血清尿酸的毛细管电泳测定
作者：周小棉 林文 邹晓
单位：第一军医大学南方医院检验科，广州，510515
关键词：尿酸；毛细管电泳
第一军医大学学报990123 摘要：目的 用毛细管电泳中的胶束动电法直接测定血清尿酸浓度。方法 以SDS作为电泳缓冲液中和胶束相，采用非涂渍毛细管21 cm×50 μm (i.d.)，检测波长235 nm，以外标法定量。结果 尿酸测定的线性范围为46.5～1 500 μmol/L，最低检测限为20.31 μmol/L；本法的日内和日间变异系数均小于4.5%；平均回收率为101.45%。内生性化合物和临床某些常用药物对此方法无干扰。结论 该法线性范围宽，简单、快速，可应用于临床样品检测。
中图分类号：R446.12
Determination of serum uric acid using capillary electrophoresis
, http://www.100md.com
Zhou Xiaomian, Lin Wen, Zou Xiao
Department of Medical Laboratory, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515
Abstract: Objective To develop a new method for determining serum uric acid using capillary electrophoresis (CE). Methods The capillary electrophoresis was performed to use 120 mmol/L SDS, 30 mmol/L phosphate buffer pH7.2, uncoated fused-silica capillary (21 cm×50μm i.d.) at the voltage of 10 kV at the detection of 235μm, running time for 6 min , automatic injection by pressure. Results The linear concentration of uric acid was 46.5～1500 μmol/L. The average recovery of uric acid at different levels was found to be 101.45% (n=3). The precision studied for both within–day-assay and between-day-assay produced CV values of less than 4.5%. Endogenous compounds and commonly used drugs showed no interference with this chromatographic procedure. Conclusion CE method for determining serum uric acid was simple, rapid, excellent reproducibility for detection of clinical samples.
, 百拇医药
Key words: uric acid; capillary electrophoresis
血清尿酸测定已有化学法和高效液相色谱法[1]。由于毛细管电泳技术是继高效液相色谱技术之后的又一高效率分离检测技术，因此，该技术得到了迅速发展，其应用日趋广泛。1997年Tran等[2]利用内标法用毛细管电泳检测了血浆(清)尿酸浓度。最近，我们采用外标法建立了直接测定血清尿酸的胶束动电毛细管电泳方法。该方法简单、快速、稳定、重复性好、线性范围宽。现将实验报告如下。
1 材料和方法
1.1 仪器 BioFocus-3000全自动毛细管电泳分析仪(美国Bio-RAD公司产品)，具有二极管阵列的可见紫外多波长扫描系统。自动与手动数据处理系统。最大电压30 kV。非涂渍石英毛细管长度21 cm，内径50 μm，河北永年光导纤维厂产品。
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1.2 试剂 毛细管电泳缓冲液：pH 7.2、120 mmo1/L的SDS 、30 mmo1/L磷酸盐缓冲液；SDS (Bio-RAD公司产品)电泳纯级，其它试剂均匀分析纯。尿酸标准储备液：称30 mg碳酸锂(AR)，溶解在40 ml 蒸馏水中，加热60 ℃，使其完生溶解精确称取尿酸50.45 mg溶解于热碳酸锂溶液中，冷却至室温移入100 ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在棕色瓶中。此溶液浓度为3 000 μmol/L。尿酸标准应用液：取一定量的尿酸标准贮存液，用去离子水倍比稀释成如下系列浓度：1 500、750、375 、93.75、 46.875、 23.437 5 μmo1/L。
1.3 方法 取血清100 μl 左右放置于样本杯中。设置如下电泳条件：以pH 7.2、120 mmo1/L 的SDS、 30 mmol/L磷酸盐缓冲液作电泳运行液，紫外检测波长235 mm，电压 10 kV，自动压力进样2 s (2 psi sec, ipsi=6 894.76 Pa)，毛细管温度20 ℃。为了获得较好的重复性，每次运行之间用去离子水冲洗1 min，然后用1 mol/L NaOH冲洗2 min，再用缓冲液冲洗2 min。
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1.4 制定标准曲线 以峰面积与迁移时间之比为横坐标，以浓度为纵坐标，外标法定量。
2 结果
2.1 测定波长选择 配制一定浓度的尿酸溶液在岛津UV-3000分光光度计作光谱扫描，结果见图1，在近235 nm处尿酸有一吸收峰。
图1 尿酸光扫描图谱
Fig 1 Absorption spectrum of uric acid
2.2 电泳行为 在上述条件下，尿酸的电泳图见图2。尿酸的迁移时间(Migration time)为4.52 min。
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图2 尿酸电泳图谱
Fig 2 Electropgorogram of uric acid
2.3 标准曲线制作 用标准应用液进行电泳分析，以峰面积与迁移时间之比值为X轴，以尿酸浓度为Y轴, 结果尿酸在1 500～46.875 μmol/L范围内呈线性。
2.4 精密度测定 日内(n= 25)和日间(n= 5)精密度变异系数分别为3.78%和4.04%。
2.5 回收试验 于混合血清中加入高、中、低3个不同浓度的尿酸(700、300、100 μmol/L), 按前述方法操作，分别测定3次，其回收率为101.2%、99.3%、104.5%。
2.6 重复性试验 重复性测定按参考文献[3]，毛细管电泳重复性测定可用待测样本的迁移时间表示。尿酸在上述条件下其平均迁移时间为4.52 min(n= 25，CV <3.0%)。
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2.7 对比实验 取40份(含高、中、低尿酸浓度)血清，在Olympus AU-800全自动生化分析仪上用尿酸酶偶联过氧化物酶(λ=520 nm)法(元生生物科技股份有限公司)测定尿酸含量(X)，结果与毛细管电泳法(Y)测定结果对比，并进行线性回归分析，其回归方程为Y=0.954X + 1.243 (r= 0.962)。
2.8 最低检测限 以信噪比作为最低检测限, 尿酸为20.31 μmol/L。
2.9 干扰试验 上述条件下，血清内源性物质不干扰尿酸测定。临床肌酐、尼克酰胺、扑尔敏等常用药物对本试验无干扰。
3 讨论
有关电压、进样量等因素对峰的影响和电泳条件的选择参见文献[4]。其中在胶束动电毛细管电泳中随样品浓度不一，所以亦造成其迁移时间有不同；同时间每个样品中蛋白浓度亦不相同，所以蛋白质附壁对峰的迁移时间影响亦不相同。因此，为了尽量降低上述两方面因素的影响，我们采用峰面积与迁移时间的比值来计算其浓度更接近尿酸酶法所测定结果。
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血清尿酸的胶束动电毛细管电泳测定方法操作简单、无需作样本预处理，直接进样测定，而且线性范围宽。与化学方法比较，其结果可靠，简单快速, 可应用于临床样品检测，尤其是高浓度样品测定。
作者简介：周小锦，男，1964年出生，1992年毕业于重庆医科大学检验系，硕士，现在主要从事毛细管电泳的临床应用研究。
参考文献
1 白峰，徐国宾.反相高效液相色谱内标法同时测定血清肌酐和尿酸。 中华医学检验杂志，1993，16(2):79
2 Tran TC, Huq TA, Kantes HL et al. Determination of creatinine and other uremic toxins in human blood sera with micellar electrokinetic capillary electrophoresis. J chromatogr B Biomed Sci Appl,1997,690(1-2):35
3 王磊，陈农，张王奎. 高效毛细管电泳迁移重复性的考察.色谱, 1993, 11(4):207
4 周小棉，刘建武，张蒙恩等. 碘普罗胺非离子型造影剂的胶束动电毛细管电泳分析.药物分析杂志,1997,17(2):93
(收稿日期：1998-07-04), http://www.100md.com
单位：第一军医大学南方医院检验科，广州，510515
关键词：尿酸；毛细管电泳
第一军医大学学报990123 摘要：目的 用毛细管电泳中的胶束动电法直接测定血清尿酸浓度。方法 以SDS作为电泳缓冲液中和胶束相，采用非涂渍毛细管21 cm×50 μm (i.d.)，检测波长235 nm，以外标法定量。结果 尿酸测定的线性范围为46.5～1 500 μmol/L，最低检测限为20.31 μmol/L；本法的日内和日间变异系数均小于4.5%；平均回收率为101.45%。内生性化合物和临床某些常用药物对此方法无干扰。结论 该法线性范围宽，简单、快速，可应用于临床样品检测。
中图分类号：R446.12
Determination of serum uric acid using capillary electrophoresis
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Zhou Xiaomian, Lin Wen, Zou Xiao
Department of Medical Laboratory, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou, 510515
Abstract: Objective To develop a new method for determining serum uric acid using capillary electrophoresis (CE). Methods The capillary electrophoresis was performed to use 120 mmol/L SDS, 30 mmol/L phosphate buffer pH7.2, uncoated fused-silica capillary (21 cm×50μm i.d.) at the voltage of 10 kV at the detection of 235μm, running time for 6 min , automatic injection by pressure. Results The linear concentration of uric acid was 46.5～1500 μmol/L. The average recovery of uric acid at different levels was found to be 101.45% (n=3). The precision studied for both within–day-assay and between-day-assay produced CV values of less than 4.5%. Endogenous compounds and commonly used drugs showed no interference with this chromatographic procedure. Conclusion CE method for determining serum uric acid was simple, rapid, excellent reproducibility for detection of clinical samples.
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Key words: uric acid; capillary electrophoresis
血清尿酸测定已有化学法和高效液相色谱法[1]。由于毛细管电泳技术是继高效液相色谱技术之后的又一高效率分离检测技术，因此，该技术得到了迅速发展，其应用日趋广泛。1997年Tran等[2]利用内标法用毛细管电泳检测了血浆(清)尿酸浓度。最近，我们采用外标法建立了直接测定血清尿酸的胶束动电毛细管电泳方法。该方法简单、快速、稳定、重复性好、线性范围宽。现将实验报告如下。
1 材料和方法
1.1 仪器 BioFocus-3000全自动毛细管电泳分析仪(美国Bio-RAD公司产品)，具有二极管阵列的可见紫外多波长扫描系统。自动与手动数据处理系统。最大电压30 kV。非涂渍石英毛细管长度21 cm，内径50 μm，河北永年光导纤维厂产品。
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1.2 试剂 毛细管电泳缓冲液：pH 7.2、120 mmo1/L的SDS 、30 mmo1/L磷酸盐缓冲液；SDS (Bio-RAD公司产品)电泳纯级，其它试剂均匀分析纯。尿酸标准储备液：称30 mg碳酸锂(AR)，溶解在40 ml 蒸馏水中，加热60 ℃，使其完生溶解精确称取尿酸50.45 mg溶解于热碳酸锂溶液中，冷却至室温移入100 ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，贮存在棕色瓶中。此溶液浓度为3 000 μmol/L。尿酸标准应用液：取一定量的尿酸标准贮存液，用去离子水倍比稀释成如下系列浓度：1 500、750、375 、93.75、 46.875、 23.437 5 μmo1/L。
1.3 方法 取血清100 μl 左右放置于样本杯中。设置如下电泳条件：以pH 7.2、120 mmo1/L 的SDS、 30 mmol/L磷酸盐缓冲液作电泳运行液，紫外检测波长235 mm，电压 10 kV，自动压力进样2 s (2 psi sec, ipsi=6 894.76 Pa)，毛细管温度20 ℃。为了获得较好的重复性，每次运行之间用去离子水冲洗1 min，然后用1 mol/L NaOH冲洗2 min，再用缓冲液冲洗2 min。
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1.4 制定标准曲线 以峰面积与迁移时间之比为横坐标，以浓度为纵坐标，外标法定量。
2 结果
2.1 测定波长选择 配制一定浓度的尿酸溶液在岛津UV-3000分光光度计作光谱扫描，结果见图1，在近235 nm处尿酸有一吸收峰。
图1 尿酸光扫描图谱
Fig 1 Absorption spectrum of uric acid
2.2 电泳行为 在上述条件下，尿酸的电泳图见图2。尿酸的迁移时间(Migration time)为4.52 min。
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图2 尿酸电泳图谱
Fig 2 Electropgorogram of uric acid
2.3 标准曲线制作 用标准应用液进行电泳分析，以峰面积与迁移时间之比值为X轴，以尿酸浓度为Y轴, 结果尿酸在1 500～46.875 μmol/L范围内呈线性。
2.4 精密度测定 日内(n= 25)和日间(n= 5)精密度变异系数分别为3.78%和4.04%。
2.5 回收试验 于混合血清中加入高、中、低3个不同浓度的尿酸(700、300、100 μmol/L), 按前述方法操作，分别测定3次，其回收率为101.2%、99.3%、104.5%。
2.6 重复性试验 重复性测定按参考文献[3]，毛细管电泳重复性测定可用待测样本的迁移时间表示。尿酸在上述条件下其平均迁移时间为4.52 min(n= 25，CV <3.0%)。
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2.7 对比实验 取40份(含高、中、低尿酸浓度)血清，在Olympus AU-800全自动生化分析仪上用尿酸酶偶联过氧化物酶(λ=520 nm)法(元生生物科技股份有限公司)测定尿酸含量(X)，结果与毛细管电泳法(Y)测定结果对比，并进行线性回归分析，其回归方程为Y=0.954X + 1.243 (r= 0.962)。
2.8 最低检测限 以信噪比作为最低检测限, 尿酸为20.31 μmol/L。
2.9 干扰试验 上述条件下，血清内源性物质不干扰尿酸测定。临床肌酐、尼克酰胺、扑尔敏等常用药物对本试验无干扰。
3 讨论
有关电压、进样量等因素对峰的影响和电泳条件的选择参见文献[4]。其中在胶束动电毛细管电泳中随样品浓度不一，所以亦造成其迁移时间有不同；同时间每个样品中蛋白浓度亦不相同，所以蛋白质附壁对峰的迁移时间影响亦不相同。因此，为了尽量降低上述两方面因素的影响，我们采用峰面积与迁移时间的比值来计算其浓度更接近尿酸酶法所测定结果。
, 百拇医药
血清尿酸的胶束动电毛细管电泳测定方法操作简单、无需作样本预处理，直接进样测定，而且线性范围宽。与化学方法比较，其结果可靠，简单快速, 可应用于临床样品检测，尤其是高浓度样品测定。
作者简介：周小锦，男，1964年出生，1992年毕业于重庆医科大学检验系，硕士，现在主要从事毛细管电泳的临床应用研究。
参考文献
1 白峰，徐国宾.反相高效液相色谱内标法同时测定血清肌酐和尿酸。 中华医学检验杂志，1993，16(2):79
2 Tran TC, Huq TA, Kantes HL et al. Determination of creatinine and other uremic toxins in human blood sera with micellar electrokinetic capillary electrophoresis. J chromatogr B Biomed Sci Appl,1997,690(1-2):35
3 王磊，陈农，张王奎. 高效毛细管电泳迁移重复性的考察.色谱, 1993, 11(4):207
4 周小棉，刘建武，张蒙恩等. 碘普罗胺非离子型造影剂的胶束动电毛细管电泳分析.药物分析杂志,1997,17(2):93
(收稿日期：1998-07-04), http://www.100md.com