产物p21蛋白ABC免疫组化结果见表1、2、3。由表1可知，正常组织中无p21蛋白,而癌和癌旁组织中均显示出不同程度的阳性率。虽然癌旁组织p21蛋白的表达明显低于癌组织,但这8例癌旁组织阳性者显示了极差的预后,其中4例1年内局部复发,3例出现腹股沟淋巴结转移,1例在12个月时出现肺转移。
表1 3组标本p21蛋白表达结果 组别
例数
p21阳性例数
%
阴茎癌组
32
28
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87.8
阴茎癌旁组
32
8
25.0
正常阴茎组
16
0
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表2 阴茎癌病理分级与p21蛋白的关系 病理分级
例数
p21阳性例数
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Ⅰ级
16
11
2
0
81.3
Ⅱ级
11
2
6
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90.9
Ⅲ级
5
0
1
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表3 阴茎癌临床分期与p21蛋白的关系 病理分级
例数
p21阳性例数
%
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T1
18
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83.3
T2
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T3
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由表2可知，p21蛋白随肿瘤分级而增高。Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级比较，经相关分析，P<0.01，差异有显著意义。
由表3可知，p21蛋白随肿瘤临床分期而增高。T1和T2分别与T3比较,P<0.01，差异有显著意义。
讨论
阴茎癌多见于40～60岁有包茎或包皮过长的患者。包茎或包皮过长导致包皮内腔长期包皮垢堆积，包皮垢的长期刺激和局部慢性炎症，日久造成阴茎局部组织细胞的变性恶化。阴茎癌最常见的转移途径是淋巴结转移，患者就诊时许多有腹股沟淋巴结肿大。无淋巴结转移者经手术治疗，5年存活率大于90%，而手术时已有腹股沟淋巴结转移者则5年生存率约30%，且复发率很高[3],故早期诊断与预后关系密切。然而，在癌变早期，龟头或包皮上皮仅出现局部肥厚或丘疹状隆起，加之该病极易伴发感染，许多患者包茎或包皮不能上翻，故容易延误诊断。约50%～75%的患者确诊时有腹股沟淋巴结肿大。目前研究表明，癌基因在组织的生长发育及肿瘤的发生发展中起重要作用，特别是癌基因在肿瘤中的表达，对研究肿瘤的发生机制及其预后观察提供了分子生物学的依据[4]。p21蛋白作为肿瘤发生发展过程中的代谢产物,与肿瘤生物学特性有密切关系。当癌基因ras突变时,可导致基因活化，使基因产物p21过量表达[5]。通过对p21的检测,可以了解这类癌基因在蛋白质水平的表达,借以了解癌基因的激活、扩增等情况。
, http://www.100md.com
Czerniak等[6]用PCR扩增法研究膀胱癌ras基因突变和p21关系，证明p21水平在突变肿瘤表达度高，可作为病理诊断和临床肿瘤分期的参考指标。本研究采用快速、敏感、简便的ABC免疫组化方法检测，利用生物素的特性，通过逐级放大靶系统的方法,提高了p21蛋白的阳性表达，使区别正常上皮与肿瘤组织，从而早期诊断阴茎癌成为可能。尤其是对癌旁组织的检测将对肿瘤连同周围的组织切除范围的确定，以及对在阴茎癌手术时是否做腹股沟淋巴结清除术提供了依据。实验结果表明，p21蛋白和病理分级、临床分期呈正相关表达，即随分级和分期的上升其阳性增强。这一结果与Chesa认为分化好的肿瘤p21蛋白表达比分化差的低的观点一致[7]。而癌旁组织p21蛋白阳性者则预后更差，说明p21蛋白可作为癌前病变及癌转移的早期信号指标，因为在所取的16例阴茎正常组织中无p21蛋白的表达。通过本研究，我们认为对怀疑阴茎癌取活检核实诊断或在施行阴茎癌手术时，同时检测癌基因ras产物p21蛋白是提高诊断率和指导进一步治疗(如腹股沟淋巴结清除术、放、化疗等)的有效方法，并可避免行淋巴结活检所造成的癌细胞种植，而且对肿瘤预后和术后定期随诊的监测也有着重要的临床意义。
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参考文献
1马腾骧,在分子生物学水平上对膀胱癌的发生与治疗进行深入的研究.中华泌尿外科杂志，1994，15：403-404.
2Slamon DJ. Expression of celluar oncogenes in human malignancies. Science, 1984,224:256-257.
3吴阶平,主编.泌尿外科.济南:山东科学技术出版社,1995.538-539.
4Tabin C T. Mechanism of activaton of a human oncogene. Nature,1982,300:143-144.
5Der C J. Biological and biochemical properties of human ras gene mutated at codon 61. Cell, 1986,44:167-168.
6Czerniak B, Cohen GL, Etkind P. Concurrent coding and regulatory sequence of the He-ras gene in urinary bladder carcinomas. Human Pathol, 1992,23:1199-1110.
7Chesas. Expression of the p21 ras in normal and malignant human tissue:lack of associated with proliferation and malignat. Proc Natl Acad Sci USA,1987,84:3234-3235., 百拇医药