大剂量氨甲喋呤-四氢叶酸方案对成骨肉瘤细胞系OS-732的影响
作者：杨岩 王娟 易永林 王瑛 徐莘香 王秀清 张淑芹
单位：130021 长春，白求恩医科大学第一临床学院(杨岩、易永林)，吉林省人民医院(王娟、王瑛)应用基础研究所(王秀清、张淑芹)
关键词：
中华医学杂志980614 我们在体外用成骨肉瘤细胞系OS-732模拟体内大剂量氨甲喋呤-四氢叶酸(HD-MTX-LV)方案，以探讨氨甲喋呤(MTX)浓度、作用时间，四氢叶酸(LV)解救浓度及时间四者的关系。
一、材料与方法
1.OS-732细胞培养及其特征，参见文献[1]。
2.实验方法：把OS-732细胞1.0×105/ml传于24孔板，每孔1 ml，24小时后加入不同浓度MTX，MTX均作用24小时，加入MTX后按不同的设计时间，加入不同浓度的LV，共培养144小时。阴性对照不加MTX及LV，阳性对照不加LV。
, 百拇医药
3.测定方法：用1∶20 000的中性红溶液，1∶0.1 mmol磷酸二氢钠，95%乙醇脱色，在酶联免疫检测仪上，用540 nm波长滤光片测定A值。细胞存活率(CSR)=(样本平均A值)/(阴性对照平均A值)
4.统计学处理：采用t检验。
二、结果
1.延迟6小时解救组：MTX取10-6mol、10-5mol及10-4mol 3个浓度，LV取10-6mol、10-5m及10-4mol 3个浓度，在加入MTX后6小时加入，作用114小时，结果见图1。图1中阳性对照MTX为10-6mol、10-5mol及10-4mol时三者间 CSR比较，均P<0.05。说明无LV解救，MTX作用时间相等，MTX浓度越高，CSR越低。上面2条曲线在LV为10-5mol和10-4mol解救时，CSR均大于85.5%，说明MTX浓度偏低，LV解救过早，在等浓度以上，几乎可以完全逆转MTX毒性，在未达到等浓度解救前，3条曲线的CSR随着LV浓度增加而增加。表明在LV延迟6小时这一条件下，LV解救浓度起重要作用。
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图注为MTX浓度，图2，3同
图1 延迟6小时解救时不同浓度MTX的CSR与不同浓度LV的关系
图2 延迟36小时解救时不同浓度MTX的CSR与不同浓度LV的关系
图3 LV浓度相同时不同浓度MTX的CSR与LV延迟时间的关系
2.延迟36小时解救组：MTX、LV取浓度同结果1，LV在加入MTX后36小时加入，作用84小时，结果见图2。图2中3条曲线趋于平坦，每一条曲线在LV为10-6mol、10-5mol及10-4mol时的CSR，均P>0.05，说明在LV延迟36小时解救时，不论MTX浓度高低，CSR并不随着LV浓度增加而明显增大。在LV解救浓度相同时，纵向比较3条曲线，CSR均P<0.05，说明在LV解救浓度时间相等时，MTX浓度越大，CSR越低。
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3.延迟不同时间解救组：MTX取10-5mol和10-4mol，LV取10-5mol，LV解救时间分别取延迟12、24、36及48小时，结果见图3。图3中，MTX为10-5mol和10-4mol时，CSR随着LV延迟解救时间的增加而减小，同一浓度MTX的CSR，在LV延迟12、24、36及48小时，均P<0.05，说明在MTX、LV浓度固定时，LV延迟解救时间越晚，CSR越小。MTX 10-5mol、LV延迟36小时解救时，CSR为38.3%；MTX10-4mol、LV延迟12小时解救时，CSR 57.1%，两者比较，P<0.01；MTX 10-5mol、LV延迟48小时解救，CSR与MTX 10-4mol、LV延迟12、24及36小时比较，均P<0.05。表明，虽然MTX浓度相差10倍，但高浓度早解救的CSR却不如低浓度晚解救的CSR小。
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三、讨论
本实验中，MTX作用时间固定，LV解救浓度固定时，或无LV解救时，MTX浓度越大，CSR越小，对OS-732细胞毒性越大，这与临床上MTX应用剂量越来越大相一致。在LV解救早组，要提高疗效，就要尽量减少LV的用量；在解救晚组，LV解救剂量可适当增加，达到等浓度解救。在MTX达到有效浓度以上时，LV延迟解救时间是更为重要因素，MTX低浓度晚解救要比高浓度早解救疗效好。我们认为有效地应用HD-MTX-LV方案的原则为：(1) MTX剂量要足够大，能够达到MTX致死性浓度。(2) MTX作用时间尽量延长，LV尽量晚解救，MTX作用24小时，LV延迟到36小时解救，要比MTX作用24小时、LV延迟到6小时解救疗效好。(3) 在LV解救早的条件下，解救剂量要尽量小，在解救晚的条件下，解救剂量可适当增加。(4) 需要保证不出现皮肤粘膜及骨髓等严重的毒性作用为前提。
参考文献
1 张佩玉，宋献文，尚克刚，等.人成骨肉瘤细胞系—OS-732的建立及其特征的观察.创伤骨科学报，1983，2：59-61.
(收稿：1997-06-18 修回：1998-02-20), 百拇医药
单位：130021 长春，白求恩医科大学第一临床学院(杨岩、易永林)，吉林省人民医院(王娟、王瑛)应用基础研究所(王秀清、张淑芹)
关键词：
中华医学杂志980614 我们在体外用成骨肉瘤细胞系OS-732模拟体内大剂量氨甲喋呤-四氢叶酸(HD-MTX-LV)方案，以探讨氨甲喋呤(MTX)浓度、作用时间，四氢叶酸(LV)解救浓度及时间四者的关系。
一、材料与方法
1.OS-732细胞培养及其特征，参见文献[1]。
2.实验方法：把OS-732细胞1.0×105/ml传于24孔板，每孔1 ml，24小时后加入不同浓度MTX，MTX均作用24小时，加入MTX后按不同的设计时间，加入不同浓度的LV，共培养144小时。阴性对照不加MTX及LV，阳性对照不加LV。
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3.测定方法：用1∶20 000的中性红溶液，1∶0.1 mmol磷酸二氢钠，95%乙醇脱色，在酶联免疫检测仪上，用540 nm波长滤光片测定A值。细胞存活率(CSR)=(样本平均A值)/(阴性对照平均A值)
4.统计学处理：采用t检验。
二、结果
1.延迟6小时解救组：MTX取10-6mol、10-5mol及10-4mol 3个浓度，LV取10-6mol、10-5m及10-4mol 3个浓度，在加入MTX后6小时加入，作用114小时，结果见图1。图1中阳性对照MTX为10-6mol、10-5mol及10-4mol时三者间 CSR比较，均P<0.05。说明无LV解救，MTX作用时间相等，MTX浓度越高，CSR越低。上面2条曲线在LV为10-5mol和10-4mol解救时，CSR均大于85.5%，说明MTX浓度偏低，LV解救过早，在等浓度以上，几乎可以完全逆转MTX毒性，在未达到等浓度解救前，3条曲线的CSR随着LV浓度增加而增加。表明在LV延迟6小时这一条件下，LV解救浓度起重要作用。
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图注为MTX浓度，图2，3同
图1 延迟6小时解救时不同浓度MTX的CSR与不同浓度LV的关系
图2 延迟36小时解救时不同浓度MTX的CSR与不同浓度LV的关系
图3 LV浓度相同时不同浓度MTX的CSR与LV延迟时间的关系
2.延迟36小时解救组：MTX、LV取浓度同结果1，LV在加入MTX后36小时加入，作用84小时，结果见图2。图2中3条曲线趋于平坦，每一条曲线在LV为10-6mol、10-5mol及10-4mol时的CSR，均P>0.05，说明在LV延迟36小时解救时，不论MTX浓度高低，CSR并不随着LV浓度增加而明显增大。在LV解救浓度相同时，纵向比较3条曲线，CSR均P<0.05，说明在LV解救浓度时间相等时，MTX浓度越大，CSR越低。
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3.延迟不同时间解救组：MTX取10-5mol和10-4mol，LV取10-5mol，LV解救时间分别取延迟12、24、36及48小时，结果见图3。图3中，MTX为10-5mol和10-4mol时，CSR随着LV延迟解救时间的增加而减小，同一浓度MTX的CSR，在LV延迟12、24、36及48小时，均P<0.05，说明在MTX、LV浓度固定时，LV延迟解救时间越晚，CSR越小。MTX 10-5mol、LV延迟36小时解救时，CSR为38.3%；MTX10-4mol、LV延迟12小时解救时，CSR 57.1%，两者比较，P<0.01；MTX 10-5mol、LV延迟48小时解救，CSR与MTX 10-4mol、LV延迟12、24及36小时比较，均P<0.05。表明，虽然MTX浓度相差10倍，但高浓度早解救的CSR却不如低浓度晚解救的CSR小。
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三、讨论
本实验中，MTX作用时间固定，LV解救浓度固定时，或无LV解救时，MTX浓度越大，CSR越小，对OS-732细胞毒性越大，这与临床上MTX应用剂量越来越大相一致。在LV解救早组，要提高疗效，就要尽量减少LV的用量；在解救晚组，LV解救剂量可适当增加，达到等浓度解救。在MTX达到有效浓度以上时，LV延迟解救时间是更为重要因素，MTX低浓度晚解救要比高浓度早解救疗效好。我们认为有效地应用HD-MTX-LV方案的原则为：(1) MTX剂量要足够大，能够达到MTX致死性浓度。(2) MTX作用时间尽量延长，LV尽量晚解救，MTX作用24小时，LV延迟到36小时解救，要比MTX作用24小时、LV延迟到6小时解救疗效好。(3) 在LV解救早的条件下，解救剂量要尽量小，在解救晚的条件下，解救剂量可适当增加。(4) 需要保证不出现皮肤粘膜及骨髓等严重的毒性作用为前提。
参考文献
1 张佩玉，宋献文，尚克刚，等.人成骨肉瘤细胞系—OS-732的建立及其特征的观察.创伤骨科学报，1983，2：59-61.
(收稿：1997-06-18 修回：1998-02-20), 百拇医药