重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr-细胞中的高效表达
作者：陈 坚 刘小萍 曹韫旭 陆德如
单位：
关键词：红细胞生成素；基因重组；真核表达
摘要 目的摘要 目的：使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达。方法： 利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO 和 pEF-EPO，分别用 DEAE-dextran 法转染COS7细胞，作瞬时高表达，选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染 CHO-dhfr-细胞，加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择，作稳定性高表达。 结果： pED-EPO 和 pEF-EPO转染COS7细胞后72 h表达量分别为17.8和21.0 ng/ml，pEF-EPO 转染 CHO-dhfr-细胞，随着MTX浓度的增加，CHO-dhfr+的克隆数减少，而混合克隆的EPO表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株，其3 d表达量为16 μg/ml。结论：rhEPO在CHO细胞中获得了高表达。
中国图书资料分类法分类号 Q784
High level expression of recombinant human erythropoietin cDNA in CHO-dhfr- cell
Chen Jian, Liu Xiaoping, Cao Yunxu, Lu Deru (Department of Molecular Genetics, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: To obtain high level expression of re>Transfer interrupted!, http://www.100md.com
单位：
关键词：红细胞生成素；基因重组；真核表达
摘要 目的摘要 目的：使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达。方法： 利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO 和 pEF-EPO，分别用 DEAE-dextran 法转染COS7细胞，作瞬时高表达，选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染 CHO-dhfr-细胞，加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择，作稳定性高表达。 结果： pED-EPO 和 pEF-EPO转染COS7细胞后72 h表达量分别为17.8和21.0 ng/ml，pEF-EPO 转染 CHO-dhfr-细胞，随着MTX浓度的增加，CHO-dhfr+的克隆数减少，而混合克隆的EPO表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株，其3 d表达量为16 μg/ml。结论：rhEPO在CHO细胞中获得了高表达。
中国图书资料分类法分类号 Q784
High level expression of recombinant human erythropoietin cDNA in CHO-dhfr- cell
Chen Jian, Liu Xiaoping, Cao Yunxu, Lu Deru (Department of Molecular Genetics, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: To obtain high level expression of re>Transfer interrupted!, http://www.100md.com