慢性中重型肝炎自体LAK细胞回输治疗效果的细胞免疫分析*
作者：张言超 吴文漪 陈 明 韩方正
单位：
关键词：肝炎/治疗；LAK细胞；免疫，细胞；慢性病
慢性中重型肝炎自体LAK细胞回输治 疗效果的细胞免疫分析Subject headings hepatitis/therapy; LAK cell; immunity, cellular; chronic diseases
我们采用自体LAK细胞回输疗法[1]治疗慢性肝炎，中重型CH(MS)患者，以达到HBeAg和HBV-DNA阴转的目的. 作者统计24例接受治疗的CH(MS)患者阴转情况，HBeAg和HBV-DNA阴转率分别为41.7%和66.7%，低于文献[1]报道，高于裘云庆et al[2]报道. 通过对这24例CH(MS)患者细胞免疫进行分析，发现疗效与患者的基础细胞免疫密切相关，现报道如下.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 CH(MS)患者24例均为采用自体LAK细胞回输治疗的男性住院. A组10例HBeAg和HBV-DNA均阴转，平均年龄35.6岁； B组6例，唯有HBV-DNA阴转，平均年龄29.8岁；C组8例，HBeAg和HBV-DNA均未阴转，平均年龄32.9岁.
1.2 方法 采用自体LAK细胞回输疗法，具体操作详见文献[1]. CD4+细胞和CD8+细胞采用SAC花环法检测，详细步骤见文献[3]，试剂由武汉生物制品所提供. HBeAg采用ELISA法检测，严格按说明书进行操作，试剂盒由上海科华实业有限公司提供. HBV-DNA采用生物素探针斑点杂交法检测，严格按说明书进行操作，试剂盒由北医大人民医院肝病研究所提供.
2 结果
, 百拇医药
自体LAK细胞回输治疗前后3组患者CD4+细胞和CD8+细胞结果表1. HBeAg和HBV-DNA阴转率分别为41.7%(10/?24)和66.7%(16/?24).表1 CH(MS)患者LAK细胞治疗后CD4+和CD8+细胞的变化
(
±s,%)
分组
n
CD4+细胞
, 百拇医药
CD8+细胞
CD4+细胞/?CD8+细胞
A组
10
治疗前
42.5±7.7
34.0±8.1a
1.4±0.7
治疗后
43.4±6.6
28.4±5.2c
, http://www.100md.com
1.6±0.5
B组
6
治疗前
39.9±7.7
31.3±9.9
1.6±1.3
治疗后
50.6±6.8ac
27.3±6.8
2.1±0.7ac
C组
, 百拇医药
8
治疗前
32.4±4.9a
36.5±4.6a
0.9±0.2a
治疗后
43.6±6.5c
30.8±7.2c
1.5±0.4c
正常对照
54
, http://www.100md.com
43.5±6.8
28.8±5.7
1.6±0.4
aP<0.05, vs 正常对照；cP<0.05, vs 治疗前.
3 讨论
CD4+细胞为辅助性/?诱导性T细胞亚群，是产生IL-2主要淋巴细胞，IL-2能诱导免疫活性细胞表面mIL-2R表达与其结合发挥抗病毒作用. 结果显示治疗前C组CD4+细胞显著低于正常对照，A组和B组虽低于正常对照但无差异，据此可推测治疗前C组的抗病毒作用明显低于A组和B组. 有人报道[4]CD8+细胞增高是由于抑制性T细胞功能降低，而细胞毒性T细胞功能提高和数目增多所致. 因此CD8+细胞增高是造成肝细胞免疫损害的基础. 结果显示治疗前C组和A组CD8+细胞显著高于正常对照，B组CD8+细胞增高不显著，表明C组和A组的肝细胞损害较B组严重. 治疗前结果提示C组基础细胞免疫较A组和B组差.
, http://www.100md.com
CD4+细胞增加，机体产生IL-2水平也随之增加[5]，IL-2具有高度的免疫活性，可以通过对不同的HBV-DNA启动子的抑制来实现抗病毒作用[6]. 经过一个疗程的治疗3组CD4+细胞均有所增加，以C组和B组更为显著；3组CD8+细胞均降低，而以A组和C组更明显，因此提示治疗后3组患者的免疫紊乱均得到纠正，肝功能恢复，抗病毒作用增强. 然而C组治疗后调节了免疫紊乱未达阴转目的，作者认为可能因其治疗前CD4+细胞和CD8+细胞长期显著异常，以致CD4+细胞/?CD8+细胞比例倒置(0.9±0.2)，肝细胞反复受损，HBV长期大量复制，体内病毒含量较多，因此难以一次清除.
, http://www.100md.com 结果表明B组的转归略差于A组，造成此结果的原因笔者作如下推测：①治疗前CD4+细胞数B组较A组略低，因而抗病毒作用也低下. ②B组治疗后CD4+细胞大幅度增加明显高于正常对照，导致CD4+细胞/?CD8+细胞的比例显著高于正常对照(P<0.05)，因而造成CD4+细胞与CD8+细胞相互促进和相互制约的关系失衡，免疫应答不适当，因此抗病毒作用减弱. ③B组治疗前CD4+细胞和CD8+细胞基本正常，CD8+细胞治疗前后无差异性变化，可能处于免疫耐受状态. ④还可因观察例数少造成统计偏差所致，对此有待进一步探讨.
本实验表明基础细胞免疫高的患者自体LAK细胞回输治疗后HBeAg和HBV-DNA阴转率高，因此CD4+细胞和CD8+细胞可作为一对基础免疫指标用于LAK细胞回输治疗前患者的筛选.
, 百拇医药
4 参考文献
1 国家“七五”攻关组. 自体LAK细胞回输疗法治疗慢性乙型肝炎的临床试验. 中华内科杂志，1991；30(1)：27-29
2 裘云庆，钱文炳，盛吉芳，干梦九，严力行. 大剂量LAK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床观察. 肝脏病杂志，1995；3(2)：103-104
3 张言超，吴文漪，陈明，韩方正，李秀华. 自体LAK细胞回输治疗慢活肝患者T细胞亚群、mIL-2R等的动态观察. 徐州医学院学报，1997；17(1)：10-11
4 牛俊奇，杨本哲，张清泉，王冠军，余绳美， 许昶. 病毒性乙型肝炎病人T细胞亚群的变化. 白求恩医科大学学报，1992；18(2)：188-189
5 吴文漪，陈明，韩方正，张言超，李秀华. LAK细胞治疗慢性活动型乙型肝炎的疗效与机理研究. 徐州医学院学报，1997；17(1)：1-4
6 成军，斯崇文，王勤环，于敏. 人白细胞介素2基因表达载体的构建及抗乙肝病毒作用. 肝脏病杂志，1995；3(2)：67-70, http://www.100md.com
单位：
关键词：肝炎/治疗；LAK细胞；免疫，细胞；慢性病
慢性中重型肝炎自体LAK细胞回输治 疗效果的细胞免疫分析Subject headings hepatitis/therapy; LAK cell; immunity, cellular; chronic diseases
我们采用自体LAK细胞回输疗法[1]治疗慢性肝炎，中重型CH(MS)患者，以达到HBeAg和HBV-DNA阴转的目的. 作者统计24例接受治疗的CH(MS)患者阴转情况，HBeAg和HBV-DNA阴转率分别为41.7%和66.7%，低于文献[1]报道，高于裘云庆et al[2]报道. 通过对这24例CH(MS)患者细胞免疫进行分析，发现疗效与患者的基础细胞免疫密切相关，现报道如下.
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1 对象和方法
1.1 对象 CH(MS)患者24例均为采用自体LAK细胞回输治疗的男性住院. A组10例HBeAg和HBV-DNA均阴转，平均年龄35.6岁； B组6例，唯有HBV-DNA阴转，平均年龄29.8岁；C组8例，HBeAg和HBV-DNA均未阴转，平均年龄32.9岁.
1.2 方法 采用自体LAK细胞回输疗法，具体操作详见文献[1]. CD4+细胞和CD8+细胞采用SAC花环法检测，详细步骤见文献[3]，试剂由武汉生物制品所提供. HBeAg采用ELISA法检测，严格按说明书进行操作，试剂盒由上海科华实业有限公司提供. HBV-DNA采用生物素探针斑点杂交法检测，严格按说明书进行操作，试剂盒由北医大人民医院肝病研究所提供.
2 结果
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自体LAK细胞回输治疗前后3组患者CD4+细胞和CD8+细胞结果表1. HBeAg和HBV-DNA阴转率分别为41.7%(10/?24)和66.7%(16/?24).表1 CH(MS)患者LAK细胞治疗后CD4+和CD8+细胞的变化
(
±s,%)分组
n
CD4+细胞
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CD8+细胞
CD4+细胞/?CD8+细胞
A组
10
治疗前
42.5±7.7
34.0±8.1a
1.4±0.7
治疗后
43.4±6.6
28.4±5.2c
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1.6±0.5
B组
6
治疗前
39.9±7.7
31.3±9.9
1.6±1.3
治疗后
50.6±6.8ac
27.3±6.8
2.1±0.7ac
C组
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8
治疗前
32.4±4.9a
36.5±4.6a
0.9±0.2a
治疗后
43.6±6.5c
30.8±7.2c
1.5±0.4c
正常对照
54
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43.5±6.8
28.8±5.7
1.6±0.4
aP<0.05, vs 正常对照；cP<0.05, vs 治疗前.
3 讨论
CD4+细胞为辅助性/?诱导性T细胞亚群，是产生IL-2主要淋巴细胞，IL-2能诱导免疫活性细胞表面mIL-2R表达与其结合发挥抗病毒作用. 结果显示治疗前C组CD4+细胞显著低于正常对照，A组和B组虽低于正常对照但无差异，据此可推测治疗前C组的抗病毒作用明显低于A组和B组. 有人报道[4]CD8+细胞增高是由于抑制性T细胞功能降低，而细胞毒性T细胞功能提高和数目增多所致. 因此CD8+细胞增高是造成肝细胞免疫损害的基础. 结果显示治疗前C组和A组CD8+细胞显著高于正常对照，B组CD8+细胞增高不显著，表明C组和A组的肝细胞损害较B组严重. 治疗前结果提示C组基础细胞免疫较A组和B组差.
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CD4+细胞增加，机体产生IL-2水平也随之增加[5]，IL-2具有高度的免疫活性，可以通过对不同的HBV-DNA启动子的抑制来实现抗病毒作用[6]. 经过一个疗程的治疗3组CD4+细胞均有所增加，以C组和B组更为显著；3组CD8+细胞均降低，而以A组和C组更明显，因此提示治疗后3组患者的免疫紊乱均得到纠正，肝功能恢复，抗病毒作用增强. 然而C组治疗后调节了免疫紊乱未达阴转目的，作者认为可能因其治疗前CD4+细胞和CD8+细胞长期显著异常，以致CD4+细胞/?CD8+细胞比例倒置(0.9±0.2)，肝细胞反复受损，HBV长期大量复制，体内病毒含量较多，因此难以一次清除.
, http://www.100md.com 结果表明B组的转归略差于A组，造成此结果的原因笔者作如下推测：①治疗前CD4+细胞数B组较A组略低，因而抗病毒作用也低下. ②B组治疗后CD4+细胞大幅度增加明显高于正常对照，导致CD4+细胞/?CD8+细胞的比例显著高于正常对照(P<0.05)，因而造成CD4+细胞与CD8+细胞相互促进和相互制约的关系失衡，免疫应答不适当，因此抗病毒作用减弱. ③B组治疗前CD4+细胞和CD8+细胞基本正常，CD8+细胞治疗前后无差异性变化，可能处于免疫耐受状态. ④还可因观察例数少造成统计偏差所致，对此有待进一步探讨.
本实验表明基础细胞免疫高的患者自体LAK细胞回输治疗后HBeAg和HBV-DNA阴转率高，因此CD4+细胞和CD8+细胞可作为一对基础免疫指标用于LAK细胞回输治疗前患者的筛选.
, 百拇医药
4 参考文献
1 国家“七五”攻关组. 自体LAK细胞回输疗法治疗慢性乙型肝炎的临床试验. 中华内科杂志，1991；30(1)：27-29
2 裘云庆，钱文炳，盛吉芳，干梦九，严力行. 大剂量LAK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床观察. 肝脏病杂志，1995；3(2)：103-104
3 张言超，吴文漪，陈明，韩方正，李秀华. 自体LAK细胞回输治疗慢活肝患者T细胞亚群、mIL-2R等的动态观察. 徐州医学院学报，1997；17(1)：10-11
4 牛俊奇，杨本哲，张清泉，王冠军，余绳美， 许昶. 病毒性乙型肝炎病人T细胞亚群的变化. 白求恩医科大学学报，1992；18(2)：188-189
5 吴文漪，陈明，韩方正，张言超，李秀华. LAK细胞治疗慢性活动型乙型肝炎的疗效与机理研究. 徐州医学院学报，1997；17(1)：1-4
6 成军，斯崇文，王勤环，于敏. 人白细胞介素2基因表达载体的构建及抗乙肝病毒作用. 肝脏病杂志，1995；3(2)：67-70, http://www.100md.com