细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探
作者：卫立辛 钱卫珠 闫振林 沈 锋 谢天培 王 皓 刘彦君 施军霞 吴孟超 郭亚军
单位：
关键词：肝肿瘤；融合；肿瘤疫苗
摘要 目的摘要 目的：观察大鼠BERH-2肝癌细胞与自体激活B细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与T细胞亚群的关系。方法：(1) 应用聚乙二醇(PEG)融合大鼠BERH-2肝癌细胞与激活B细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；(2) 事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌BERH-2细胞和大鼠膀胱癌NBT-Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；(3) 该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠CD4单抗或抗CD8单抗多次注射，以清除大鼠CD4+或CD8+ T细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：BERH-2细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而NBT-Ⅱ细胞可致瘤；事先清除CD4+或CD8+ T 细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌BERH-2细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了CD4+细胞后不能被BERH-2细胞致瘤，清除了CD8+细胞后则可被BERH-2细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用，这种作用与CD4+和CD8+ T细胞有关。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R735.7
Preliminary observation of anti-tumor specificity and T cell role by cellular fusion rat hepatocarcinoma vaccine in vivo
Wei Lixin, Qian Weizhu, Yan Zhenlin, Shen Feng, Xie Tianpei, Wang Hao, Liu Yanjun, Shi Junxia, Wu Mengchao, Guo Yajun (Tumor Immunology and Gene Therapy Center, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai, 200438)
, 百拇医药 Abstract Objective: To observe the special antitumor effect of the cell fusion rat hepatic tumor vaccine made by cell fusion between rat BERH-2 hepatic tumor cell line and autologous B lymphocyte and to observe the relationship between the special antitumor effect of this tumor vaccine and the subtypes of T cells. Methods: The fusion cell rat hepatic tumor vaccine was made by cell fusion between rat BERH-2 hepatic tumor cell line and activated B lymphocyte and PEG was used as the fusion agent. Two groups of rats ,immunized by the vaccine first, were then inoculated by BERH-2 cells and rat NBT-Ⅱ bladder tumor cell line respectively, and then the special antitumor effect was evaluated. In order to know the relationship between the special antitumor effect of the tumor vaccine and the subtypes of T cells, the rats, either before or after its immunization with the vaccine, were injected by mouce anti-rat CD4 monoclonal antibody or by mouse anti-rat CD8 monoclonal antibody several times to eliminate CD4+ or CD8+ T lymphocyte correspondingly, and then, tumorigenicity was observed. Results: Rats, first immunized with the vaccine, developed no tumor after BERH-2 cells inoculation, while developed tumor after inoculated with NBT-Ⅱ cells. Both groups of the rats, whatever eliminated CD4+ or CD8+ T lymphocyte, developed tumor after immunization by the tumor vaccine. Rats, first immunized by the tumor vaccine, were divided into two groups, one group, which was eliminated CD4+ T lymphocyte and then were injected with BERH-2 cells, didnt develop tumor; the other group, which was eliminated CD8+ T lymphocyte and then also injected with BERH-2 cells, did develop tumor. Conclusion: The fusion cell rat hepatic tumor vaccine has special antitumor effect, which is closely related to CD4+ and CD8+ T lymphocyte.
, 百拇医药
Key words liver neoplasms; fusion； vaccine
恶性肿瘤疫苗制备是抗肿瘤免疫治疗研究的重要策略之一[1]。目前肿瘤疫苗主要经过对肿瘤细胞修饰或改造获得，故主要适用肿瘤患者手术后对残余灶杀灭或根治术后的预防复发。肿瘤细胞通常不表达激发宿主免疫反应所必需的信号，这是其逃避机体免疫监控的重要机制。在分子水平，具体表现为：主要组织相容性复合物(MHC)表达水平较低；抗原提呈途径的改变，使肿瘤特异性抗原不能向宿主T细胞提呈；缺乏激活宿主免疫系统所必需的共刺激分子或粘附分子；产生影响宿主免疫系统的各种因子。激活的B细胞是最有效的抗原提呈细胞。我们前期的工作也表明，将肿瘤细胞与激活的B细胞融合后产生的融合细胞，既表达肿瘤特异性抗原，又可将该抗原有效地提呈给T细胞，同时还补充了肿瘤细胞所缺乏的共刺激分子，使T细胞激活，从而杀灭肿瘤[2～4]。本实验拟进一步观察细胞融合大鼠肝癌疫苗抗肿瘤的特异性，并初步探讨其抗肿瘤作用的机制。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 肝癌细胞和激活B细胞的融合 BERH-2大鼠肝癌细胞系：从Wistar 大鼠中化学诱发的肝细胞癌，生长迅速，可在同种系动物肝脏内长成实体瘤。 B细胞的激活：将牛血清清蛋白与Freund完全佐剂混合后免疫大鼠，14 d后可从其脾脏中分离获得激活的B细胞。将BERH-2细胞及激活B淋巴细胞以1∶10比例在含有50%不同分子量PEG-1400，1500，2000，4000的无Ca2+及Mg2+的Dulbecco PBS中融合不同时间(30，45，60，75，90 s)，以兔抗BERH-2血清及兔抗鼠B细胞血清先后对融合后的细胞进行染色，流式细胞仪(FACScan, BD公司)检测双阳性细胞为融合细胞(BERH-2-B)。
1.2 融合细胞疫苗抗肿瘤特异性观察 2组大鼠(8只/组)均皮下注射2×106个BERH-2-B细胞，2周后一组动物肝内注射5×106个BERH-2细胞，另一组则注入同样数量NBT-Ⅱ细胞，观察融合细胞疫苗杂交瘤免疫后抗肝癌BERH-2的特异性。
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1.3 CD4+，CD8+ T细胞对融合细胞疫苗抗肿瘤作用影响 以纯化的小鼠抗大鼠CD4单抗(OX-38)、抗大鼠CD8单抗(OX-6)或对照抗体处理Wistar大鼠。每只动物每周静脉注射两次,注射3周共500 μg。注射肿瘤细胞前的2 d，取每只动物血液进行CD4，CD8荧光染色以确定CD4+，CD8+ T细胞是否已被去除。最后一次注射抗体后第3天，所有动物肝内注射5×106个BERH-2-B细胞。另一实验中，以2×106个BERH-2-B肿瘤细胞先皮下注射Wistar大鼠，2周后分别以抗CD4、抗CD8及对照单抗处理动物，免疫荧光法染色确定已去除相应T细胞。最后一次注射抗体后第3天，所有动物肝内注射5×106个BERH-2细胞。以上实验均重复3次。
2 结 果
2.1 融合细胞疫苗体内抗肿瘤作用与T细胞亚群的关系 两组大鼠分别以抗CD4或CD8单抗处理以去除CD4+或CD8+细胞，再注射BERH-2-B，结果BERH-2可在其体内形成肿瘤，分别为4/6和5/6；而不经抗体处理或对照抗体处理组均未形成肿瘤。另一实验中，两组大鼠先以BERH-2-B免疫，14 d后分别去除CD4+或CD8+细胞，然后注射BERH-2细胞，结果在去除了CD8+细胞的一组中生长了肿瘤(5/5)，而在另一组去除了CD4+细胞的动物体内未生长肿瘤；对照抗体处理组均未生长肿瘤。该结果表明，CD4+和CD8+ T细胞均为诱导这种免疫反应所必需，而免疫效应阶段，CD8+ T细胞在不需要CD4+ T细胞协助的情况下，就可杀灭肿瘤细胞。
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2.2 融合细胞疫苗抗肿瘤作用的特异性 为研究BERH-2-B细胞所引起抗肿瘤免疫反应是否为肿瘤特异性，我们试验了该细胞诱导的免疫反应对另一个在Wistar 大鼠体内迅速生长的膀胱癌细胞系NBT-Ⅱ排斥作用。结果8只BERH-2-B免疫的大鼠，再接种NBT-Ⅱ后均生长膀胱癌NBT-Ⅱ肿瘤，而8只BERH-2-B免疫的大鼠再接种BERH-2后均未生长肿瘤。结果提示以BERH-2-B细胞免疫只能诱发特异性抗BERH-2肿瘤免疫反应，而不能抑制NBT-Ⅱ的体内生长。
2.3 不经筛选的融合细胞抗肿瘤观察 在细胞融合(融合率为30%)后，我们将融合处理后的细胞未经洗涤就直接注入同种大鼠皮下，对照组为将BERH-2细胞与激活的B细胞简单混合后直接注入动物体内。然后，所有的动物均于肝内注射亲代BERH-2细胞。结果表明，只有以未经筛选的融合方法处理的肿瘤细胞免疫过的动物未生长肿瘤，而注射简单混合的细胞则不能诱导保护性免疫。
3 讨 论
, 百拇医药
机体抗肿瘤细胞免疫主要取决于两个信号系统的完整性。肿瘤细胞一般具有肿瘤特异性抗原，当这种抗原在肿瘤细胞内加工并和细胞MHC分子结合以MHC-肽复合物的形式表达在细胞表面后，T细胞受体(TCR)和CD8/CD4能与该MHC-肽复合物结合形成第一信号系统。有时第一信号系统并不能有效刺激产生抗肿瘤细胞免疫，还需辅以共刺激信号(又称第二信号)，共刺激信号主要由细胞表面粘附蛋白受体配体系统和细胞因子组成，其中肿瘤细胞表面分子B7，ICAM和T细胞表面分子CD28，LFA-1是两对最主要的第二信号系统[5]。当机体上述抗肿瘤细胞免疫反应信号系统不完善，如MHC分子、B7，ICAM，CD28和LFA-1等中的一种或几种减少甚至缺如时，机体不能实现有效的免疫监控，肿瘤得以发生发展[6,7]。增强机体的抗肿瘤细胞免疫功能是当前肿瘤治疗的研究策略之一。通常以基因修饰法制备的肿瘤疫苗接种机体以增强机体抗肿瘤免疫，该方法不仅费时，且需攻克许多技术上的难题，如尚需提高基因转染效率和基因转移的靶向性；另外，肿瘤细胞常为多基因缺陷，而基因修饰的疫苗常为单基因修饰肿瘤细胞，因而基因修饰的疫苗常不能成为有效的多基因缺陷肿瘤疫苗。Guo[8]等曾以BERH-2细胞和激活B淋巴细胞进行融合，发现与融合前亲本细胞相比，融合细胞的MHCⅠ表达增加，MHCⅡ，ICAM-1、淋巴细胞功能抗原(LFA-1)和B7获得表达，表明这种融合细胞不仅可能从亲本肿瘤细胞获得特异性肿瘤抗原，而且能从亲本B细胞获得充足的各种共刺激分子和MHC抗原，因而以细胞融合法制备肿瘤疫苗有良好的前景。本实验研究PEG融合法制备的细胞融合肿瘤疫苗的抗肿瘤效应，该肿瘤疫苗诱导机体产生了对BERH-2细胞的保护性抗肿瘤免疫，而不能诱导机体产生对大鼠NBT-Ⅱ膀胱癌细胞的抗肿瘤免疫，大鼠生长了NBT-Ⅱ瘤，证实了细胞融合肿瘤疫苗只能诱导机体的特异性抗亲本肿瘤免疫反应。分别经抗CD4或CD8单抗清除了CD4+或CD8+ T 细胞的大鼠，接种的融合细胞疫苗在大鼠体内发展成肿瘤，说明细胞融合肿瘤疫苗诱导的抗肿瘤免疫与 CD4+和CD8+ 两种T 细胞均有关，表明细胞融合肿瘤疫苗主要诱导机体的特异性细胞免疫。事先经细胞融合肿瘤疫苗免疫的大鼠，去除CD4+或CD8+ T细胞后再接种BERH-2细胞，去除了CD8+的大鼠生长肿瘤，而去除了CD4+的大鼠不生长肿瘤，表明CD4+和CD8+ 两种T细胞均为细胞融合肿瘤疫苗诱导的免疫反应所必需，而在免疫效应阶段， CD8+ 细胞作为效应细胞更显重要。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 Cayeux S, Richeer G, Noffz G, et al. Influence of gene-modified(IL-7,IL-4, and B7) tumor cell vaccines on tumor antigen presentation. J Immunol, 1997,158(6):2834
2 Schoenberger SP, Jonges LE, Mooijaart RJ, et al. Efficient direct priming of tumor-specific cytotoxic T lymphocyte in vivo by an engineered APC. Cancer Res, 1998,58(14):3094
3 Elliott BE, Carlow DA, Rodricks AM, et al. Perspectives on the role of MHC antigens in normal and malignant cell development. Cancer Res, 1989,53(1):181
, 百拇医药
4 Restifo NP, Esquivel F, Kawakami Y, et al. Identification of human cancers deficient in antigen processing. J Exp Med, 1993,177(2):265
5 Behar SM, Porcelli SA, Beckman EM, et al. A pathway of costimulation that prevents anergy in CD28-T cells: B7-independent costimulation of CD1-restricted T cells. J Exp Med, 1995,182(6):2007
6 Chen L, Ashe S, Brady WA, et al. Costimulation of antitumor immunity by the B7 counterreceptor for the T lymphocyte molecules CD28 and CTLA-4. Cell, 1992,71(7):1093
, http://www.100md.com
7 Trojan J, Johnson TR, Rudin SD, et al. Treatment and prevention of rat glioblastoma by immunogenic C6 cells expressing antisense insulin-like growth factor I RNA. Science, 1993,259(5091):94
8 Guo YJ, Wu MC, Chen H, et al. Effective tumor vaccine generated by fusion of hepatoma cells with activated B cells. Science, 1994,263(5146):518
(1998-10-05收稿， 1998-11-30修回)
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单位：
关键词：肝肿瘤；融合；肿瘤疫苗
摘要 目的摘要 目的：观察大鼠BERH-2肝癌细胞与自体激活B细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与T细胞亚群的关系。方法：(1) 应用聚乙二醇(PEG)融合大鼠BERH-2肝癌细胞与激活B细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；(2) 事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌BERH-2细胞和大鼠膀胱癌NBT-Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；(3) 该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠CD4单抗或抗CD8单抗多次注射，以清除大鼠CD4+或CD8+ T细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：BERH-2细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而NBT-Ⅱ细胞可致瘤；事先清除CD4+或CD8+ T 细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌BERH-2细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了CD4+细胞后不能被BERH-2细胞致瘤，清除了CD8+细胞后则可被BERH-2细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用，这种作用与CD4+和CD8+ T细胞有关。
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中国图书资料分类法分类号 R735.7
Preliminary observation of anti-tumor specificity and T cell role by cellular fusion rat hepatocarcinoma vaccine in vivo
Wei Lixin, Qian Weizhu, Yan Zhenlin, Shen Feng, Xie Tianpei, Wang Hao, Liu Yanjun, Shi Junxia, Wu Mengchao, Guo Yajun (Tumor Immunology and Gene Therapy Center, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai, 200438)
, 百拇医药 Abstract Objective: To observe the special antitumor effect of the cell fusion rat hepatic tumor vaccine made by cell fusion between rat BERH-2 hepatic tumor cell line and autologous B lymphocyte and to observe the relationship between the special antitumor effect of this tumor vaccine and the subtypes of T cells. Methods: The fusion cell rat hepatic tumor vaccine was made by cell fusion between rat BERH-2 hepatic tumor cell line and activated B lymphocyte and PEG was used as the fusion agent. Two groups of rats ,immunized by the vaccine first, were then inoculated by BERH-2 cells and rat NBT-Ⅱ bladder tumor cell line respectively, and then the special antitumor effect was evaluated. In order to know the relationship between the special antitumor effect of the tumor vaccine and the subtypes of T cells, the rats, either before or after its immunization with the vaccine, were injected by mouce anti-rat CD4 monoclonal antibody or by mouse anti-rat CD8 monoclonal antibody several times to eliminate CD4+ or CD8+ T lymphocyte correspondingly, and then, tumorigenicity was observed. Results: Rats, first immunized with the vaccine, developed no tumor after BERH-2 cells inoculation, while developed tumor after inoculated with NBT-Ⅱ cells. Both groups of the rats, whatever eliminated CD4+ or CD8+ T lymphocyte, developed tumor after immunization by the tumor vaccine. Rats, first immunized by the tumor vaccine, were divided into two groups, one group, which was eliminated CD4+ T lymphocyte and then were injected with BERH-2 cells, didnt develop tumor; the other group, which was eliminated CD8+ T lymphocyte and then also injected with BERH-2 cells, did develop tumor. Conclusion: The fusion cell rat hepatic tumor vaccine has special antitumor effect, which is closely related to CD4+ and CD8+ T lymphocyte.
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Key words liver neoplasms; fusion； vaccine
恶性肿瘤疫苗制备是抗肿瘤免疫治疗研究的重要策略之一[1]。目前肿瘤疫苗主要经过对肿瘤细胞修饰或改造获得，故主要适用肿瘤患者手术后对残余灶杀灭或根治术后的预防复发。肿瘤细胞通常不表达激发宿主免疫反应所必需的信号，这是其逃避机体免疫监控的重要机制。在分子水平，具体表现为：主要组织相容性复合物(MHC)表达水平较低；抗原提呈途径的改变，使肿瘤特异性抗原不能向宿主T细胞提呈；缺乏激活宿主免疫系统所必需的共刺激分子或粘附分子；产生影响宿主免疫系统的各种因子。激活的B细胞是最有效的抗原提呈细胞。我们前期的工作也表明，将肿瘤细胞与激活的B细胞融合后产生的融合细胞，既表达肿瘤特异性抗原，又可将该抗原有效地提呈给T细胞，同时还补充了肿瘤细胞所缺乏的共刺激分子，使T细胞激活，从而杀灭肿瘤[2～4]。本实验拟进一步观察细胞融合大鼠肝癌疫苗抗肿瘤的特异性，并初步探讨其抗肿瘤作用的机制。
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1 材料和方法
1.1 肝癌细胞和激活B细胞的融合 BERH-2大鼠肝癌细胞系：从Wistar 大鼠中化学诱发的肝细胞癌，生长迅速，可在同种系动物肝脏内长成实体瘤。 B细胞的激活：将牛血清清蛋白与Freund完全佐剂混合后免疫大鼠，14 d后可从其脾脏中分离获得激活的B细胞。将BERH-2细胞及激活B淋巴细胞以1∶10比例在含有50%不同分子量PEG-1400，1500，2000，4000的无Ca2+及Mg2+的Dulbecco PBS中融合不同时间(30，45，60，75，90 s)，以兔抗BERH-2血清及兔抗鼠B细胞血清先后对融合后的细胞进行染色，流式细胞仪(FACScan, BD公司)检测双阳性细胞为融合细胞(BERH-2-B)。
1.2 融合细胞疫苗抗肿瘤特异性观察 2组大鼠(8只/组)均皮下注射2×106个BERH-2-B细胞，2周后一组动物肝内注射5×106个BERH-2细胞，另一组则注入同样数量NBT-Ⅱ细胞，观察融合细胞疫苗杂交瘤免疫后抗肝癌BERH-2的特异性。
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1.3 CD4+，CD8+ T细胞对融合细胞疫苗抗肿瘤作用影响 以纯化的小鼠抗大鼠CD4单抗(OX-38)、抗大鼠CD8单抗(OX-6)或对照抗体处理Wistar大鼠。每只动物每周静脉注射两次,注射3周共500 μg。注射肿瘤细胞前的2 d，取每只动物血液进行CD4，CD8荧光染色以确定CD4+，CD8+ T细胞是否已被去除。最后一次注射抗体后第3天，所有动物肝内注射5×106个BERH-2-B细胞。另一实验中，以2×106个BERH-2-B肿瘤细胞先皮下注射Wistar大鼠，2周后分别以抗CD4、抗CD8及对照单抗处理动物，免疫荧光法染色确定已去除相应T细胞。最后一次注射抗体后第3天，所有动物肝内注射5×106个BERH-2细胞。以上实验均重复3次。
2 结 果
2.1 融合细胞疫苗体内抗肿瘤作用与T细胞亚群的关系 两组大鼠分别以抗CD4或CD8单抗处理以去除CD4+或CD8+细胞，再注射BERH-2-B，结果BERH-2可在其体内形成肿瘤，分别为4/6和5/6；而不经抗体处理或对照抗体处理组均未形成肿瘤。另一实验中，两组大鼠先以BERH-2-B免疫，14 d后分别去除CD4+或CD8+细胞，然后注射BERH-2细胞，结果在去除了CD8+细胞的一组中生长了肿瘤(5/5)，而在另一组去除了CD4+细胞的动物体内未生长肿瘤；对照抗体处理组均未生长肿瘤。该结果表明，CD4+和CD8+ T细胞均为诱导这种免疫反应所必需，而免疫效应阶段，CD8+ T细胞在不需要CD4+ T细胞协助的情况下，就可杀灭肿瘤细胞。
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2.2 融合细胞疫苗抗肿瘤作用的特异性 为研究BERH-2-B细胞所引起抗肿瘤免疫反应是否为肿瘤特异性，我们试验了该细胞诱导的免疫反应对另一个在Wistar 大鼠体内迅速生长的膀胱癌细胞系NBT-Ⅱ排斥作用。结果8只BERH-2-B免疫的大鼠，再接种NBT-Ⅱ后均生长膀胱癌NBT-Ⅱ肿瘤，而8只BERH-2-B免疫的大鼠再接种BERH-2后均未生长肿瘤。结果提示以BERH-2-B细胞免疫只能诱发特异性抗BERH-2肿瘤免疫反应，而不能抑制NBT-Ⅱ的体内生长。
2.3 不经筛选的融合细胞抗肿瘤观察 在细胞融合(融合率为30%)后，我们将融合处理后的细胞未经洗涤就直接注入同种大鼠皮下，对照组为将BERH-2细胞与激活的B细胞简单混合后直接注入动物体内。然后，所有的动物均于肝内注射亲代BERH-2细胞。结果表明，只有以未经筛选的融合方法处理的肿瘤细胞免疫过的动物未生长肿瘤，而注射简单混合的细胞则不能诱导保护性免疫。
3 讨 论
, 百拇医药
机体抗肿瘤细胞免疫主要取决于两个信号系统的完整性。肿瘤细胞一般具有肿瘤特异性抗原，当这种抗原在肿瘤细胞内加工并和细胞MHC分子结合以MHC-肽复合物的形式表达在细胞表面后，T细胞受体(TCR)和CD8/CD4能与该MHC-肽复合物结合形成第一信号系统。有时第一信号系统并不能有效刺激产生抗肿瘤细胞免疫，还需辅以共刺激信号(又称第二信号)，共刺激信号主要由细胞表面粘附蛋白受体配体系统和细胞因子组成，其中肿瘤细胞表面分子B7，ICAM和T细胞表面分子CD28，LFA-1是两对最主要的第二信号系统[5]。当机体上述抗肿瘤细胞免疫反应信号系统不完善，如MHC分子、B7，ICAM，CD28和LFA-1等中的一种或几种减少甚至缺如时，机体不能实现有效的免疫监控，肿瘤得以发生发展[6,7]。增强机体的抗肿瘤细胞免疫功能是当前肿瘤治疗的研究策略之一。通常以基因修饰法制备的肿瘤疫苗接种机体以增强机体抗肿瘤免疫，该方法不仅费时，且需攻克许多技术上的难题，如尚需提高基因转染效率和基因转移的靶向性；另外，肿瘤细胞常为多基因缺陷，而基因修饰的疫苗常为单基因修饰肿瘤细胞，因而基因修饰的疫苗常不能成为有效的多基因缺陷肿瘤疫苗。Guo[8]等曾以BERH-2细胞和激活B淋巴细胞进行融合，发现与融合前亲本细胞相比，融合细胞的MHCⅠ表达增加，MHCⅡ，ICAM-1、淋巴细胞功能抗原(LFA-1)和B7获得表达，表明这种融合细胞不仅可能从亲本肿瘤细胞获得特异性肿瘤抗原，而且能从亲本B细胞获得充足的各种共刺激分子和MHC抗原，因而以细胞融合法制备肿瘤疫苗有良好的前景。本实验研究PEG融合法制备的细胞融合肿瘤疫苗的抗肿瘤效应，该肿瘤疫苗诱导机体产生了对BERH-2细胞的保护性抗肿瘤免疫，而不能诱导机体产生对大鼠NBT-Ⅱ膀胱癌细胞的抗肿瘤免疫，大鼠生长了NBT-Ⅱ瘤，证实了细胞融合肿瘤疫苗只能诱导机体的特异性抗亲本肿瘤免疫反应。分别经抗CD4或CD8单抗清除了CD4+或CD8+ T 细胞的大鼠，接种的融合细胞疫苗在大鼠体内发展成肿瘤，说明细胞融合肿瘤疫苗诱导的抗肿瘤免疫与 CD4+和CD8+ 两种T 细胞均有关，表明细胞融合肿瘤疫苗主要诱导机体的特异性细胞免疫。事先经细胞融合肿瘤疫苗免疫的大鼠，去除CD4+或CD8+ T细胞后再接种BERH-2细胞，去除了CD8+的大鼠生长肿瘤，而去除了CD4+的大鼠不生长肿瘤，表明CD4+和CD8+ 两种T细胞均为细胞融合肿瘤疫苗诱导的免疫反应所必需，而在免疫效应阶段， CD8+ 细胞作为效应细胞更显重要。
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参 考 文 献
1 Cayeux S, Richeer G, Noffz G, et al. Influence of gene-modified(IL-7,IL-4, and B7) tumor cell vaccines on tumor antigen presentation. J Immunol, 1997,158(6):2834
2 Schoenberger SP, Jonges LE, Mooijaart RJ, et al. Efficient direct priming of tumor-specific cytotoxic T lymphocyte in vivo by an engineered APC. Cancer Res, 1998,58(14):3094
3 Elliott BE, Carlow DA, Rodricks AM, et al. Perspectives on the role of MHC antigens in normal and malignant cell development. Cancer Res, 1989,53(1):181
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4 Restifo NP, Esquivel F, Kawakami Y, et al. Identification of human cancers deficient in antigen processing. J Exp Med, 1993,177(2):265
5 Behar SM, Porcelli SA, Beckman EM, et al. A pathway of costimulation that prevents anergy in CD28-T cells: B7-independent costimulation of CD1-restricted T cells. J Exp Med, 1995,182(6):2007
6 Chen L, Ashe S, Brady WA, et al. Costimulation of antitumor immunity by the B7 counterreceptor for the T lymphocyte molecules CD28 and CTLA-4. Cell, 1992,71(7):1093
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7 Trojan J, Johnson TR, Rudin SD, et al. Treatment and prevention of rat glioblastoma by immunogenic C6 cells expressing antisense insulin-like growth factor I RNA. Science, 1993,259(5091):94
8 Guo YJ, Wu MC, Chen H, et al. Effective tumor vaccine generated by fusion of hepatoma cells with activated B cells. Science, 1994,263(5146):518
(1998-10-05收稿， 1998-11-30修回)
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