不同肝病患者血清中肝再生增强因子水平的检测及意义*
作者：周 平11 杨晓明2 李奇芬3 何 浩2 贺福初2 张木森1
单位：
关键词：肝炎；肝硬化；肝肿瘤；肝再生增强因子/分析；酶联接免疫吸附测定
华人消化杂志980916
Detection of augmenter of liver regeneration in sera of patients with various liver diseases*
ZHOU Ping1, YANG Xiao-Ming2, LI Qi-Fen3, HE Hao2, HE Fu-Chu2 and ZHANG Mu-Sen1
, http://www.100md.com
1Department of Infectious Diseases, General Hospital of Air Force, Beijing 100036, China
2Beijing Institute of Radiation Medicine, 27 Taiping Road, Beijing 100850, China
3Department of Infectious Diseases, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400063, China
Subject headings hepatitis; liver cirrhosis; liver neoplasms; augmenter of liver regeneration/analysis; enzyme linked immunoassay
, 百拇医药
Abstract
AIM To develop a method of enzyme-linked immunoassay (ELISA) for measurement of serum augmenter of liver regeneration (ALR) and to investigate the levels of ALR in serum of patients with varous liver diseases.
METHODS The serum ALR of patients with various diseases was detected by means of ELISA technique.
RESULTS The lowest concentration to be detected by such a technique was 0.1μg purified ALR/L. The standard curve for ALR revealed that the latter, within the range of 0.1μg/L-10.0μg/L, was linearly related to the ALR antibody and there was no cross reactivity to TGF-α, EGF or other hepatocyte proliferative factors. The serum ALR was the highest in severe hepatitis (2.16μg/L±2.10μg/L) and the second highest in acute hepatitis (1.12μg/L±0.48μg/L), being markedly higher than that in normal subjects (0.33μg/L±0.23μg/L), and that in chronic hepatitis (0.45μg/L±0.16μg/L), liver cirrhosis (0.57μg/L±0.36μg/L), primary hepatocellular carcinoma (0.35μg/L±0.14μg/L) and extra-hepatic diseases (0.31μg/L±0.21μg/L) (P<0.05 or P<0.01). Serum ALR in chronic hepatitis and liver cirrhosis was also significantly higher than that in normal subjects (P<0.05). In patients with primary hepatocellular carcinoma and extra-hepatic diseases, serum ALR was not different from that of normal subjects (P>0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION The ELISA was a highly specific and sensitive technique to assay serum ALR and the increase of serum ALR was strongly related to liver injury and liver regeneration.
摘 要
目的 建立血清肝再生增强因子(ALR)的酶联免疫检测方法，了解不同肝病患者血清中ALR水平及其意义.
方法 利用ALR的酶联免疫方法检测不同肝病患者外周血清中ALR水平.
结果 所建立的ALR酶联免疫方法其最低检测到的ALR浓度为0.1μg/L,在10μg/L范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系，与TGF-α,EGF等其他促肝细胞增殖因子无任何交叉反应. 重型肝炎患者血清中ALR水平最高(2.14μg/L±2.10μg/L) ，急性肝炎次之(1.12μg/L±0.48μg/L)，两者均非常显著高于正常人(0.33μg/L±0.23μg/L), 慢性肝炎(0.45μg/L±0.16μg/L), 肝炎后肝硬变(0.57μg/L±0.36μg/L)，原发性肝癌(0.35μg/L±0.14μg/L) 和肝外疾病(0.31μg/L±0.21μg/L)患者(P<0.05和P<0.01)；慢性肝炎和肝炎后肝硬变患者血清中ALR水平亦明显高于正常人(P<0.05)；原发性肝癌和肝外疾病患者血清ALR水平与正常人无明显差异(P>0.05).
, 百拇医药
结论 ALR酶联免疫检测方法对于不同肝病患者血清中ALR的检测具有良好的特异性和敏感性；肝病患者血清ALR的增多可能与肝损害及肝脏的再生有密切关系.
0 引言
重型病毒性肝炎患者外周血具有强烈刺激原代肝细胞DNA合成的作用，其机制主要是肝损伤后肝增殖刺激因子的产生增多[1]. 目前已报道肝损伤后外周血促进肝增殖的肝细胞生长因子(HGF)[2]，转化生长因子-α(TGF-α)[3]等明显增多，并与病情的转归有一定的关联. 最近，我们报道了一种新的肝增殖刺激因子-肝再生增强因子(Augmenter of liver regeneration， ALR)，它在性质上与肝刺激物(HSS)相似，在体内外均可强烈刺激肝细胞DNA合成[4]，并具有抗肝损伤和救治中毒性肝衰竭动物的作用[5,6]，因而是一种重要的肝再生调控因子. 我们建立了ALR的酶联免疫检测方法，检测不同类型肝病患者外周血ALR水平，并探讨了可能的意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 大白鼠为军事医学科学院实验动物中心提供，96孔酶联板购自Coster公司. 辣根过氧化物酶标记鼠抗兔IgG及其显色系统购自中山生物公司. 重组人转化生长因子和重组表皮生长因子(EGF)购自Promega公司. 选择及血清标本的准备非重型肝炎为1997-01～06间空军总医院传染科收治的，重型肝炎为第三军医大学西南医院传染科同期收治的. 诊断符合1995-05第五次全国传染病和寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎防治方案标准. 所有患者均早晨空腹取血，4℃过夜，1200g离心10min，取血清置-20℃保存待检测.
1.2 方法
1.2.1 抗ALR多克隆抗体的制备 自行构建的人ALR工程菌经发酵，纯化，获纯度>95%的人ALR[7]，进而以多点皮下注射法免疫家兔，4wk后加强1次，10d后经耳静脉取血检测抗体效价，免疫扩散法效价为1∶250，并成功应用于ALR的蛋白印迹检测. 活杀动物后取全血，4℃过夜，500g离心20min，分装血清保存于-20℃.
, 百拇医药
1.2.2 ALR水平的检测 血清ALR水平检测按标准ELISA法进行. 主要步骤：以包被液1∶1稀释检测血清200μL后，4℃包被96孔酶联板过夜，洗涤3次，一抗为1∶200稀释的自制ALR抗血清，二抗为辣根过氧化物酶标记的鼠抗兔IgG. 同时以不同浓度人ALR包被，并进行检测以获取标准曲线.
统计学处理 采用t检验.
2 结果
2.1 酶联免疫检测方法的建立 纯化ALR检测的标准曲线表明建立的酶联免疫检测方法最低可检测到ALR的浓度为0.1μg/L，在10μg/L范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系(图1). 建立的酶联免疫检测方法有较好的特异性，与可能存在于病毒性肝炎患者血清中的细胞因子如：TGF-α，EGF无交叉反应.
2.2 肝病患者外周血ALR水平 共检测不同类型肝病患者87例，其中急性肝炎18例，慢性肝炎23例，肝硬变9例，原发性肝癌5例，重型肝炎32例，其中急重肝11例，亚重肝3例，慢重肝18例，急性肝炎患者较正常人高3.36倍(P<0.01)，慢性肝炎和肝硬变患者ALR水平亦较正常人增高(P<0.05)，重型肝炎患者ALR水平平均为2.14μg/L，高于正常人6.43倍，较急性肝炎患者也高1.91倍，重型肝炎中以亚重肝患者ALR水平最高，急重肝次之，慢重肝最低. 原发性肝癌和肝外疾病患者ALR水平较正常人无明显增高(P>0.05)，但两者明显低于各型肝炎患者水平(P<0.05或P<0.01)，表1).
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图1 ALR检测的标准曲线
表1 不同肝病患者外周血ALR水平
临床类型
n
ALR含量(
±s,μg/L)
正常对照组
24
0.33±0.24
急性肝炎
18
1.12±0.48bdef
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慢性肝炎
23
0.45±0.16a
肝炎后肝硬变
9
0.57±0.36a
原发性肝癌
5
0.35±0.14
重型肝炎
32
2.14±2.10bdef
, 百拇医药
(急重肝)
11
2.37±2.26bdf
(亚重肝)
3
4.83±2.35
(慢重肝)
18
1.54±2.16bcf*^
肝外疾病
28
0.31±0.21
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aP<0.05，bP<0.01， vs 对照组；cP<0.05，dP<0.01， vs 慢性肝炎；eP<0.05，vs 肝硬变；fP<0.01， vs 肝外疾病.
3 讨论
人肝再生增强因子是一种新发现的重要的肝增殖刺激因子，它在肝损伤后修复中可能起重要作用，因此，建立一种快速、灵敏的检测方法具有重要的意义. 以往通常用原代培养肝细胞或肝癌细胞株进行活性检测，这大约需3d～4d的时间，因而难为临床应用. 新近，我们建立了一种检测ALR水平的酶联免疫方法，其最低可检测到ALR的浓度为0.1μg/L，在10μg/L范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系. 与TGF-α，EGF等其他促肝细胞增殖因子无任何交叉反应. 通过对检测不同类型肝脏疾病患者和肝外疾病患者外周血ALR水平发现，肝病患者外周血中ALR水平均有不同程度的增高，而肝外疾病均在正常范围之内，说明本方法具有良好的敏感性和特异性. 检测血清ALR水平可能有助于肝脏疾病的临床诊断及鉴别诊断.
, 百拇医药
病毒性肝炎特别是重型肝炎患者外周血促肝细胞增殖活性增高已多有报道，一般认为这与肝损伤时促肝增殖因子的代偿性增多有关. 已知的是肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子(TGF-α)，它们的增高与肝损伤的程度及患者的预后存在一定的关联；依据目前我们的检测结果，病毒性肝炎患者外周血ALR水平较正常人增高，特别是重型肝炎较正常人增高6.43倍，较普通肝炎患者增高大约2～5倍，类似Tomiya et al关于HGF和TGF-α的观察[3]. 这很可能与严重肝损伤时肝内外器官产生的ALR增多，而肝脏对ALR的代谢减少有关，我们已观察到大鼠2/3肝部分切除后肝组织ALR mRNA表达增高，同时肝外脏器如脾、肾等ALR的表达也明显增多[8]，提示这种代偿性的产生增多可能与肝再生有密切的关系.
人们一直期望利用某种肝增殖刺激因子来治疗严重肝脏疾病，但肝增殖刺激因子是否会促进或引起肝细胞发生癌变，一直是人们极为关心和亟待解决的问题. Nakayama et al[9,10]动物实验研究中发现，在大鼠暴发性肝炎和肝细胞癌变的肝脏组织中HGF阳性细胞和HGF-mRNA水平明显增多和增高，肝细胞癌基因c-met mRNA的表达也明显增强，提示HGF和HGF-c-met系统在肝细胞再生和肝细胞癌变过程中可能起着重要作用. 但另有研究报道，小剂量HGF对人肝癌细胞株无明显刺激作用，但较高浓度时却能明显抑制人肝癌细胞株的生长[11]. ALR是一种新型肝增殖刺激因子，在体外我们利用ALR直接刺激HTC肝癌细胞增殖，发现ALR对HTC肝癌细胞有明显的刺激作用[12]，我们检测了5例原发性肝癌患者外周血中ALR水平，显著低于其他肝病患者，而与正常人无明显差异. 由于目前有关研究报道较少，肝增殖刺激因子与肝细胞癌变的关系尚不清楚， 尚有待今后进一步研究[13].
, 百拇医药
4 参考文献
1 杨晓明. 重型病毒性肝炎患者血清肝细胞生长促进物质活性的检测及临床意义. 临床肝胆病杂志，1993；9(2)：79-80
2 Hillan KJ, Logan MC, Ferrier RK. Hepatocye proliferation and serum hepatocyte growth factor levels in patients with alcoholic hepatitis. J Hepatol, 1996;24(4):385-390
3 Tomiya T, Fujiwara K. Liver regeneration in fulminant hepatitis as evaluated by serum transformung growth factor alpha levels. Hepatology, 1996;23(2):253-257
, 百拇医药
4 杨晓明，邱兆华，谢玲，贺福初，吴祖泽. 新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究. 中国科学， 1997；40(6)：462-467
5 杨晓明，王爱民，周平，王清明，吴祖泽，贺福初. 重组人肝再生增强因子抗肝损伤作用. 中华医学杂志，1997；77(11)：855-857
6 谢玲，杨晓明，吴祖泽，贺福初. 肝再生增强因子救治实验性肝衰竭动物的实验研究. 中国应用生理杂志，1996；12(4)：324-326
7 杨晓明，谢玲，魏汉东，吴祖泽，贺福初. 肝再生增强因子在大肠杆菌中的高效表达及生物活性研究. 生物物理与生物化学学报，1997；29(4)：414-418
8 杨晓明，谢玲，吴祖泽，贺福初. 大鼠2/3肝部分切除后肝再生增强因子mRNA表达增加. 生理学报，1997；49(5)：599-601
, 百拇医药
9 Nakayama N, Kashiwazaki H, Kobayashi N, Hamada JI, Ogiso Y, Itakura Y et al. Differing distribution of hepatocyte growth factor-positive cells in the liver of LEC rats with acute hepatitis, chronic hepatitis and hepatoma. Jpn Cancer Res, 1995;86(1):5-9
10 Nakayama N, Kashiwazaki H, Kobayashi N, Hamada JI, Ogiso Y, Itakura Y et al. Hepatocyte growth factor and c-met expresion in Long-Evans Cinamon rats with spontaneous hepatitis and hepatoma. Hepatology, 1996;24(3):596-602
, 百拇医药
11 张宜俊. 促肝细胞生长素与临床应用研究进展. 临床肝胆病杂志，1995；11(2)：80-82
12 杨晓明，胡志远，谢玲，吴祖泽，贺福初. 人肝再生增强因子在体外能直接刺激HTC肝癌细胞增殖. 生理学报，1997；49(5)：557-561
13 Yang XM, Xie L, Xing GC, Wu ZZ, He FC. Partial isolation and identification of hepatic stimulator substance mRNA extracted from human fetal liver. WJG, 1998;4(2):100-102, 百拇医药(周 平11 杨晓明2 李奇芬3 何 浩2 贺福初2 张木森1)
单位：
关键词：肝炎；肝硬化；肝肿瘤；肝再生增强因子/分析；酶联接免疫吸附测定
华人消化杂志980916
Detection of augmenter of liver regeneration in sera of patients with various liver diseases*
ZHOU Ping1, YANG Xiao-Ming2, LI Qi-Fen3, HE Hao2, HE Fu-Chu2 and ZHANG Mu-Sen1
, http://www.100md.com
1Department of Infectious Diseases, General Hospital of Air Force, Beijing 100036, China
2Beijing Institute of Radiation Medicine, 27 Taiping Road, Beijing 100850, China
3Department of Infectious Diseases, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400063, China
Subject headings hepatitis; liver cirrhosis; liver neoplasms; augmenter of liver regeneration/analysis; enzyme linked immunoassay
, 百拇医药
Abstract
AIM To develop a method of enzyme-linked immunoassay (ELISA) for measurement of serum augmenter of liver regeneration (ALR) and to investigate the levels of ALR in serum of patients with varous liver diseases.
METHODS The serum ALR of patients with various diseases was detected by means of ELISA technique.
RESULTS The lowest concentration to be detected by such a technique was 0.1μg purified ALR/L. The standard curve for ALR revealed that the latter, within the range of 0.1μg/L-10.0μg/L, was linearly related to the ALR antibody and there was no cross reactivity to TGF-α, EGF or other hepatocyte proliferative factors. The serum ALR was the highest in severe hepatitis (2.16μg/L±2.10μg/L) and the second highest in acute hepatitis (1.12μg/L±0.48μg/L), being markedly higher than that in normal subjects (0.33μg/L±0.23μg/L), and that in chronic hepatitis (0.45μg/L±0.16μg/L), liver cirrhosis (0.57μg/L±0.36μg/L), primary hepatocellular carcinoma (0.35μg/L±0.14μg/L) and extra-hepatic diseases (0.31μg/L±0.21μg/L) (P<0.05 or P<0.01). Serum ALR in chronic hepatitis and liver cirrhosis was also significantly higher than that in normal subjects (P<0.05). In patients with primary hepatocellular carcinoma and extra-hepatic diseases, serum ALR was not different from that of normal subjects (P>0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION The ELISA was a highly specific and sensitive technique to assay serum ALR and the increase of serum ALR was strongly related to liver injury and liver regeneration.
摘 要
目的 建立血清肝再生增强因子(ALR)的酶联免疫检测方法，了解不同肝病患者血清中ALR水平及其意义.
方法 利用ALR的酶联免疫方法检测不同肝病患者外周血清中ALR水平.
结果 所建立的ALR酶联免疫方法其最低检测到的ALR浓度为0.1μg/L,在10μg/L范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系，与TGF-α,EGF等其他促肝细胞增殖因子无任何交叉反应. 重型肝炎患者血清中ALR水平最高(2.14μg/L±2.10μg/L) ，急性肝炎次之(1.12μg/L±0.48μg/L)，两者均非常显著高于正常人(0.33μg/L±0.23μg/L), 慢性肝炎(0.45μg/L±0.16μg/L), 肝炎后肝硬变(0.57μg/L±0.36μg/L)，原发性肝癌(0.35μg/L±0.14μg/L) 和肝外疾病(0.31μg/L±0.21μg/L)患者(P<0.05和P<0.01)；慢性肝炎和肝炎后肝硬变患者血清中ALR水平亦明显高于正常人(P<0.05)；原发性肝癌和肝外疾病患者血清ALR水平与正常人无明显差异(P>0.05).
, 百拇医药
结论 ALR酶联免疫检测方法对于不同肝病患者血清中ALR的检测具有良好的特异性和敏感性；肝病患者血清ALR的增多可能与肝损害及肝脏的再生有密切关系.
0 引言
重型病毒性肝炎患者外周血具有强烈刺激原代肝细胞DNA合成的作用，其机制主要是肝损伤后肝增殖刺激因子的产生增多[1]. 目前已报道肝损伤后外周血促进肝增殖的肝细胞生长因子(HGF)[2]，转化生长因子-α(TGF-α)[3]等明显增多，并与病情的转归有一定的关联. 最近，我们报道了一种新的肝增殖刺激因子-肝再生增强因子(Augmenter of liver regeneration， ALR)，它在性质上与肝刺激物(HSS)相似，在体内外均可强烈刺激肝细胞DNA合成[4]，并具有抗肝损伤和救治中毒性肝衰竭动物的作用[5,6]，因而是一种重要的肝再生调控因子. 我们建立了ALR的酶联免疫检测方法，检测不同类型肝病患者外周血ALR水平，并探讨了可能的意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 大白鼠为军事医学科学院实验动物中心提供，96孔酶联板购自Coster公司. 辣根过氧化物酶标记鼠抗兔IgG及其显色系统购自中山生物公司. 重组人转化生长因子和重组表皮生长因子(EGF)购自Promega公司. 选择及血清标本的准备非重型肝炎为1997-01～06间空军总医院传染科收治的，重型肝炎为第三军医大学西南医院传染科同期收治的. 诊断符合1995-05第五次全国传染病和寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎防治方案标准. 所有患者均早晨空腹取血，4℃过夜，1200g离心10min，取血清置-20℃保存待检测.
1.2 方法
1.2.1 抗ALR多克隆抗体的制备 自行构建的人ALR工程菌经发酵，纯化，获纯度>95%的人ALR[7]，进而以多点皮下注射法免疫家兔，4wk后加强1次，10d后经耳静脉取血检测抗体效价，免疫扩散法效价为1∶250，并成功应用于ALR的蛋白印迹检测. 活杀动物后取全血，4℃过夜，500g离心20min，分装血清保存于-20℃.
, 百拇医药
1.2.2 ALR水平的检测 血清ALR水平检测按标准ELISA法进行. 主要步骤：以包被液1∶1稀释检测血清200μL后，4℃包被96孔酶联板过夜，洗涤3次，一抗为1∶200稀释的自制ALR抗血清，二抗为辣根过氧化物酶标记的鼠抗兔IgG. 同时以不同浓度人ALR包被，并进行检测以获取标准曲线.
统计学处理 采用t检验.
2 结果
2.1 酶联免疫检测方法的建立 纯化ALR检测的标准曲线表明建立的酶联免疫检测方法最低可检测到ALR的浓度为0.1μg/L，在10μg/L范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系(图1). 建立的酶联免疫检测方法有较好的特异性，与可能存在于病毒性肝炎患者血清中的细胞因子如：TGF-α，EGF无交叉反应.
2.2 肝病患者外周血ALR水平 共检测不同类型肝病患者87例，其中急性肝炎18例，慢性肝炎23例，肝硬变9例，原发性肝癌5例，重型肝炎32例，其中急重肝11例，亚重肝3例，慢重肝18例，急性肝炎患者较正常人高3.36倍(P<0.01)，慢性肝炎和肝硬变患者ALR水平亦较正常人增高(P<0.05)，重型肝炎患者ALR水平平均为2.14μg/L，高于正常人6.43倍，较急性肝炎患者也高1.91倍，重型肝炎中以亚重肝患者ALR水平最高，急重肝次之，慢重肝最低. 原发性肝癌和肝外疾病患者ALR水平较正常人无明显增高(P>0.05)，但两者明显低于各型肝炎患者水平(P<0.05或P<0.01)，表1).
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图1 ALR检测的标准曲线
表1 不同肝病患者外周血ALR水平
临床类型
n
ALR含量(
±s,μg/L)正常对照组
24
0.33±0.24
急性肝炎
18
1.12±0.48bdef
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慢性肝炎
23
0.45±0.16a
肝炎后肝硬变
9
0.57±0.36a
原发性肝癌
5
0.35±0.14
重型肝炎
32
2.14±2.10bdef
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(急重肝)
11
2.37±2.26bdf
(亚重肝)
3
4.83±2.35
(慢重肝)
18
1.54±2.16bcf*^
肝外疾病
28
0.31±0.21
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aP<0.05，bP<0.01， vs 对照组；cP<0.05，dP<0.01， vs 慢性肝炎；eP<0.05，vs 肝硬变；fP<0.01， vs 肝外疾病.
3 讨论
人肝再生增强因子是一种新发现的重要的肝增殖刺激因子，它在肝损伤后修复中可能起重要作用，因此，建立一种快速、灵敏的检测方法具有重要的意义. 以往通常用原代培养肝细胞或肝癌细胞株进行活性检测，这大约需3d～4d的时间，因而难为临床应用. 新近，我们建立了一种检测ALR水平的酶联免疫方法，其最低可检测到ALR的浓度为0.1μg/L，在10μg/L范围内抗体与ALR的反应呈良好的线性关系. 与TGF-α，EGF等其他促肝细胞增殖因子无任何交叉反应. 通过对检测不同类型肝脏疾病患者和肝外疾病患者外周血ALR水平发现，肝病患者外周血中ALR水平均有不同程度的增高，而肝外疾病均在正常范围之内，说明本方法具有良好的敏感性和特异性. 检测血清ALR水平可能有助于肝脏疾病的临床诊断及鉴别诊断.
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病毒性肝炎特别是重型肝炎患者外周血促肝细胞增殖活性增高已多有报道，一般认为这与肝损伤时促肝增殖因子的代偿性增多有关. 已知的是肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子(TGF-α)，它们的增高与肝损伤的程度及患者的预后存在一定的关联；依据目前我们的检测结果，病毒性肝炎患者外周血ALR水平较正常人增高，特别是重型肝炎较正常人增高6.43倍，较普通肝炎患者增高大约2～5倍，类似Tomiya et al关于HGF和TGF-α的观察[3]. 这很可能与严重肝损伤时肝内外器官产生的ALR增多，而肝脏对ALR的代谢减少有关，我们已观察到大鼠2/3肝部分切除后肝组织ALR mRNA表达增高，同时肝外脏器如脾、肾等ALR的表达也明显增多[8]，提示这种代偿性的产生增多可能与肝再生有密切的关系.
人们一直期望利用某种肝增殖刺激因子来治疗严重肝脏疾病，但肝增殖刺激因子是否会促进或引起肝细胞发生癌变，一直是人们极为关心和亟待解决的问题. Nakayama et al[9,10]动物实验研究中发现，在大鼠暴发性肝炎和肝细胞癌变的肝脏组织中HGF阳性细胞和HGF-mRNA水平明显增多和增高，肝细胞癌基因c-met mRNA的表达也明显增强，提示HGF和HGF-c-met系统在肝细胞再生和肝细胞癌变过程中可能起着重要作用. 但另有研究报道，小剂量HGF对人肝癌细胞株无明显刺激作用，但较高浓度时却能明显抑制人肝癌细胞株的生长[11]. ALR是一种新型肝增殖刺激因子，在体外我们利用ALR直接刺激HTC肝癌细胞增殖，发现ALR对HTC肝癌细胞有明显的刺激作用[12]，我们检测了5例原发性肝癌患者外周血中ALR水平，显著低于其他肝病患者，而与正常人无明显差异. 由于目前有关研究报道较少，肝增殖刺激因子与肝细胞癌变的关系尚不清楚， 尚有待今后进一步研究[13].
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4 参考文献
1 杨晓明. 重型病毒性肝炎患者血清肝细胞生长促进物质活性的检测及临床意义. 临床肝胆病杂志，1993；9(2)：79-80
2 Hillan KJ, Logan MC, Ferrier RK. Hepatocye proliferation and serum hepatocyte growth factor levels in patients with alcoholic hepatitis. J Hepatol, 1996;24(4):385-390
3 Tomiya T, Fujiwara K. Liver regeneration in fulminant hepatitis as evaluated by serum transformung growth factor alpha levels. Hepatology, 1996;23(2):253-257
, 百拇医药
4 杨晓明，邱兆华，谢玲，贺福初，吴祖泽. 新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究. 中国科学， 1997；40(6)：462-467
5 杨晓明，王爱民，周平，王清明，吴祖泽，贺福初. 重组人肝再生增强因子抗肝损伤作用. 中华医学杂志，1997；77(11)：855-857
6 谢玲，杨晓明，吴祖泽，贺福初. 肝再生增强因子救治实验性肝衰竭动物的实验研究. 中国应用生理杂志，1996；12(4)：324-326
7 杨晓明，谢玲，魏汉东，吴祖泽，贺福初. 肝再生增强因子在大肠杆菌中的高效表达及生物活性研究. 生物物理与生物化学学报，1997；29(4)：414-418
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