烧伤后CD11b/CD18介导的中性多形核白细胞粘附对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响
作者：方勇 陈玉林 葛绳德 刘世康 朱世辉
单位：200433 上海，第二军医大学附属长海医院烧伤科
关键词：烧伤；中性白细胞；粘附分子；内皮；血管通透性
中华医学杂志/981007 【摘要】 目的 观察烧伤后中性多形核白细胞(PMN)对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，以及PMN粘附及其粘附分子CD11b/CD18在该影响中的介导作用。方法 用培养血管内皮细胞单层模型，建立培养肺微血管内皮细胞(PMEC)单层通透性测定的方法, 根据处理内皮细胞单层的不同成份, 将实验分为7组，用含荧光素异硫氰酸酯-白蛋白的灌流液灌流后, 测定液体滤过系数(kf)和渗透压反射系数(δ) 。结果 烧伤后PMN能使反映小分子物质通透性的kf值明显增加，使渗透压反射系数(δ)显著下降。用单抗封闭PMN膜上CD11b/CD18能使δ值的变化得到纠正；用孔径0.2 μm的滤膜阻断PMN与内皮细胞单层的粘附则使kf值和δ值均接近正常水平。结论 白细胞与内皮细胞的粘附是介质类物质发生作用的前提条件，这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。粘附分子CD11b/CD18本身可能具有着生物学信号调控的作用,并介导着对肺血管内皮细胞大分子物质通透性的影响。
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The effect of PMN adhesion mediated by CD11b/CD18 on the increasing permeability of microvascular endothelial monolayer after severe burn injury
Fang Yong, Chen Yulin, Ge Shengde, et al. Burns Center, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To detect the effect of burn-activated PMN adhesion and its adhesion molecule CD11b/CD18 on microvascular endothelial permeability using an experimental model of endothelial monolayer on polycarbonate microporous filters.Methods An experimental model for in vitro study of endothelal monolayer for permeability analysis was established. Seven groups were divided into according to the treatment of microvascular endothelial monolayer. Fluid filtration coeffecient(Kf) and albumin reflection coeffecient(δ) were measured after endothelial monolayer was perfused with albumin labelled by FITC. Results Burn-activated PMN could increase the level of fluid filtration coeffecient(Kf) and decrease the albumin reflection coeffecient(δ). Monoclonal antibody sealing off CD11b/CD18 on PMN provented the change of δ induced by burn-activated PMN. Another microporous filter interposed between PMNs and endothelial monolayer corrected the changes of Kf and δ. Conclusion The permeability enhancing effect of PMNs may be attributed mainly to the PMN-EC adhesion mediated by CD11b/CD18. Blocking the PMN-EC over-adhesion in moderation may be helpful in reducing the lung injury due to severe burn injury.
, 百拇医药
【Key words】 Burns Polymorphonuolear leukocytes Adhesion molecule Endothelial Vascular permeability
(Natl Med J China, 1998, 78：746-748)
严重烧伤后早期，许多脏器组织内均有大量的中性粒细胞粘附扣留的现象[1]。既往我们的研究表明，烧伤后中性多形核白细胞(PMN)的粘附依赖于PMN膜上粘附分子表达的增加, 其中CD11b/CD18是介导烧伤后PMN与肺血管内皮细胞粘附的主要的粘附分子[2]。烧伤后激活的PMN可通过释放介质类物质，如氧自由基、蛋白酶和细胞因子等直接损伤内皮细胞使微血管通透性增加[3]。作者在内皮细胞单层实验模型的基础上，观察了烧伤后PMN对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，并分析了PMN粘附及其粘附分子CD11b/CD18在该影响中的介导作用及机理。
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材料和方法
一、材料
1.Wistar大鼠，60只，雄性，体重220～250 g，纯种，由中国科学院上海分院动物研究所提供， 用于肺微血管内皮细胞的培养和PMN的分离。
2.主要试剂和器材：明胶(Sigma公司)；DMEM(Gibco公司)；荧光素异硫氰酸酯白蛋白(Sigma公司， 华美生物工程公司分装)；小牛血清(杭州四季青生物工程公司)；Dextran T500(Pharmacia公司)；Percoll细胞分离液(Pharmacia公司) ; 胰蛋白酶(Sigma公司)；混合纤维素微孔滤膜(直径13 cm，孔径0.8 μm)；混合纤维素微孔滤膜(直径25 mm，孔径0.2 μm)；针头式滤器(上海医药工业研究院)；荧光分光光度计(日立850型，第二军医大学中心实验室)。
二、方法
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1.实验分组：实验分为7组，每组6只。
A组(正常对照组)：滤膜用DMEM细胞培养液孵育1小时。
B组(正常PMN组)：滤膜用正常大鼠外周血PMN孵育1小时, 用percoll分离正常大鼠外周血PMN，用DMEM培养液配成106/ml浓度，与滤膜孵育1小时(每张滤膜上PMN约为106)。
C组(烧伤PMN组)：滤膜用烧伤大鼠外周血PMN孵育1小时, 从烧伤大鼠(30%总面积Ⅲ度，伤后6小时)外周血分离PMN，余同B组。
D组(正常PMN组+Mab)：正常大鼠PMN，加单抗OX42 (20 μl/107 PMN)(小鼠抗大鼠CD11b/CD18)与滤膜一起孵育1小时。
E组(烧伤PMN组+Mab)：烧伤大鼠PMN，加单抗OX42 (20 μl/107 PMN)(小鼠抗大鼠CD11b/CD18)与滤膜一起孵育1小时。
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F组(正常PMN组+滤膜)：内皮细胞单层在加入PMN悬液前，先在上方另覆盖孔径为0.2 μm的滤膜，使PMN与内皮细胞不能直接接触。余同B组。
G组(烧伤PMN组+滤膜)：内皮细胞单层在加入PMN悬液前，先在上方另覆盖孔径为0.2 μm的滤膜，使PMN与内皮细胞不能直接接触。余同C组。
2.大鼠外周血PMN的分离，按严鸣等[4]的方法。
3.肺微血管内皮细胞单层的培养：按陈思峰等的方法[5]行大鼠肺微血管内皮细胞(PMEC)培养。混合纤维素酯微孔滤膜按Postlewaite法[6]预处理后，将培养第2代的PMEC用0.125%胰酶消化，按105/cm2的浓度接种到上述滤膜。接种后的细胞用DMEM培养1周以上，见滤膜周边细胞呈鹅卵石样改变，提示滤膜上的内皮细胞单层已呈致密融合。滤膜在使用前用0.05%考马亮斯蓝染色显微镜下进一步确定。
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4.内皮单层通透性的测定，参照文献[7]。
用荧光分光光度计测定收集液蛋白浓度(测定条件：激发光波长495 nm，发射光波长520 nm)。在该测定装置中蛋白质通过内皮单层主要是超滤作用引起的，内皮细胞单层对蛋白质的渗透压反射系数(δ)为：
δ＝1-CF/CP
CF和CP分别为收集液和灌流液的白蛋白浓度(以测定的荧光值F代表)，根据血管内外液体交换的Starling公式可以计算内皮单层的滤过系数(kf)：
Jv=kf(ΔP-δ△π)
Jv为收集液生成速度(ul.min-1cm2-)，ΔP是灌流液压力(kPa)，Δπ是细胞两侧的胶体渗透压差，在测得蛋白浓度的情况下，胶体渗透压可按Vant Hoff定律计算：π(kPa)＝C(mosm/L)×2.6(kPa.Lmosm)
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π是渗透压，C是蛋白质毫渗量浓度，2.6是换算系数。
内皮细胞单层滤膜与上述7组按不同要求的液体或PMN细胞悬液孵育1小时后用汉克斯平衡盐水漂洗2次，并轻轻揭去0.2 μm孔径的滤膜，装入针头过滤器。
5.统计学分析：所有数据均用
±s表示，作t检验。
结果
一、内皮细胞单层液体滤过分数(Kf)的变化
A组，kf值为29±7。C组为烧伤后PMN与内皮细胞单层孵育后，kf增加最为明显，较其它组均显著增高(P<0.01)。E组为烧伤后PMN用单抗封闭粘附分子CD11b/CD18后，kf值虽较C组略有下降，但并不显著，仍较A、B等组明显增高(附表)。
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二、内皮细胞单层渗透压反射系数(δ)的改变
渗透压反射系数(δ)越小，则内皮细胞单层对大分子的物质的通透性就越大。结果为：A组δ值为0.35±0.09；烧伤后PMN(C组)能使内皮细胞单层δ值明显下降，低达0.18±0.11，较其它任何组明显减少；烧伤后PMN如用单抗封闭粘附分子CD11b/CD18(E组)，δ值几乎接近正常水平(见附表)。
附表 各组液体滤过分数(kf)和渗透压反射系数
(δ)的变化(±s) 组别
例数
kf
δ
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正常对照组(A)
6
27±7
0.35±0.09
正常PMN组(B)组
6
26±7
0.39±0.08
烧伤PMN组(C)
6
121±22**
0.18±0.11**
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正常PMN+Mab(D)
6
30±7
0.30±0.11
烧伤PMN+Mab(E)
6
105±20**
0.30±0.08
正常PMN+滤膜(F)
6
30±7
0.34±0.15
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烧伤PMN+滤膜(G)
6
41±10*
0.37±0.13
* P<0.05，**P<0.01,与A组相比讨论
严重烧伤后外周血PMN粘附贴壁现象是PMN激活的表现之一。激活的PMN可通过释放介质类物质介导着对组织细胞的损伤。
本研究模型为加压灌流装置，根据收集液的流量和大分子物质的浓度可以计算液体和小分子物质的滤过系数(kf)以及大分子物质的渗透压反射系数(δ)。根据内皮细胞膜通透性的膜孔理论，kf值与膜孔半径的4次方成正比，是反映膜通透性最敏感的指标。本实验模型可以准确定量Starling方程式的各个参数，是研究内皮细胞通透性的较好的方法。
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本研究发现，正常PMN能使内皮细胞单层液体滤过分数(kf)减少，使渗透压反射系数(δ)略有增加，这种现象发生的机理尚不清楚，可能为正常PMN与PMEC粘附后，使肺血管对大小分子物质的有效通道面积减少。烧伤后PMN能使PMEC单层kf值增加，δ值减少。这说明烧伤后激活的PMN能使肺血管对小分子和大分子物质的通透性增高。烧伤后PMN的对δ值的影响，可以用单抗封闭PMN膜上粘附分子CD11b/CD18的方法得到明显缓解，几乎接近正常水平。此时，虽然kf值略有下降，但仍明显高于正常对照组水平。在该实验模型中，PMN加入CD11b/CD18单抗后，虽然由CD11b/CD18介导的PMN与PMEC单层的粘附明显减少，但并没有减少PMN与PMEC的直接接触，也不可能减少烧伤后PMN释放介质类物质的水平，这就提示CD11b/CD18可能介导了PMN对内皮细胞单层大分子物质通透性的影响，而PMN释放的介质类物质则可能介导了对小分子物质通透性的影响。
本实验结果显示，当用滤膜使烧伤后的PMN与PMEC粘附得到阻断时，kf值只是略有增加，δ值也接近正常水平。这又进一步说明烧伤后PMN对肺血管大分子物质和小分子物质通透性的影响有赖于双方的粘附。
, 百拇医药
Fujita H等[8]用显微荧光分光光度计测定了PMA激活的PMN对培养血管EC内H2O2含量的影响，结果发现，激活的PMN对血管内皮细胞(EC)的损伤作用依赖于PMN与EC间粘附分子介导的粘附，其机理有：(1) 激活的PMN释放的氧自由基半衰期短，必须通过粘附分子形成的特殊通道才能发挥对内皮细胞损伤的作用。(2) EC内 H2O2的增加依赖于PMN CD11/CD18对应受体ICAM-1的激活。(3) PMN与EC的粘附使EC对氧自由基的损伤敏感性增大。
许多学者仍认为，氧自由基、蛋白酶等物质是激活的PMN致血管内皮细胞损伤的病理基础。为此应更确切地认识到(1) PMN与EC的粘附可能是这些物质发生作用的前提条件，而且这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。(2) 粘附分子CD11b/CD18本身可能具有着生物学信号调控的作用，并介导着对PMEC大分子物质通透性的影响，本实验尚缺乏直接证据，有待于进一步研究。
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参考文献
1 Zapata-Sirvent RL, Tenenhaus M, Hansbrough JF, et al. Effects of high-doze Vitamin C administration on bacterial translocation and lung neutrophil sequestration in burned mice. J Burn Care Rehabil, 1995, 16：422-428.
2 方勇，陈玉林，葛绳德等.烧伤后PMN CD11b/CD18的表达及其在细胞粘附中的介导作用.第二军医大学学报，1996，8(增刊)：54-57.
3 Botha AJ, Moore FA, Moore EE, et al. Postinjury neutrophil priming and activation: An early vulnerable window. Srugery, 1995, 118：358-365.
, 百拇医药
4 严鸣，龚肖崎，张亚霏.大鼠中性粒细胞的分离及糖皮质激素受体阻断率的测定.第二军医大学学报，1994，15：85-86.
5 陈思峰.一种可避免化学和机械损伤的简便的分离微血管内皮细胞的新方法.中国病理生理杂志，1992，8：556.
6 Postlewaite AE, Snyderman R, Kang AH, et al. The chemotactic attraction of human fibroblasts to a lymphocyte-derived factor. J Exp Med, 1976, 144：1188-1203.
7 Cooper JA, Del Vecchio PJ, Minnear FL, et al. Measurement of albumin permeability across endothelial monolayer in vitro. J Appl Physiol, 1987, 62：1076-1083.
8 Fujita H, Morita I, Murota S. A possible mechanism for vascular endothelial cell injury elicited by activated leukocytes. A significant involvement of adhesion molecules CD11/CD18 and ICAM-1. Arch Bioche Biophy, 1994, 309：62-69.
(收稿：1997-11-03 修回：1998-05-30), http://www.100md.com
单位：200433 上海，第二军医大学附属长海医院烧伤科
关键词：烧伤；中性白细胞；粘附分子；内皮；血管通透性
中华医学杂志/981007 【摘要】 目的 观察烧伤后中性多形核白细胞(PMN)对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，以及PMN粘附及其粘附分子CD11b/CD18在该影响中的介导作用。方法 用培养血管内皮细胞单层模型，建立培养肺微血管内皮细胞(PMEC)单层通透性测定的方法, 根据处理内皮细胞单层的不同成份, 将实验分为7组，用含荧光素异硫氰酸酯-白蛋白的灌流液灌流后, 测定液体滤过系数(kf)和渗透压反射系数(δ) 。结果 烧伤后PMN能使反映小分子物质通透性的kf值明显增加，使渗透压反射系数(δ)显著下降。用单抗封闭PMN膜上CD11b/CD18能使δ值的变化得到纠正；用孔径0.2 μm的滤膜阻断PMN与内皮细胞单层的粘附则使kf值和δ值均接近正常水平。结论 白细胞与内皮细胞的粘附是介质类物质发生作用的前提条件，这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。粘附分子CD11b/CD18本身可能具有着生物学信号调控的作用,并介导着对肺血管内皮细胞大分子物质通透性的影响。
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The effect of PMN adhesion mediated by CD11b/CD18 on the increasing permeability of microvascular endothelial monolayer after severe burn injury
Fang Yong, Chen Yulin, Ge Shengde, et al. Burns Center, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To detect the effect of burn-activated PMN adhesion and its adhesion molecule CD11b/CD18 on microvascular endothelial permeability using an experimental model of endothelial monolayer on polycarbonate microporous filters.Methods An experimental model for in vitro study of endothelal monolayer for permeability analysis was established. Seven groups were divided into according to the treatment of microvascular endothelial monolayer. Fluid filtration coeffecient(Kf) and albumin reflection coeffecient(δ) were measured after endothelial monolayer was perfused with albumin labelled by FITC. Results Burn-activated PMN could increase the level of fluid filtration coeffecient(Kf) and decrease the albumin reflection coeffecient(δ). Monoclonal antibody sealing off CD11b/CD18 on PMN provented the change of δ induced by burn-activated PMN. Another microporous filter interposed between PMNs and endothelial monolayer corrected the changes of Kf and δ. Conclusion The permeability enhancing effect of PMNs may be attributed mainly to the PMN-EC adhesion mediated by CD11b/CD18. Blocking the PMN-EC over-adhesion in moderation may be helpful in reducing the lung injury due to severe burn injury.
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【Key words】 Burns Polymorphonuolear leukocytes Adhesion molecule Endothelial Vascular permeability
(Natl Med J China, 1998, 78：746-748)
严重烧伤后早期，许多脏器组织内均有大量的中性粒细胞粘附扣留的现象[1]。既往我们的研究表明，烧伤后中性多形核白细胞(PMN)的粘附依赖于PMN膜上粘附分子表达的增加, 其中CD11b/CD18是介导烧伤后PMN与肺血管内皮细胞粘附的主要的粘附分子[2]。烧伤后激活的PMN可通过释放介质类物质，如氧自由基、蛋白酶和细胞因子等直接损伤内皮细胞使微血管通透性增加[3]。作者在内皮细胞单层实验模型的基础上，观察了烧伤后PMN对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响，并分析了PMN粘附及其粘附分子CD11b/CD18在该影响中的介导作用及机理。
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材料和方法
一、材料
1.Wistar大鼠，60只，雄性，体重220～250 g，纯种，由中国科学院上海分院动物研究所提供， 用于肺微血管内皮细胞的培养和PMN的分离。
2.主要试剂和器材：明胶(Sigma公司)；DMEM(Gibco公司)；荧光素异硫氰酸酯白蛋白(Sigma公司， 华美生物工程公司分装)；小牛血清(杭州四季青生物工程公司)；Dextran T500(Pharmacia公司)；Percoll细胞分离液(Pharmacia公司) ; 胰蛋白酶(Sigma公司)；混合纤维素微孔滤膜(直径13 cm，孔径0.8 μm)；混合纤维素微孔滤膜(直径25 mm，孔径0.2 μm)；针头式滤器(上海医药工业研究院)；荧光分光光度计(日立850型，第二军医大学中心实验室)。
二、方法
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1.实验分组：实验分为7组，每组6只。
A组(正常对照组)：滤膜用DMEM细胞培养液孵育1小时。
B组(正常PMN组)：滤膜用正常大鼠外周血PMN孵育1小时, 用percoll分离正常大鼠外周血PMN，用DMEM培养液配成106/ml浓度，与滤膜孵育1小时(每张滤膜上PMN约为106)。
C组(烧伤PMN组)：滤膜用烧伤大鼠外周血PMN孵育1小时, 从烧伤大鼠(30%总面积Ⅲ度，伤后6小时)外周血分离PMN，余同B组。
D组(正常PMN组+Mab)：正常大鼠PMN，加单抗OX42 (20 μl/107 PMN)(小鼠抗大鼠CD11b/CD18)与滤膜一起孵育1小时。
E组(烧伤PMN组+Mab)：烧伤大鼠PMN，加单抗OX42 (20 μl/107 PMN)(小鼠抗大鼠CD11b/CD18)与滤膜一起孵育1小时。
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F组(正常PMN组+滤膜)：内皮细胞单层在加入PMN悬液前，先在上方另覆盖孔径为0.2 μm的滤膜，使PMN与内皮细胞不能直接接触。余同B组。
G组(烧伤PMN组+滤膜)：内皮细胞单层在加入PMN悬液前，先在上方另覆盖孔径为0.2 μm的滤膜，使PMN与内皮细胞不能直接接触。余同C组。
2.大鼠外周血PMN的分离，按严鸣等[4]的方法。
3.肺微血管内皮细胞单层的培养：按陈思峰等的方法[5]行大鼠肺微血管内皮细胞(PMEC)培养。混合纤维素酯微孔滤膜按Postlewaite法[6]预处理后，将培养第2代的PMEC用0.125%胰酶消化，按105/cm2的浓度接种到上述滤膜。接种后的细胞用DMEM培养1周以上，见滤膜周边细胞呈鹅卵石样改变，提示滤膜上的内皮细胞单层已呈致密融合。滤膜在使用前用0.05%考马亮斯蓝染色显微镜下进一步确定。
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4.内皮单层通透性的测定，参照文献[7]。
用荧光分光光度计测定收集液蛋白浓度(测定条件：激发光波长495 nm，发射光波长520 nm)。在该测定装置中蛋白质通过内皮单层主要是超滤作用引起的，内皮细胞单层对蛋白质的渗透压反射系数(δ)为：
δ＝1-CF/CP
CF和CP分别为收集液和灌流液的白蛋白浓度(以测定的荧光值F代表)，根据血管内外液体交换的Starling公式可以计算内皮单层的滤过系数(kf)：
Jv=kf(ΔP-δ△π)
Jv为收集液生成速度(ul.min-1cm2-)，ΔP是灌流液压力(kPa)，Δπ是细胞两侧的胶体渗透压差，在测得蛋白浓度的情况下，胶体渗透压可按Vant Hoff定律计算：π(kPa)＝C(mosm/L)×2.6(kPa.Lmosm)
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π是渗透压，C是蛋白质毫渗量浓度，2.6是换算系数。
内皮细胞单层滤膜与上述7组按不同要求的液体或PMN细胞悬液孵育1小时后用汉克斯平衡盐水漂洗2次，并轻轻揭去0.2 μm孔径的滤膜，装入针头过滤器。
5.统计学分析：所有数据均用
±s表示，作t检验。结果
一、内皮细胞单层液体滤过分数(Kf)的变化
A组，kf值为29±7。C组为烧伤后PMN与内皮细胞单层孵育后，kf增加最为明显，较其它组均显著增高(P<0.01)。E组为烧伤后PMN用单抗封闭粘附分子CD11b/CD18后，kf值虽较C组略有下降，但并不显著，仍较A、B等组明显增高(附表)。
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二、内皮细胞单层渗透压反射系数(δ)的改变
渗透压反射系数(δ)越小，则内皮细胞单层对大分子的物质的通透性就越大。结果为：A组δ值为0.35±0.09；烧伤后PMN(C组)能使内皮细胞单层δ值明显下降，低达0.18±0.11，较其它任何组明显减少；烧伤后PMN如用单抗封闭粘附分子CD11b/CD18(E组)，δ值几乎接近正常水平(见附表)。
附表 各组液体滤过分数(kf)和渗透压反射系数
(δ)的变化(
±s) 组别例数
kf
δ
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正常对照组(A)
6
27±7
0.35±0.09
正常PMN组(B)组
6
26±7
0.39±0.08
烧伤PMN组(C)
6
121±22**
0.18±0.11**
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正常PMN+Mab(D)
6
30±7
0.30±0.11
烧伤PMN+Mab(E)
6
105±20**
0.30±0.08
正常PMN+滤膜(F)
6
30±7
0.34±0.15
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烧伤PMN+滤膜(G)
6
41±10*
0.37±0.13
* P<0.05，**P<0.01,与A组相比讨论
严重烧伤后外周血PMN粘附贴壁现象是PMN激活的表现之一。激活的PMN可通过释放介质类物质介导着对组织细胞的损伤。
本研究模型为加压灌流装置，根据收集液的流量和大分子物质的浓度可以计算液体和小分子物质的滤过系数(kf)以及大分子物质的渗透压反射系数(δ)。根据内皮细胞膜通透性的膜孔理论，kf值与膜孔半径的4次方成正比，是反映膜通透性最敏感的指标。本实验模型可以准确定量Starling方程式的各个参数，是研究内皮细胞通透性的较好的方法。
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本研究发现，正常PMN能使内皮细胞单层液体滤过分数(kf)减少，使渗透压反射系数(δ)略有增加，这种现象发生的机理尚不清楚，可能为正常PMN与PMEC粘附后，使肺血管对大小分子物质的有效通道面积减少。烧伤后PMN能使PMEC单层kf值增加，δ值减少。这说明烧伤后激活的PMN能使肺血管对小分子和大分子物质的通透性增高。烧伤后PMN的对δ值的影响，可以用单抗封闭PMN膜上粘附分子CD11b/CD18的方法得到明显缓解，几乎接近正常水平。此时，虽然kf值略有下降，但仍明显高于正常对照组水平。在该实验模型中，PMN加入CD11b/CD18单抗后，虽然由CD11b/CD18介导的PMN与PMEC单层的粘附明显减少，但并没有减少PMN与PMEC的直接接触，也不可能减少烧伤后PMN释放介质类物质的水平，这就提示CD11b/CD18可能介导了PMN对内皮细胞单层大分子物质通透性的影响，而PMN释放的介质类物质则可能介导了对小分子物质通透性的影响。
本实验结果显示，当用滤膜使烧伤后的PMN与PMEC粘附得到阻断时，kf值只是略有增加，δ值也接近正常水平。这又进一步说明烧伤后PMN对肺血管大分子物质和小分子物质通透性的影响有赖于双方的粘附。
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Fujita H等[8]用显微荧光分光光度计测定了PMA激活的PMN对培养血管EC内H2O2含量的影响，结果发现，激活的PMN对血管内皮细胞(EC)的损伤作用依赖于PMN与EC间粘附分子介导的粘附，其机理有：(1) 激活的PMN释放的氧自由基半衰期短，必须通过粘附分子形成的特殊通道才能发挥对内皮细胞损伤的作用。(2) EC内 H2O2的增加依赖于PMN CD11/CD18对应受体ICAM-1的激活。(3) PMN与EC的粘附使EC对氧自由基的损伤敏感性增大。
许多学者仍认为，氧自由基、蛋白酶等物质是激活的PMN致血管内皮细胞损伤的病理基础。为此应更确切地认识到(1) PMN与EC的粘附可能是这些物质发生作用的前提条件，而且这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性。(2) 粘附分子CD11b/CD18本身可能具有着生物学信号调控的作用，并介导着对PMEC大分子物质通透性的影响，本实验尚缺乏直接证据，有待于进一步研究。
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参考文献
1 Zapata-Sirvent RL, Tenenhaus M, Hansbrough JF, et al. Effects of high-doze Vitamin C administration on bacterial translocation and lung neutrophil sequestration in burned mice. J Burn Care Rehabil, 1995, 16：422-428.
2 方勇，陈玉林，葛绳德等.烧伤后PMN CD11b/CD18的表达及其在细胞粘附中的介导作用.第二军医大学学报，1996，8(增刊)：54-57.
3 Botha AJ, Moore FA, Moore EE, et al. Postinjury neutrophil priming and activation: An early vulnerable window. Srugery, 1995, 118：358-365.
, 百拇医药
4 严鸣，龚肖崎，张亚霏.大鼠中性粒细胞的分离及糖皮质激素受体阻断率的测定.第二军医大学学报，1994，15：85-86.
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(收稿：1997-11-03 修回：1998-05-30), http://www.100md.com