蒺藜总皂甙抑制培养的牛脑微血管内皮细胞表达E选择素

http://www.100md.com 《第二军医大学学报》 1998年第6期

     作者：徐江平 李铁军 芮耀诚 刘 健△

    单位：第二军医大学长海医院妇产科，上海，200433；△上海市第一人民医院妇产科，上海，200080 陈淑影，女，1962年7月生，主治医师

    关键词：蒺藜；血管内皮；白细胞介素1β；E选择素

    摘要 目的摘要 目的：观察蒺藜总皂甙(GSTT)对牛脑微血管内皮细胞(BCMEC)表达E选择素的影响。方法：流式细胞仪测定白细胞介素1β(IL-1β)诱导BCMEC粘附大鼠血单核细胞(MNC)和中性粒细胞(NTP)的数目；应用ELISA法检测BCMEC表达E选择素的量。结果：BCMEC 经IL-1β诱导后，明显增加细胞表面E选择素的表达； BCMEC与白细胞的粘附率亦明显增加，对MNC的粘附率从(12.9±0.4)% 增至 (45.7±0.6)%，对NTP的粘附率从(14.7±0.3)%增至(44.9±0.6)%。抗E选择素单克隆抗体(AEmAb)能显著降低IL-1β的诱导作用。在IL-1β处理前，用GSTT(0.01～1.00 g/L)与BCMEC共孵育，则GSTT可浓度依赖性地抑制IL-1β的诱导作用，降低E选择素的表达量。结论：GSTT能抑制BCMEC表达E选择素。
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    中国图书资料分类法分类号 R972.6；R285.5

    Inhibition of gross saponins from Tribulus terrestris L. on expression of E-selectin in cultured bovine cerebral microvessel endothelial cells

    Xu Jiangping, Li Tiejun, Rui Yaocheng, Liu Jian (Department of Pharmacology, College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)

    Abstract Objective: To study the effect of extract from leaves of gross saponins from Tribulus terrestris L. (GSTT) on expression of E-selectin in cultured bovine cerebral microvessel endothelial cells (BCMEC) induced by IL-1β. Methods: IL-1β-induced E-selectin expression on the cellular surface and endothelial adhesivity toward monocytes (MNC) and neutrophils (NTP) was studied using BCMEC. The adhesive cell number to BCMEC monolayers was counted by flow cytometry. E-selectin on the surface was measured by ELISA. Results: Pretreatment of BCMEC with IL-1β significantly enhanced E-selectin expression on the cellular surface and increased MNC and NTP adhesion to BCMEC from (12.9±0.4)% to (45.7±0.6)% and from (14.7±0.3)% to (44.9±0.6)%, respectively. Anti-E-selectin mAb might block the effect of IL-1β. GSTT (0.01～1.00 g/L) inhibited the effect of IL-1β in concentration-dependent manner. Conclusion: GSTT inhibited expression of E-selectin in BCMEC.
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    Key words Tribulus terrestris L.; vascular endothelium; interleukin-1β; E-selectin

    蒺藜总皂甙(GSTT)是从蒺藜地上全草提取的，临床已广泛用于治疗脑和心血管疾病^[1]。大量基础和临床研究表明，GSTT具有防治动脉硬化，改善血液流变性，改善微循环，并选择性增加脑缺血部位的血供及提高抗氧自由基作用^[2]。最近的研究发现，在脑缺血/再灌注时，白细胞进入炎症部位包括两个阶段，首先在血管内皮表面滚动,此过程由在血管内皮细胞上的细胞粘附分子E选择素(E-selectin,CD62E)和白细胞表面的L选择素与它们的寡糖配基(SLex)相互作用来完成，而后通过其他粘附分子迁移到炎症组织^[3,4]。本研究将利用白细胞介素1β(Interleukin-1β, IL-1β)诱导体外培养的新生牛脑微血管内皮细胞(BCMEC)，观察GSTT对E选择素表达的影响，以进一步阐明其对脑缺血/再灌注损伤早期的保护作用机制。
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    1 材料和方法

    1.1 药品和试剂 GSTT由本院植物化学教研室提取；抗E选择素单克隆抗体(68-5H11，AEmAb)购自Pharmingen公司；辣根过氧化物酶标记羊抗大鼠IgG(HRP-IgG),Calbiochem公司产品；IL-1β，意大利Sclavo Research Center 提供;牛血清清蛋白(BSA)和邻苯二胺，Sigma公司产品；新生牛血清(NBS)、羊血清(NGS)购自华美生物工程公司；其他试剂均为分析纯或所能达到的最高等级。

    1.2 BCMEC的培养 按本室已建立的方法^[5]培养。原代细胞12～15 d形成融合单层，用0.1%胰酶(Sigma公司产品)消化传代,3～5 d传一代，用4～6代细胞进行实验。

    1.3 大鼠血单核细胞(MNC)与中性粒细胞(NTP)的分离 按文献[6]进行。将分离提纯的MNC和NTP用0.1% BSA/PBS溶液悬浮，并调整细胞浓度为5×10⁹个/L备用。
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    1.4 细胞粘附实验 4～6代的BCMEC在96孔培养板生长48 h，呈致密单层，实验前用无血清培养基培养24 h。给药组用不同浓度GSTT预处理2 h，再经IL-1β诱导4 h，加入0.1 ml MNC或NTP孵育60 min。用Hank溶液洗去未粘附细胞，再加入0.1 ml 10 mmol/L EDTA/PBS溶液解离已粘附细胞30 min，吸出解离液，用血细胞记数仪(FACSⅢ型，BD公司产品)计数MNC或NTP数目，以粘附细胞占加入总细胞的百分率为粘附率。

    1.5 ELISA方法 参考文献[4]进行。融合内皮细胞单层经不同浓度GSTT预处理2 h，再经IL-1β诱导4 h，用PBS缓冲液洗涤3次，0.05%戊二醛固定3 h，2% NGS/PBS封闭2 h后，加入0.1 ml 2 mg/L AEmAb室温孵育3 h。 PBS洗涤3次，加0.1 ml 1∶1 000 HRP-IgG孵育2 h后, 用PBS洗涤3次，加邻苯二胺底物反应30 min, 用50 μl 2 mol/L NaOH终止反应，在酶标仪(BIO-BAD450型)492 nm处测D值。

    1.6 统计学处理 所有数据用+s表示，并用Student-t检验或单因素方差分析进行检验。

    2 结 果>Transfer interrupted!, 百拇医药

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/analecta/1998/06/01/14/184.htm