PCR检测中防污染之我见
作者：刘 婷 韩亚平 李 军
单位：江苏省人民医院(南京 210029)
关键词：
右江民族医学院学报/990181 近年来，多聚酶链反应(PCR)技术已广泛应用于基础和临床医学的各个领域。本室自1991年开展PCR检测工作以来，先后检测了HBV-DNA13500人份，HCV-RNA4200人份，HGV-RNA570人份，合格率均达到95%以上。
实践证明，防止检测过程中的污染，是保证PCR检测质量的一个关键因素。在检测中，因防污染一着之失而使整个检测功败垂成之事屡见不鲜，检验结果或呈假阴性或呈假阳性，不得不重新检测。
PCR检测过程中污染之发生，原因甚多，诸如操作环境净度不够，操作仪器和实验用具消毒不严，标本收集不符合要求等，已为人所共知。然而，操作中某些习惯性失误，因属“细枝末
节”，则易为操作者所忽视，而污染往往隐藏其间。实践证明，要从根本上杜绝污染，必须严格把握操作过程中每一个环节，尽最大努力，消除潜藏于“细枝末节”中的隐患。
1 离心机的离心孔，有时会成为被清洗的“遗忘的角落”
在离心过程中，如果试管管盖密封不好，管内的液体可能会溅出来，污染离心孔，如不及时清洗，就会造成标本间的相互污染。为此，实验完毕，离心孔需用1∶2000“84”消毒液擦洗，并用紫外线照射8h以上。
2 在检测中自始至终只戴一付乳胶手套，是某些操作者的习惯，而污染就常常产生在这种不经意的习惯之中
一付手套，一以贯之，很容易将上一操作阶段的扩增产物带到下一阶段，造成污染，导致扩增失败。因此，改变上述习惯，在检测的不同阶段及时更换手套，乃是消除污染的明智之举。
3 反应管盖经常开启，也是引发污染的一个媒介
以丙肝为例，在操作过程中，反应管盖前后要开启7次之多，在一开一关之间，极易造成污染。鉴于此，开启反应管盖宜用专门的“小板手”或“消毒卫生纸包裹管盖开启，以免反复开启污染手套，或标本溅出而造成标本间的相互污染。
4 在通常情况下，试验过程中的防污，常为操作者所重视，而试验结束后的防污，则易被忽视
特别是试验后的剩余PCR产物被随意弃置的现象，更属司空见惯，结果造成环境污染，乃为常事。就PCR检测而言，为保证防污首尾一贯，善始善终，电泳后剩余的PCR产物，务须及时处理，切忌混入其它操作环境。
综上所述，造成PCR过程污染的因素虽多，但只要严格操作规程，抓好每一个操作环节，特别注意消除某些习惯性的疏忽，防患于未然，就能将污染的可能性降低到最低限度。
(1998-05-22收稿)
, 百拇医药
单位：江苏省人民医院(南京 210029)
关键词：
右江民族医学院学报/990181 近年来，多聚酶链反应(PCR)技术已广泛应用于基础和临床医学的各个领域。本室自1991年开展PCR检测工作以来，先后检测了HBV-DNA13500人份，HCV-RNA4200人份，HGV-RNA570人份，合格率均达到95%以上。
实践证明，防止检测过程中的污染，是保证PCR检测质量的一个关键因素。在检测中，因防污染一着之失而使整个检测功败垂成之事屡见不鲜，检验结果或呈假阴性或呈假阳性，不得不重新检测。
PCR检测过程中污染之发生，原因甚多，诸如操作环境净度不够，操作仪器和实验用具消毒不严，标本收集不符合要求等，已为人所共知。然而，操作中某些习惯性失误，因属“细枝末
节”，则易为操作者所忽视，而污染往往隐藏其间。实践证明，要从根本上杜绝污染，必须严格把握操作过程中每一个环节，尽最大努力，消除潜藏于“细枝末节”中的隐患。
1 离心机的离心孔，有时会成为被清洗的“遗忘的角落”
在离心过程中，如果试管管盖密封不好，管内的液体可能会溅出来，污染离心孔，如不及时清洗，就会造成标本间的相互污染。为此，实验完毕，离心孔需用1∶2000“84”消毒液擦洗，并用紫外线照射8h以上。
2 在检测中自始至终只戴一付乳胶手套，是某些操作者的习惯，而污染就常常产生在这种不经意的习惯之中
一付手套，一以贯之，很容易将上一操作阶段的扩增产物带到下一阶段，造成污染，导致扩增失败。因此，改变上述习惯，在检测的不同阶段及时更换手套，乃是消除污染的明智之举。
3 反应管盖经常开启，也是引发污染的一个媒介
以丙肝为例，在操作过程中，反应管盖前后要开启7次之多，在一开一关之间，极易造成污染。鉴于此，开启反应管盖宜用专门的“小板手”或“消毒卫生纸包裹管盖开启，以免反复开启污染手套，或标本溅出而造成标本间的相互污染。
4 在通常情况下，试验过程中的防污，常为操作者所重视，而试验结束后的防污，则易被忽视
特别是试验后的剩余PCR产物被随意弃置的现象，更属司空见惯，结果造成环境污染，乃为常事。就PCR检测而言，为保证防污首尾一贯，善始善终，电泳后剩余的PCR产物，务须及时处理，切忌混入其它操作环境。
综上所述，造成PCR过程污染的因素虽多，但只要严格操作规程，抓好每一个操作环节，特别注意消除某些习惯性的疏忽，防患于未然，就能将污染的可能性降低到最低限度。
(1998-05-22收稿)
, 百拇医药