初乳对早期新生儿肠道菌群的作用
作者：张会丰1 李根山1 田秀巧1 刘桂珍1 陈连元2
单位：1河北医科大学第二医院儿科 河北省石家庄市 050000；2山西医科大学第一医院儿科 山西省太原市 030001
关键词：人乳哺养；肠/微生物学；粪便/微生物学；肠杆菌属/分离和提纯
华人消化杂志980841Subject headings intestins/microbiology; feces/microbiology; enterobacter/isolation and purification
中国图书资料分类号 R 174.4
不同喂养方式下新生儿肠道菌群的差别是明显的[1,2]，喂养方式对新生儿肠道菌群演替有重要影响. 早期新生儿(7 d以内)唯一的食物来源是初乳，初乳因所含各种营养成分的特殊性，愈来愈受到人们的关注. 我们对初乳喂养新生儿的肠道菌群做了定量分析，旨在探讨初乳对早期新生儿肠道菌群生理性演替的作用，进而从肠道微生态学的角度阐述初乳喂养的价值. 优势菌(predominant bacteria)是决定一个微生物群生态平衡的核心因素，我们选择肠道菌群中的需氧优势菌-肠杆菌和厌氧优势菌-双歧杆菌作为观察肠道菌群的指标.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 健康5 d～7 d新生儿，初乳喂养32名. 人工喂养24名，均来自同一医院产科，两组婴儿孕龄、分娩方式、出生体重、 居住环境、生活状况等基本一致. 均无腹泻及抗生素应用史，其母也无用抗生素史. 于生后5 d～7 d采集尿布上新鲜大便约1 g～2 g，放入洁净青霉素小瓶，盖紧胶塞及时送检.
1.2 方法 取新鲜粪便0.5 g，加入含稀释液4.5 mL试管内并振荡均匀，此为10-1稀释度. 用无菌吸管取10-1稀释度均匀浆液0.2 mL加入含稀释液1.8 mL试管内并振荡均匀，此为10-2稀释度，依次做10倍系列稀释，直到10-8. 培养双歧杆菌用双歧杆菌选择性培养基，选用10-3～10-8 6个稀释度. 培养肠杆菌用麦康凯培养基，选用10-5～10-8 4个稀释度. 采用康白滴注法[3]. 每个稀释度接种2～3个滴面. 双歧杆菌培养基接种前预还原24 h以上，双歧杆菌耐氧试验用普通血平板. 双歧杆菌培养采用Gaspak厌氧罐法(37℃ 48 h～72 h). 肠杆菌用普通方法(37℃ 24 h). 根据菌落的可数性，选择适当稀释度计算每克湿便活细菌数，用菌落形成单位(CFU)表示. 公式为CFU/ g=平均菌落数×47×稀释度. 根据菌落肉眼形态，革兰染色，生化反应等鉴别. 肠杆菌在麦康凯培养基上为粉红色菌落，大小一致，为革兰氏阴性杆菌. 双歧杆菌为灰褐色、乳黄色菌落，直径0.5 mm～1.5 mm，园形、致密、边缘整齐. 耐氧试验阴性. 为革兰阳性杆菌，着色不均匀，可有典型分叉呈Y型.
, 百拇医药
统计学处理 细菌数值用LogCFU/ g表示，表中所列数据为均数LogCFU/ g±标准差，对比较的各指标首先进行方差齐性检验，方差齐用t检验，方差不齐用t＇检验.
2 结果
母乳喂养5 d～7 d的新生儿双歧杆菌数量最多，肠杆菌的数量明显低于双歧杆菌，而在人工喂养儿肠杆菌的数量最多，双歧杆菌的数量低于肠杆菌. 母乳喂养儿双歧杆菌的数量远远高于人工母乳喂养儿，二者相差10左右(表1).
表1 母乳喂养儿与人工喂养儿两类细菌的比较 (X±S,LogCFU/g)
母乳喂养(n=32)
人工喂养b(n=24)
t值
, 百拇医药
双歧杆菌
9.7090±0.7189
6.4349±1.2668
10.988
肠杆菌
7.2433±1.0049
8.3716±1.1689
-3.277
bP<0.01，vs 母乳喂养.
3 讨论
从新生儿肠道细菌自然定居状况看，肠道先出现的应是需氧菌和兼性厌氧菌，然后再是专性厌氧菌. 初生的新生儿肠道内由于吞咽或肠粘膜毛细血管的弥散而充满了氧气，专性厌氧菌是不能生长的[4]. 此时需氧或兼性厌氧的肠杆菌对维持肠腔的厌氧环境十分必需. 肠杆菌不仅消耗掉吞咽的氧而且不断消耗来自血液循环通过肠粘膜弥散到肠腔对厌氧菌有害的氧，同时维持并形成稳定的厌氧菌丛生长所必需的-350 mV的氧化还原电位[5].
, 百拇医药
本结果可以看出，人工喂养的早期新生儿肠道菌群中需氧或兼性厌氧的肠杆菌在数量上高于专性厌氧的双歧杆菌，此结果就是对肠道菌群先需氧菌生长后厌氧菌生长过程的反映. 这是肠道菌群初级演替的规律.与此形成鲜明对照的是哺初乳的新生儿肠道菌群中厌氧的双歧杆菌明显高于需氧或兼性厌氧的肠杆菌. 这表明初乳对肠道菌群的演替发生了影响. 这种影响源于初乳的本身特点. 初乳是指产妇产后7 d内分泌的乳汁. 初乳所含蛋白质及有形物质(如免疫细胞)多，其所含物质的质与量明显不同于其他阶段的浮汁，更是任何其他乳品或代用品无法替代的.
初乳对新生儿肠道菌群的影响是通过初乳中特有的成分实现的. 初乳中含的一种低聚糖物质即双歧因子，双歧因子促进双歧杆菌生长. 初乳中含有较多量的乳铁蛋白，这是一种能和铁离子结合的蛋白质，对肠杆菌有抑制作用. 分泌型的IgA在初乳中含量最高，牛乳中不含分泌型IgA. 分泌型IgA被新生儿摄入后，在胃肠道不受胃酸和消化酶破坏，对肠杆菌有抑制作用. 由此可见，初乳中既含有促进双歧杆菌生长的物质，又含有抑制肠杆菌生长的物质，它对早期新生儿肠道菌群的建立发挥着关键性的作用. 初乳喂养是有重要意义的，一方面初乳因其含有的各种营养物质和有形成分直接对新生儿有营养和抗感染作用，另一方面初乳影响肠道菌群的演替，使双歧杆菌增多，肠杆菌减少. 双歧杆菌作为有益的生理菌，它对新生儿有着营养和抗感染作用. 因为初乳喂养容易被大家忽视，在提倡母乳喂养的同时，应强调初乳喂养的作用.
, 百拇医药
致谢 对河北医科大学李仲兴教授、郝维善教授的指导及边占水副教授、王秀华老师、赵建宏同志帮助，谨致谢意.
通讯作者 张会丰
收稿日期 1998-05-06
4 参考文献
1 Yoshika H, Iseki K, Fujita K. Development and difference of intestinal flora in the neonatal period in breast-fed and bottle-fed infants. Pediatrics, 1983;72(3):317-321
2 Simhon A, Douglas JR, Drasar BS, Soothill JF. Effect of feeding on infants＇ faeal flora. Arch Dis Child, 1982;57(1):54-58
3 大连医学院正常菌群实验室、正常肠菌群检查法(一). 见：正常菌群与葡萄球菌A蛋白专辑. 大连：1982：109-110
4 康白. 微生态学. 第1版. 大连：大连出版社，1988：209
5 唐振亚. 人体肠道埃希氏大肠杆菌(E.coli)：有利、有害、还是毫无意义 德国医学，1991；8(4)：223-224ISSN 1007-9319 CN 14-1218/ R 华人消化杂志，1998;6(8):736, 百拇医药(张会丰1 李根山1 田秀巧1 刘桂珍1 陈连元2)
单位：1河北医科大学第二医院儿科 河北省石家庄市 050000；2山西医科大学第一医院儿科 山西省太原市 030001
关键词：人乳哺养；肠/微生物学；粪便/微生物学；肠杆菌属/分离和提纯
华人消化杂志980841Subject headings intestins/microbiology; feces/microbiology; enterobacter/isolation and purification
中国图书资料分类号 R 174.4
不同喂养方式下新生儿肠道菌群的差别是明显的[1,2]，喂养方式对新生儿肠道菌群演替有重要影响. 早期新生儿(7 d以内)唯一的食物来源是初乳，初乳因所含各种营养成分的特殊性，愈来愈受到人们的关注. 我们对初乳喂养新生儿的肠道菌群做了定量分析，旨在探讨初乳对早期新生儿肠道菌群生理性演替的作用，进而从肠道微生态学的角度阐述初乳喂养的价值. 优势菌(predominant bacteria)是决定一个微生物群生态平衡的核心因素，我们选择肠道菌群中的需氧优势菌-肠杆菌和厌氧优势菌-双歧杆菌作为观察肠道菌群的指标.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 健康5 d～7 d新生儿，初乳喂养32名. 人工喂养24名，均来自同一医院产科，两组婴儿孕龄、分娩方式、出生体重、 居住环境、生活状况等基本一致. 均无腹泻及抗生素应用史，其母也无用抗生素史. 于生后5 d～7 d采集尿布上新鲜大便约1 g～2 g，放入洁净青霉素小瓶，盖紧胶塞及时送检.
1.2 方法 取新鲜粪便0.5 g，加入含稀释液4.5 mL试管内并振荡均匀，此为10-1稀释度. 用无菌吸管取10-1稀释度均匀浆液0.2 mL加入含稀释液1.8 mL试管内并振荡均匀，此为10-2稀释度，依次做10倍系列稀释，直到10-8. 培养双歧杆菌用双歧杆菌选择性培养基，选用10-3～10-8 6个稀释度. 培养肠杆菌用麦康凯培养基，选用10-5～10-8 4个稀释度. 采用康白滴注法[3]. 每个稀释度接种2～3个滴面. 双歧杆菌培养基接种前预还原24 h以上，双歧杆菌耐氧试验用普通血平板. 双歧杆菌培养采用Gaspak厌氧罐法(37℃ 48 h～72 h). 肠杆菌用普通方法(37℃ 24 h). 根据菌落的可数性，选择适当稀释度计算每克湿便活细菌数，用菌落形成单位(CFU)表示. 公式为CFU/ g=平均菌落数×47×稀释度. 根据菌落肉眼形态，革兰染色，生化反应等鉴别. 肠杆菌在麦康凯培养基上为粉红色菌落，大小一致，为革兰氏阴性杆菌. 双歧杆菌为灰褐色、乳黄色菌落，直径0.5 mm～1.5 mm，园形、致密、边缘整齐. 耐氧试验阴性. 为革兰阳性杆菌，着色不均匀，可有典型分叉呈Y型.
, 百拇医药
统计学处理 细菌数值用LogCFU/ g表示，表中所列数据为均数LogCFU/ g±标准差，对比较的各指标首先进行方差齐性检验，方差齐用t检验，方差不齐用t＇检验.
2 结果
母乳喂养5 d～7 d的新生儿双歧杆菌数量最多，肠杆菌的数量明显低于双歧杆菌，而在人工喂养儿肠杆菌的数量最多，双歧杆菌的数量低于肠杆菌. 母乳喂养儿双歧杆菌的数量远远高于人工母乳喂养儿，二者相差10左右(表1).
表1 母乳喂养儿与人工喂养儿两类细菌的比较 (X±S,LogCFU/g)
母乳喂养(n=32)
人工喂养b(n=24)
t值
, 百拇医药
双歧杆菌
9.7090±0.7189
6.4349±1.2668
10.988
肠杆菌
7.2433±1.0049
8.3716±1.1689
-3.277
bP<0.01，vs 母乳喂养.
3 讨论
从新生儿肠道细菌自然定居状况看，肠道先出现的应是需氧菌和兼性厌氧菌，然后再是专性厌氧菌. 初生的新生儿肠道内由于吞咽或肠粘膜毛细血管的弥散而充满了氧气，专性厌氧菌是不能生长的[4]. 此时需氧或兼性厌氧的肠杆菌对维持肠腔的厌氧环境十分必需. 肠杆菌不仅消耗掉吞咽的氧而且不断消耗来自血液循环通过肠粘膜弥散到肠腔对厌氧菌有害的氧，同时维持并形成稳定的厌氧菌丛生长所必需的-350 mV的氧化还原电位[5].
, 百拇医药
本结果可以看出，人工喂养的早期新生儿肠道菌群中需氧或兼性厌氧的肠杆菌在数量上高于专性厌氧的双歧杆菌，此结果就是对肠道菌群先需氧菌生长后厌氧菌生长过程的反映. 这是肠道菌群初级演替的规律.与此形成鲜明对照的是哺初乳的新生儿肠道菌群中厌氧的双歧杆菌明显高于需氧或兼性厌氧的肠杆菌. 这表明初乳对肠道菌群的演替发生了影响. 这种影响源于初乳的本身特点. 初乳是指产妇产后7 d内分泌的乳汁. 初乳所含蛋白质及有形物质(如免疫细胞)多，其所含物质的质与量明显不同于其他阶段的浮汁，更是任何其他乳品或代用品无法替代的.
初乳对新生儿肠道菌群的影响是通过初乳中特有的成分实现的. 初乳中含的一种低聚糖物质即双歧因子，双歧因子促进双歧杆菌生长. 初乳中含有较多量的乳铁蛋白，这是一种能和铁离子结合的蛋白质，对肠杆菌有抑制作用. 分泌型的IgA在初乳中含量最高，牛乳中不含分泌型IgA. 分泌型IgA被新生儿摄入后，在胃肠道不受胃酸和消化酶破坏，对肠杆菌有抑制作用. 由此可见，初乳中既含有促进双歧杆菌生长的物质，又含有抑制肠杆菌生长的物质，它对早期新生儿肠道菌群的建立发挥着关键性的作用. 初乳喂养是有重要意义的，一方面初乳因其含有的各种营养物质和有形成分直接对新生儿有营养和抗感染作用，另一方面初乳影响肠道菌群的演替，使双歧杆菌增多，肠杆菌减少. 双歧杆菌作为有益的生理菌，它对新生儿有着营养和抗感染作用. 因为初乳喂养容易被大家忽视，在提倡母乳喂养的同时，应强调初乳喂养的作用.
, 百拇医药
致谢 对河北医科大学李仲兴教授、郝维善教授的指导及边占水副教授、王秀华老师、赵建宏同志帮助，谨致谢意.
通讯作者 张会丰
收稿日期 1998-05-06
4 参考文献
1 Yoshika H, Iseki K, Fujita K. Development and difference of intestinal flora in the neonatal period in breast-fed and bottle-fed infants. Pediatrics, 1983;72(3):317-321
2 Simhon A, Douglas JR, Drasar BS, Soothill JF. Effect of feeding on infants＇ faeal flora. Arch Dis Child, 1982;57(1):54-58
3 大连医学院正常菌群实验室、正常肠菌群检查法(一). 见：正常菌群与葡萄球菌A蛋白专辑. 大连：1982：109-110
4 康白. 微生态学. 第1版. 大连：大连出版社，1988：209
5 唐振亚. 人体肠道埃希氏大肠杆菌(E.coli)：有利、有害、还是毫无意义 德国医学，1991；8(4)：223-224ISSN 1007-9319 CN 14-1218/ R 华人消化杂志，1998;6(8):736, 百拇医药(张会丰1 李根山1 田秀巧1 刘桂珍1 陈连元2)