利胆溶石胶囊防止胆石形成的实验研究*
作者：石景森 任 斌 马庆久 程 力 罗 健 孟清翠 田和平 韩梅荣
单位：西安医科大学第一附属医院肝胆外科研究室 陕西省西安市 710061
关键词：胆结石/预防和控制；中草药/治疗应用；胆结石/病理学
华人消化杂志/980705Subject headings cholelithiasis/prevention & control; drugs, Chinese herbal/therapeutic use; cholelithiasis/pathology
Abstract
AIM To study the mechanism of Artemisiae capillaris and Radix curcumae (ACRC) preventing gallstone formation.
, 百拇医药
METHODS Using gallstone animal model by feeding on high cholesterol diet, the effect of ACRC in preventing gallstone formation was observed, and liver and gallbladder morphology as well as conjugated bile acids of the bile were also studied. The mechanism of gallstone formation prevention was preliminarily discussed.
RESULTS The gallstone formation rate was 100% when an animals were fed on high cholesterol diet (HCD), but in antilithic group, the rate decreased to 5.3% when fed on HCD with ACRC. The rates of fatty degeneration, cytoplasmic rarefaction and balooning degeneration in lithogenous group were 77.8%, 44.6% and 33.3%, but in antilithic group they were only 15.4%，23.9% and 7.7%. In contrast to control group, content of conjugated bile acids in lithogenous group decreased obviously, but in anthogenous group, it increased quickly. Lithogenous diet caused liver damage, then abnormality of metabolism of bile acids, and promoted gallstone formation.
, 百拇医药
CONCLUSION Diet change is an important factor in the process of gallstone formation and ACRC can prevent gallstone formation effectively.
中国图书资料分类号 R575.62
摘 要
目的 探讨中药利胆溶石胶囊防止胆结石形成的机制.
方法 通过改变饮食成分诱发豚鼠胆结石，观察利胆溶石胶囊防止胆石形成的效果，结合各组动物的肝脏、胆囊形态学及胆汁中结合胆汁酸的变化，初步探讨利胆溶石胶囊防止胆石形成的机制.
结果 喂养高胆固醇饮食的致石组动物胆结石的发生率为100%，而加用利胆溶石胶囊的防石组，成石率降至5.3%. 致石组动物肝脏脂肪变性、胞质疏松、气球样变的发生率分别为77.8%，44.6%，33.3%，而防石组仅为15.4%，23.9%，7.7%. 致石组动物胆汁中结合胆汁酸含量较对照组明显减少，防石组则显著增加. 致石食物首先引起肝脏病理损害，继而导致胆汁代谢紊乱，尤其是胆汁酸代谢紊乱，促使了胆结石的形成.
, 百拇医药
结论 饮食习惯的改变是胆石形成的一个重要因素，利胆溶石胶囊可有效地防止结石的形成.
0 引言
通过改变饮食成分诱发豚鼠胆结石，观察中药利胆溶石胶囊防止胆石形成的效果，结合各组动物的肝脏、胆囊形态学及胆汁中结合胆汁酸的变化，探讨利胆溶石胶囊防止胆石形成的机制.
1 材料和方法
1.1 材料 ♀豚鼠58只，体重250g～500g，随机分成3组. 对照组19只，喂饲正常饮食；致石组20只，喂饲高胆固醇饮食；防石组19只，喂饲胆固醇饮食加利胆溶石胶囊13.5g/(dkg). 定时定量喂养，全日供水，自由活动，8wk后剖杀. 食物组成及中药配方：①正常饮食：玉米粉10%，面粉10%，黄豆粉10%，苜蓄粉25%，麦夫皮35%，鱼粉7%，食盐1%，酵母1%，骨粉1%；②高胆固醇饮食：正常饮食+0.5%的胆固醇；③中药配方：茵陈，郁金，枳壳，金钱草. 取材：空腹12h，麻醉下活体切取肝脏、胆囊，收取胆囊胆汁，收集胆石.
, 百拇医药
1.2 方法 ①胆石观察与定性：肉眼及实体镜下一般观察. 扫描电镜观测胆石的细微解构(日立S-450型)，付立叶变换红外光谱测定胆石的成分(Nicolet公司7199型). ②肝脏、胆囊的形态学观察：光镜(岛津CH型)及电镜观察(日立H-600型). ③胆汁及胆汁酸的测定：薄层色谱扫描法(岛津CS-930型).
2 结果
2.1 胆石观察 成石情况见表1. 动物胆石多为黄褐色、棕黄色，多发，不规则型，主要发生于胆囊内，少数也同时存在于胆管内(图1). 扫描电镜观察，可见无机盐不规则结构，蛋白网架结构，胆色素颗粒及胆固醇结晶(图2). 付立叶变换红外光谱扫描证实，豚鼠胆石为含较多磷酸盐、蛋白、胆色素及少量胆固醇的混合性结石.
表1 各组动物胆石发生率
组别
, http://www.100md.com
n
剖杀
成石
成石率%
对照组
19
19
1
5.3
致石组
20
18*
18
100.0
, 百拇医药
防石组
19
19
1
5.3
*3wk内死亡2只，均已成石.
2.2 肝胆形态学 致石组动物肝脏肿大，多数可见散在淡黄色或灰白色细小颗粒. 光镜观察肝细胞肿大，脂肪变性明显，并有不同程度的胞质疏松及气球样变. 电镜下可见肝细胞线粒体肿大，嵴减少，模糊不清，部分膜破裂；内质网明显肿胀，扩张呈囊状. 胞质内糖原颗粒减少，出现大小不等的脂肪滴沉积(图3). 防石组动物肝脏病变明显轻微(表2). 各组动物胆囊变化不明显，仅在电镜下可见致石组部分动物胆囊粘膜上皮微绒毛稀疏、脱失，细胞间隙增宽或界限不清.
表2 各组动物肝脏主要病理变化
, 百拇医药
组别
n
脂肪变性
n
%
胞质疏松
n
%
气球样变
n
%
对照组
17
0
, 百拇医药
0.0
1
5.9
0
0.0
致石组
18
14
77.8
3
44.6
6
33.3
, http://www.100md.com 防石组
13
2
15.4
3
23.9
1
7.7
2.3 胆汁酸测定 致石组动物胆汁中结合胆汁酸含量明显减少，防石组显著增加(P<0.01，表3).
, 百拇医药
bP<0.01， vs 对照组；dP<0.01， vs 致石组.
图1 胆囊、胆囊管及胆总管内均有胆石形成 实体镜×20
图2 胆色素钙颗粒. 胆固醇结晶及不规则无机盐结构 SEM×800
图3 肝细胞浆内巨大脂滴将细胞核挤压成月牙状 EM×5000
3 讨论
本实验喂养高胆固醇饮食的致石组动物胆结石的发生率为100%，而加用利胆溶石胶囊的防石组，成石率降至5.3%. 说明饮食习惯的改变是胆石形成的一个重要因素，利胆溶石胶囊可有效地防止结石的形成. 近年研究发现，无论何种胆石的形成，均要经过3个阶段：①胆汁中某些非溶解成分过饱和，产生致石胆汁；②形成胆石核心；③微石增大形成结石. 在这三个过程中，致石胆汁的形成是最基本的改变. 肝脏是分泌胆汁的唯一器官，也是致石胆汁产生的场所. 当肝细胞损害，肝功能障碍时，胆汁代谢紊乱，胆汁中具有重要功能的胆汁酸代谢也势必受到影响，以至胆汁中非溶解性物质增加，产生致石胆汁. 我们在实验中观察到喂饲致石食物动物的肝脏，普遍产生了较为严重的脂肪变性，胞质疏松及气球样变等病理改变，电镜观察细胞超微结构也发生了与光镜相一致的病理改变：线粒体肿胀，嵴减少，部分膜破裂；内质网明显肿胀，扩张等重要细胞器病变. 线粒体是活细胞生物氧化产生能量的一个重要机构. 而内质网则与胆汁生成有关. 已经证明，肝细胞内形成的胆汁酸由滑面内质网合成[1]. 进一步测定胆汁酸发现，致石组动物胆汁中结合胆汁酸明显减少. 胆汁酸的减少，可直接的或间接地影响胆固醇的溶解状态，使胆固醇从胆汁中析出结晶，形成结石，胆汁酸也是胆红素最重要的助溶剂，其量的减少，不仅影响胆汁中游离胆红素的溶解性，还可降低胆汁酸与钙离子的结合能力，使胆红素与钙生成胆红素钙沉淀[2]. 因而，我们认为动物胆石的形成过程是：致石食物首先引起肝脏病理损害，继而导致胆汁代谢紊乱，尤其是胆汁酸代谢紊乱，促使了胆结石的形成.
, 百拇医药
中药用于防治胆石病的临床研究已有报道，我们采用自制中药利胆溶石胶囊由四味中药组成，方简，药精，其中郁金，枳壳具有疏肝利胆及破坏胆汁中粘蛋白的粘附作用[3]. 金钱草可促进胆汁排泄[4]，茵陈含有大量的二甲基氧香豆精和对胺基乙酮，可使胆汁中胆汁酸、磷脂增加，胆固醇、无机盐减少，并有促进肝细胞再生，肝糖原和细胞核中核糖核酸合成的作用[5，6]. 在致石食物中加用利胆溶石胶囊，明显降低了胆结石的发病率，说明利胆溶石胶囊具有较好的防石作用，肝脏形态学观察可见防石组动物肝细胞脂肪变性及线粒体肿胀、内质网扩张等病理变化较致石组明显减轻，而胆汁中结合胆汁酸含量较致石组明显增加. 实验结果显示利胆溶石胶囊的防石效果，与其具有保护肝脏，免受致石食物损害，调节胆汁酸代谢，尤其是改变胆汁中有形成分的比例，增加胆汁酸等综合作用有关.
4 参考文献
1 第二军医大学电镜室，复旦大学生物系电镜室. 细胞超微结构与功能. 第2版. 上海：上海科学技术出版社，1981：32-36
, 百拇医药
2 Soloway RD. Pigment gallstone. Gastroenterology, 1977;72(1):167-182
3 贾汇泉，郭延会，李力，任风琴，张哲元，周维 et al. 青茵合剂对肝、胆结石溶石效果的临床研究. 中国中药杂志，1990；15(5)：57-58
4 张柏和，黄贯学，金庆达，杨锡兰. 茵陈胆道汤对胆汁有形成分的影响. 江西医药，1983；(1)：22
5 石景森，孟清翠，王荣，高振亚，刘绍诰. 茵陈对胆石病‘T’管胆汁有形成分的影响. 西安医科大学学报，1987；8(4)：394-396
6 石景森，任斌，孟清翠，田和平，韩梅荣，王作仁 et al. 茵陈郁金防止高胆固醇饮食诱发豚鼠胆结石机理初探. 西安医科大学学报，1994；15(增刊)：1-2
石景森，男，1937-05-24生，河北省易县人，汉族. 1961年西安医学院医疗系毕业，1985年赴美国宾夕法尼亚大学医学院进修肝胆外科，外科学教授，博士导师，主任医师，肝胆外科研究室主任及中华医学会胆道外科学组副组长. 主攻肝胆外科专业，从事胆石成因和胆道肿瘤基础及临床诊治的研究，获国家、省部级科技进步奖13项，发表论文168篇.
*国家自然科学基金资助项目，No.39071000.
通讯作者 石景森，710061，西安医科大学第一附属医院肝胆外科研究室，陕西省西安市南郊健康路1号.收稿日期 1998-03-08, 百拇医药
单位：西安医科大学第一附属医院肝胆外科研究室 陕西省西安市 710061
关键词：胆结石/预防和控制；中草药/治疗应用；胆结石/病理学
华人消化杂志/980705Subject headings cholelithiasis/prevention & control; drugs, Chinese herbal/therapeutic use; cholelithiasis/pathology
Abstract
AIM To study the mechanism of Artemisiae capillaris and Radix curcumae (ACRC) preventing gallstone formation.
, 百拇医药
METHODS Using gallstone animal model by feeding on high cholesterol diet, the effect of ACRC in preventing gallstone formation was observed, and liver and gallbladder morphology as well as conjugated bile acids of the bile were also studied. The mechanism of gallstone formation prevention was preliminarily discussed.
RESULTS The gallstone formation rate was 100% when an animals were fed on high cholesterol diet (HCD), but in antilithic group, the rate decreased to 5.3% when fed on HCD with ACRC. The rates of fatty degeneration, cytoplasmic rarefaction and balooning degeneration in lithogenous group were 77.8%, 44.6% and 33.3%, but in antilithic group they were only 15.4%，23.9% and 7.7%. In contrast to control group, content of conjugated bile acids in lithogenous group decreased obviously, but in anthogenous group, it increased quickly. Lithogenous diet caused liver damage, then abnormality of metabolism of bile acids, and promoted gallstone formation.
, 百拇医药
CONCLUSION Diet change is an important factor in the process of gallstone formation and ACRC can prevent gallstone formation effectively.
中国图书资料分类号 R575.62
摘 要
目的 探讨中药利胆溶石胶囊防止胆结石形成的机制.
方法 通过改变饮食成分诱发豚鼠胆结石，观察利胆溶石胶囊防止胆石形成的效果，结合各组动物的肝脏、胆囊形态学及胆汁中结合胆汁酸的变化，初步探讨利胆溶石胶囊防止胆石形成的机制.
结果 喂养高胆固醇饮食的致石组动物胆结石的发生率为100%，而加用利胆溶石胶囊的防石组，成石率降至5.3%. 致石组动物肝脏脂肪变性、胞质疏松、气球样变的发生率分别为77.8%，44.6%，33.3%，而防石组仅为15.4%，23.9%，7.7%. 致石组动物胆汁中结合胆汁酸含量较对照组明显减少，防石组则显著增加. 致石食物首先引起肝脏病理损害，继而导致胆汁代谢紊乱，尤其是胆汁酸代谢紊乱，促使了胆结石的形成.
, 百拇医药
结论 饮食习惯的改变是胆石形成的一个重要因素，利胆溶石胶囊可有效地防止结石的形成.
0 引言
通过改变饮食成分诱发豚鼠胆结石，观察中药利胆溶石胶囊防止胆石形成的效果，结合各组动物的肝脏、胆囊形态学及胆汁中结合胆汁酸的变化，探讨利胆溶石胶囊防止胆石形成的机制.
1 材料和方法
1.1 材料 ♀豚鼠58只，体重250g～500g，随机分成3组. 对照组19只，喂饲正常饮食；致石组20只，喂饲高胆固醇饮食；防石组19只，喂饲胆固醇饮食加利胆溶石胶囊13.5g/(dkg). 定时定量喂养，全日供水，自由活动，8wk后剖杀. 食物组成及中药配方：①正常饮食：玉米粉10%，面粉10%，黄豆粉10%，苜蓄粉25%，麦夫皮35%，鱼粉7%，食盐1%，酵母1%，骨粉1%；②高胆固醇饮食：正常饮食+0.5%的胆固醇；③中药配方：茵陈，郁金，枳壳，金钱草. 取材：空腹12h，麻醉下活体切取肝脏、胆囊，收取胆囊胆汁，收集胆石.
, 百拇医药
1.2 方法 ①胆石观察与定性：肉眼及实体镜下一般观察. 扫描电镜观测胆石的细微解构(日立S-450型)，付立叶变换红外光谱测定胆石的成分(Nicolet公司7199型). ②肝脏、胆囊的形态学观察：光镜(岛津CH型)及电镜观察(日立H-600型). ③胆汁及胆汁酸的测定：薄层色谱扫描法(岛津CS-930型).
2 结果
2.1 胆石观察 成石情况见表1. 动物胆石多为黄褐色、棕黄色，多发，不规则型，主要发生于胆囊内，少数也同时存在于胆管内(图1). 扫描电镜观察，可见无机盐不规则结构，蛋白网架结构，胆色素颗粒及胆固醇结晶(图2). 付立叶变换红外光谱扫描证实，豚鼠胆石为含较多磷酸盐、蛋白、胆色素及少量胆固醇的混合性结石.
表1 各组动物胆石发生率
组别
, http://www.100md.com
n
剖杀
成石
成石率%
对照组
19
19
1
5.3
致石组
20
18*
18
100.0
, 百拇医药
防石组
19
19
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5.3
*3wk内死亡2只，均已成石.
2.2 肝胆形态学 致石组动物肝脏肿大，多数可见散在淡黄色或灰白色细小颗粒. 光镜观察肝细胞肿大，脂肪变性明显，并有不同程度的胞质疏松及气球样变. 电镜下可见肝细胞线粒体肿大，嵴减少，模糊不清，部分膜破裂；内质网明显肿胀，扩张呈囊状. 胞质内糖原颗粒减少，出现大小不等的脂肪滴沉积(图3). 防石组动物肝脏病变明显轻微(表2). 各组动物胆囊变化不明显，仅在电镜下可见致石组部分动物胆囊粘膜上皮微绒毛稀疏、脱失，细胞间隙增宽或界限不清.
表2 各组动物肝脏主要病理变化
, 百拇医药
组别
n
脂肪变性
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%
胞质疏松
n
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气球样变
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对照组
17
0
, 百拇医药
0.0
1
5.9
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0.0
致石组
18
14
77.8
3
44.6
6
33.3
, http://www.100md.com 防石组
13
2
15.4
3
23.9
1
7.7
2.3 胆汁酸测定 致石组动物胆汁中结合胆汁酸含量明显减少，防石组显著增加(P<0.01，表3).
, 百拇医药
bP<0.01， vs 对照组；dP<0.01， vs 致石组.
图1 胆囊、胆囊管及胆总管内均有胆石形成 实体镜×20
图2 胆色素钙颗粒. 胆固醇结晶及不规则无机盐结构 SEM×800
图3 肝细胞浆内巨大脂滴将细胞核挤压成月牙状 EM×5000
3 讨论
本实验喂养高胆固醇饮食的致石组动物胆结石的发生率为100%，而加用利胆溶石胶囊的防石组，成石率降至5.3%. 说明饮食习惯的改变是胆石形成的一个重要因素，利胆溶石胶囊可有效地防止结石的形成. 近年研究发现，无论何种胆石的形成，均要经过3个阶段：①胆汁中某些非溶解成分过饱和，产生致石胆汁；②形成胆石核心；③微石增大形成结石. 在这三个过程中，致石胆汁的形成是最基本的改变. 肝脏是分泌胆汁的唯一器官，也是致石胆汁产生的场所. 当肝细胞损害，肝功能障碍时，胆汁代谢紊乱，胆汁中具有重要功能的胆汁酸代谢也势必受到影响，以至胆汁中非溶解性物质增加，产生致石胆汁. 我们在实验中观察到喂饲致石食物动物的肝脏，普遍产生了较为严重的脂肪变性，胞质疏松及气球样变等病理改变，电镜观察细胞超微结构也发生了与光镜相一致的病理改变：线粒体肿胀，嵴减少，部分膜破裂；内质网明显肿胀，扩张等重要细胞器病变. 线粒体是活细胞生物氧化产生能量的一个重要机构. 而内质网则与胆汁生成有关. 已经证明，肝细胞内形成的胆汁酸由滑面内质网合成[1]. 进一步测定胆汁酸发现，致石组动物胆汁中结合胆汁酸明显减少. 胆汁酸的减少，可直接的或间接地影响胆固醇的溶解状态，使胆固醇从胆汁中析出结晶，形成结石，胆汁酸也是胆红素最重要的助溶剂，其量的减少，不仅影响胆汁中游离胆红素的溶解性，还可降低胆汁酸与钙离子的结合能力，使胆红素与钙生成胆红素钙沉淀[2]. 因而，我们认为动物胆石的形成过程是：致石食物首先引起肝脏病理损害，继而导致胆汁代谢紊乱，尤其是胆汁酸代谢紊乱，促使了胆结石的形成.
, 百拇医药
中药用于防治胆石病的临床研究已有报道，我们采用自制中药利胆溶石胶囊由四味中药组成，方简，药精，其中郁金，枳壳具有疏肝利胆及破坏胆汁中粘蛋白的粘附作用[3]. 金钱草可促进胆汁排泄[4]，茵陈含有大量的二甲基氧香豆精和对胺基乙酮，可使胆汁中胆汁酸、磷脂增加，胆固醇、无机盐减少，并有促进肝细胞再生，肝糖原和细胞核中核糖核酸合成的作用[5，6]. 在致石食物中加用利胆溶石胶囊，明显降低了胆结石的发病率，说明利胆溶石胶囊具有较好的防石作用，肝脏形态学观察可见防石组动物肝细胞脂肪变性及线粒体肿胀、内质网扩张等病理变化较致石组明显减轻，而胆汁中结合胆汁酸含量较致石组明显增加. 实验结果显示利胆溶石胶囊的防石效果，与其具有保护肝脏，免受致石食物损害，调节胆汁酸代谢，尤其是改变胆汁中有形成分的比例，增加胆汁酸等综合作用有关.
4 参考文献
1 第二军医大学电镜室，复旦大学生物系电镜室. 细胞超微结构与功能. 第2版. 上海：上海科学技术出版社，1981：32-36
, 百拇医药
2 Soloway RD. Pigment gallstone. Gastroenterology, 1977;72(1):167-182
3 贾汇泉，郭延会，李力，任风琴，张哲元，周维 et al. 青茵合剂对肝、胆结石溶石效果的临床研究. 中国中药杂志，1990；15(5)：57-58
4 张柏和，黄贯学，金庆达，杨锡兰. 茵陈胆道汤对胆汁有形成分的影响. 江西医药，1983；(1)：22
5 石景森，孟清翠，王荣，高振亚，刘绍诰. 茵陈对胆石病‘T’管胆汁有形成分的影响. 西安医科大学学报，1987；8(4)：394-396
6 石景森，任斌，孟清翠，田和平，韩梅荣，王作仁 et al. 茵陈郁金防止高胆固醇饮食诱发豚鼠胆结石机理初探. 西安医科大学学报，1994；15(增刊)：1-2
石景森，男，1937-05-24生，河北省易县人，汉族. 1961年西安医学院医疗系毕业，1985年赴美国宾夕法尼亚大学医学院进修肝胆外科，外科学教授，博士导师，主任医师，肝胆外科研究室主任及中华医学会胆道外科学组副组长. 主攻肝胆外科专业，从事胆石成因和胆道肿瘤基础及临床诊治的研究，获国家、省部级科技进步奖13项，发表论文168篇.
*国家自然科学基金资助项目，No.39071000.
通讯作者 石景森，710061，西安医科大学第一附属医院肝胆外科研究室，陕西省西安市南郊健康路1号.收稿日期 1998-03-08, 百拇医药