尖萼耧斗菜的生物碱成分研究△
作者：陈四保 高光耀 王立为 廖矛川 肖培根
单位：陈四保 高光耀 王立为 廖矛川 肖培根 中国协和医科大学中国医学科学院药；用植物研究所(北京100094)
关键词：尖萼耧斗菜；生物碱；氧化阿朴菲生物碱
中草药/990104 摘 要 首次从毛茛科植物尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepala全草的乙醇提取物中分得6个化合物，通过光谱分析鉴定其中4个为氧化阿朴菲生物碱即lysicamine(Ⅰ)，isomoschatoline(Ⅱ)，liridine(Ⅲ)，oxostephanine(Ⅳ)，另2个为胡萝卜苷(Ⅴ)和β-谷甾醇(Ⅵ)。
尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepala Trau-tv.et Mey系毛茛科耧斗菜属植物。该属植物具有通经、活血散瘀的功效，我国东北地区用尖萼耧斗菜的流浸膏(名“血见愁膏”)治疗月经不调、功能性子宫出血等症〔1〕。国内外对该属植物的化学成分研究较少，我们对尖萼耧斗菜进行了化学成分的研究，首次从中分离到6个化合物，其中4个为氧化阿朴菲类生物碱。依据光谱分析，分别鉴定为lysicamine(Ⅰ)，isomoschatoline(Ⅱ),liridine(Ⅲ),oxostephanine(Ⅳ),胡萝卜苷(Ⅴ)，β-谷甾醇(Ⅵ)。均为首次从该属植物中分离得到。
, 百拇医药
化合物Ⅰ～Ⅳ均为黄色结晶，熔点高、溶解度差。EI-MS显示很强分子离子峰(基峰)，主要碎片峰为M+-CH3、M-CO；IR谱都显示有羰基吸收峰；13CNMR谱显示一个羰基碳(δ178～182 ppm)，15个芳香碳及甲氧基或次甲二氧基碳；1CNMR谱低场区δ7.13～9.27 ppm为芳香氢，高场区为甲氧基和次甲二氧基氢，UV谱于240～258 nm，271～280 nm，312～480 nm有强吸收峰，显示了氧化阿朴菲碱类的特征吸收〔2〕。由以上分析表明Ⅰ～Ⅳ应为氧化阿朴菲碱类化合物。其中Ⅰ～Ⅳ的1HNMR都显示一个1，2-二取代苯的信号，表明D环无取代，Ⅰ有1个7.13 ppm单峰和2个-OCH3峰，表明3位无取代；根据1H、13CNMR并对照文献〔3，4〕，鉴定Ⅰ为lysicamine；Ⅱ的1HNMR谱与Ⅰ相比，只是7.13 ppm的单峰消失，多一个10.35 ppm的胖单峰，且IR谱在3 440 cm-1有强吸收，表明Ⅱ应为Ⅰ的3-羟基衍生物，对照文献〔5〕，鉴定Ⅱ为isomoschatoline；Ⅲ比Ⅰ多一个-OCH3而无孤立芳氢信号，表明Ⅲ应为Ⅰ的3-甲氧基衍生物，对照文献〔3，6〕，鉴定Ⅲ为liridine。Ⅳ有一个孤立芳氢(7.55 ppm)、一个-OCH3(4.24 ppm)和一个-OCH2O-(6.07 ppm)信号，D环呈现1，2，3-三取代信号。再根据13CNMR和文献〔4，7〕，鉴定Ⅳ为oxostephanine。Ⅰ～Ⅳ的化学结构式见图1。
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图1 化合物Ⅰ～Ⅳ的化学结构式
1 材料与仪器
材料采自吉林省图们县，经我所郭宝林同志鉴定为尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepala Trautv.et Mey。
熔点用Fisher-Johns熔点测定仪(温度未校正)；UV用Philips PYE Unican Pu8800紫外光谱仪，IR 用Pekin-Elmer983G型红外光谱仪，EI-MS用KYKY-2SP-50型质谱仪，1H-13CNMR谱用Am-500型核磁共振仪，TMS为内标，层析用硅胶均为青岛海洋化工厂生产。
2 提取和分离
尖萼耧斗菜全草干燥粗粉9 kg，95%和70%乙醇回流提取各2次，每次90 min，合并提取液，减压浓缩得浸膏(2.7 kg)。将浸膏拌入粗硅胶，置于索氏提取器中，依次用石油醚(60℃～90℃)、二氯甲烷、乙酸乙酯提取。二氯甲烷提取物经硅胶柱层析，石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酯梯度洗脱，分为fr.1～10，从fr.2中得到Ⅵ(50 mg)；其它部分进一步硅胶柱层析，氯仿-甲醇洗脱，从fr.4中得到Ⅳ(9 mg)；从fr.5中得到Ⅰ(10 mg)，从fr.7得到Ⅲ(7 mg)。乙酸乙酯提取物经硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，分为fr.1～8，fr.2再经硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别得到Ⅱ(11 mg)和Ⅴ(2.0 g)。
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3 鉴定
化合物Ⅰ：黄色粉末，mp 214℃～216℃，分子式C18H13O3N。IR(KBr)cm-1：1 650，1 605，1 580，1 500，1 468，1 045，1 035，980；UVλMeOHmaxnm：229，280，360，457；EI-MS(m/z)：291(M+，100)，276，248，233，220；1H-13CNMR见表1，2。
化合物Ⅱ：黄色粉末，mp 248℃～249℃，分子式C18H13O4N。IR(KBr)cm-1：3 440，1 662，1 610，1 580，1 545，1 500，1 470，1 045，988；UVλMeOHmax：230，286，370，473；EI-MS(m/z)：307(M+，100)，292，277，289，264；1H-13CNMR见表1，2。
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化合物Ⅲ：黄色粉末，mp192℃～193℃，分子式C19H15O4N。(KBr)cm-1：1 644，1 610，1 580，1 500，1 470，1 045，1 030，980，975；UVmax(MeOH)nm:240,295,369,463;EI-MS(m/z)：321(M+,100)，306,293,291,276,278,263;1H,13CNMR见表1，2。
化合物Ⅳ：黄色粉末mp272℃～274℃，分子式C18H11O4N。IR(KBr)cm-1：1 660，1 600，1 576，1 495，1 468，1 406，1 308，1 045，980，928；EI-MS(m/z)：305(M+，100)，290，276；1H-13CNMR见表1，2。
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表1 化合物1～Ⅳ的1HNMR(DMSO-d6，500 Hz)数据δ(ppm)，J(Hz) H
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
3
7.13s
7.55s
4
7.69d(5.7)
8.82d(6.0)
, http://www.100md.com 8.01d(5.5)
8.37d(6.5)
5
8.81d(5.7)
9.10d(6.0)
8.07d(5.5)
8.61d(6.5)
8
8.53d(7.5)
8.62d(7.7)
8.50d(8.0)
9
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7.80t(7.5)
7.90t(7.7)
7.59t(8.0)
7.39t(8.5)
10
7.53t(7.5)
7.80t(7.7)
7.41t(8.0)
8.00t(8.5)
11
9.14d(7.5)
9.27d(7.7)
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9.01d(8.0)
8.56d(8.5)
1-OCH3
3.95s
4.25s
4.05s
2-OCH3
4.10s
4.30s
4.17s
3-OCH3
4.11s
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-OCH2O-
6.07s
8-OCH3
4.24s
3-OH
10.35brs
表2 化合物Ⅰ～Ⅳ的13CNMR数据(DMSD-d6，500 Hz)δppm C
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
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1
145.3
144.7
145.7
150.3
1a
119.1
115.1
116.1
123.2
2
151.5
146.5
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147.1
152.3
3
110.3
150.2
148.8
109.7
3a
134.2
130.8
131.7
137.2
4
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122.7
119.4
121.7
125.3
5
144.0
145.6
144.5
145.7
6
159.7
158.9
158.3
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159.9
6a
122.4
121.7
122.2
132.8
7
181.2
181.0
180.9
178.9
7a
131.2
, http://www.100md.com
132.0
131.3
118.0
8
128.7
128.3
128.1
155.6
9
128.5
127.9
128.0
116.2
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10
132.8
133.6
134.8
134.8
11
128.6
129.1
129.4
125.1
11a
133.5
133.2
, 百拇医药
135.7
137.2
1-OCH3
60.7
60.9
60.9
2-OCH3
55.8
61.2
61.9
3-OCH3
61.9
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8-OCH3
58.5
-OCH2O-
107.2
化合物Ⅴ：黄色粉末，mp292℃～293℃，Rf,IR,EI-MS，13CNMR谱与标准品胡萝卜苷一致。
化合物Ⅵ：白色片状结晶，mp142℃～144℃，Rf,IR,EI-MS与标准品β-谷甾醇一致。
*Address:Chen Sibao,Institute of Medicinal Plant Development,Chinese Academy of Medical Sciences,Chinese Xiehe Medical University,Beijing
, 百拇医药
△国家自然科学基金资助项目批准号39570085
作者简介：陈四保 男，31岁，硕士，助理研究员。1988年毕业于夏门大学生物系。主要从事天然药用植物化学分类工作。曾多次参加国家自然科学基金课题，重点课题及医药管理局课题的研究工作。获医药管理局1991年中医药科技进步一等奖及国家科技进步一等奖各1项。发表论文近20篇，参加编写出版论著1部。现为在读博士生。
参 考 文 献
[1] 吉林省中医中药研究所，等.长白山植物药志.长春：吉林人民出版社，1982：374
[2] 王宪楷.天然药物化学.北京：人民卫生出版社，1992：165
[3] Leboeuf M, et al.Planta Med,1983,(48):234
[4] Guinaudeau H, et al. J Nat Prod,1983,6(46):768,770
[5] Abd-EI Atti S, et al.J Nat Prod,1982,(45):476
[6] Marsaioli A J, et al.Phytochemistry,1980, 19:995
[7] Watanabe Y, et al.Phytochemistry,1975, 14:2522
(1998-05-22收稿), http://www.100md.com
单位：陈四保 高光耀 王立为 廖矛川 肖培根 中国协和医科大学中国医学科学院药；用植物研究所(北京100094)
关键词：尖萼耧斗菜；生物碱；氧化阿朴菲生物碱
中草药/990104 摘 要 首次从毛茛科植物尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepala全草的乙醇提取物中分得6个化合物，通过光谱分析鉴定其中4个为氧化阿朴菲生物碱即lysicamine(Ⅰ)，isomoschatoline(Ⅱ)，liridine(Ⅲ)，oxostephanine(Ⅳ)，另2个为胡萝卜苷(Ⅴ)和β-谷甾醇(Ⅵ)。
尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepala Trau-tv.et Mey系毛茛科耧斗菜属植物。该属植物具有通经、活血散瘀的功效，我国东北地区用尖萼耧斗菜的流浸膏(名“血见愁膏”)治疗月经不调、功能性子宫出血等症〔1〕。国内外对该属植物的化学成分研究较少，我们对尖萼耧斗菜进行了化学成分的研究，首次从中分离到6个化合物，其中4个为氧化阿朴菲类生物碱。依据光谱分析，分别鉴定为lysicamine(Ⅰ)，isomoschatoline(Ⅱ),liridine(Ⅲ),oxostephanine(Ⅳ),胡萝卜苷(Ⅴ)，β-谷甾醇(Ⅵ)。均为首次从该属植物中分离得到。
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化合物Ⅰ～Ⅳ均为黄色结晶，熔点高、溶解度差。EI-MS显示很强分子离子峰(基峰)，主要碎片峰为M+-CH3、M-CO；IR谱都显示有羰基吸收峰；13CNMR谱显示一个羰基碳(δ178～182 ppm)，15个芳香碳及甲氧基或次甲二氧基碳；1CNMR谱低场区δ7.13～9.27 ppm为芳香氢，高场区为甲氧基和次甲二氧基氢，UV谱于240～258 nm，271～280 nm，312～480 nm有强吸收峰，显示了氧化阿朴菲碱类的特征吸收〔2〕。由以上分析表明Ⅰ～Ⅳ应为氧化阿朴菲碱类化合物。其中Ⅰ～Ⅳ的1HNMR都显示一个1，2-二取代苯的信号，表明D环无取代，Ⅰ有1个7.13 ppm单峰和2个-OCH3峰，表明3位无取代；根据1H、13CNMR并对照文献〔3，4〕，鉴定Ⅰ为lysicamine；Ⅱ的1HNMR谱与Ⅰ相比，只是7.13 ppm的单峰消失，多一个10.35 ppm的胖单峰，且IR谱在3 440 cm-1有强吸收，表明Ⅱ应为Ⅰ的3-羟基衍生物，对照文献〔5〕，鉴定Ⅱ为isomoschatoline；Ⅲ比Ⅰ多一个-OCH3而无孤立芳氢信号，表明Ⅲ应为Ⅰ的3-甲氧基衍生物，对照文献〔3，6〕，鉴定Ⅲ为liridine。Ⅳ有一个孤立芳氢(7.55 ppm)、一个-OCH3(4.24 ppm)和一个-OCH2O-(6.07 ppm)信号，D环呈现1，2，3-三取代信号。再根据13CNMR和文献〔4，7〕，鉴定Ⅳ为oxostephanine。Ⅰ～Ⅳ的化学结构式见图1。
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图1 化合物Ⅰ～Ⅳ的化学结构式
1 材料与仪器
材料采自吉林省图们县，经我所郭宝林同志鉴定为尖萼耧斗菜Aquilegia oxysepala Trautv.et Mey。
熔点用Fisher-Johns熔点测定仪(温度未校正)；UV用Philips PYE Unican Pu8800紫外光谱仪，IR 用Pekin-Elmer983G型红外光谱仪，EI-MS用KYKY-2SP-50型质谱仪，1H-13CNMR谱用Am-500型核磁共振仪，TMS为内标，层析用硅胶均为青岛海洋化工厂生产。
2 提取和分离
尖萼耧斗菜全草干燥粗粉9 kg，95%和70%乙醇回流提取各2次，每次90 min，合并提取液，减压浓缩得浸膏(2.7 kg)。将浸膏拌入粗硅胶，置于索氏提取器中，依次用石油醚(60℃～90℃)、二氯甲烷、乙酸乙酯提取。二氯甲烷提取物经硅胶柱层析，石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酯梯度洗脱，分为fr.1～10，从fr.2中得到Ⅵ(50 mg)；其它部分进一步硅胶柱层析，氯仿-甲醇洗脱，从fr.4中得到Ⅳ(9 mg)；从fr.5中得到Ⅰ(10 mg)，从fr.7得到Ⅲ(7 mg)。乙酸乙酯提取物经硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，分为fr.1～8，fr.2再经硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别得到Ⅱ(11 mg)和Ⅴ(2.0 g)。
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3 鉴定
化合物Ⅰ：黄色粉末，mp 214℃～216℃，分子式C18H13O3N。IR(KBr)cm-1：1 650，1 605，1 580，1 500，1 468，1 045，1 035，980；UVλMeOHmaxnm：229，280，360，457；EI-MS(m/z)：291(M+，100)，276，248，233，220；1H-13CNMR见表1，2。
化合物Ⅱ：黄色粉末，mp 248℃～249℃，分子式C18H13O4N。IR(KBr)cm-1：3 440，1 662，1 610，1 580，1 545，1 500，1 470，1 045，988；UVλMeOHmax：230，286，370，473；EI-MS(m/z)：307(M+，100)，292，277，289，264；1H-13CNMR见表1，2。
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化合物Ⅲ：黄色粉末，mp192℃～193℃，分子式C19H15O4N。(KBr)cm-1：1 644，1 610，1 580，1 500，1 470，1 045，1 030，980，975；UVmax(MeOH)nm:240,295,369,463;EI-MS(m/z)：321(M+,100)，306,293,291,276,278,263;1H,13CNMR见表1，2。
化合物Ⅳ：黄色粉末mp272℃～274℃，分子式C18H11O4N。IR(KBr)cm-1：1 660，1 600，1 576，1 495，1 468，1 406，1 308，1 045，980，928；EI-MS(m/z)：305(M+，100)，290，276；1H-13CNMR见表1，2。
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表1 化合物1～Ⅳ的1HNMR(DMSO-d6，500 Hz)数据δ(ppm)，J(Hz) H
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
3
7.13s
7.55s
4
7.69d(5.7)
8.82d(6.0)
, http://www.100md.com 8.01d(5.5)
8.37d(6.5)
5
8.81d(5.7)
9.10d(6.0)
8.07d(5.5)
8.61d(6.5)
8
8.53d(7.5)
8.62d(7.7)
8.50d(8.0)
9
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7.80t(7.5)
7.90t(7.7)
7.59t(8.0)
7.39t(8.5)
10
7.53t(7.5)
7.80t(7.7)
7.41t(8.0)
8.00t(8.5)
11
9.14d(7.5)
9.27d(7.7)
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9.01d(8.0)
8.56d(8.5)
1-OCH3
3.95s
4.25s
4.05s
2-OCH3
4.10s
4.30s
4.17s
3-OCH3
4.11s
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-OCH2O-
6.07s
8-OCH3
4.24s
3-OH
10.35brs
表2 化合物Ⅰ～Ⅳ的13CNMR数据(DMSD-d6，500 Hz)δppm C
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
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1
145.3
144.7
145.7
150.3
1a
119.1
115.1
116.1
123.2
2
151.5
146.5
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147.1
152.3
3
110.3
150.2
148.8
109.7
3a
134.2
130.8
131.7
137.2
4
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122.7
119.4
121.7
125.3
5
144.0
145.6
144.5
145.7
6
159.7
158.9
158.3
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159.9
6a
122.4
121.7
122.2
132.8
7
181.2
181.0
180.9
178.9
7a
131.2
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132.0
131.3
118.0
8
128.7
128.3
128.1
155.6
9
128.5
127.9
128.0
116.2
, http://www.100md.com
10
132.8
133.6
134.8
134.8
11
128.6
129.1
129.4
125.1
11a
133.5
133.2
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135.7
137.2
1-OCH3
60.7
60.9
60.9
2-OCH3
55.8
61.2
61.9
3-OCH3
61.9
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8-OCH3
58.5
-OCH2O-
107.2
化合物Ⅴ：黄色粉末，mp292℃～293℃，Rf,IR,EI-MS，13CNMR谱与标准品胡萝卜苷一致。
化合物Ⅵ：白色片状结晶，mp142℃～144℃，Rf,IR,EI-MS与标准品β-谷甾醇一致。
*Address:Chen Sibao,Institute of Medicinal Plant Development,Chinese Academy of Medical Sciences,Chinese Xiehe Medical University,Beijing
, 百拇医药
△国家自然科学基金资助项目批准号39570085
作者简介：陈四保 男，31岁，硕士，助理研究员。1988年毕业于夏门大学生物系。主要从事天然药用植物化学分类工作。曾多次参加国家自然科学基金课题，重点课题及医药管理局课题的研究工作。获医药管理局1991年中医药科技进步一等奖及国家科技进步一等奖各1项。发表论文近20篇，参加编写出版论著1部。现为在读博士生。
参 考 文 献
[1] 吉林省中医中药研究所，等.长白山植物药志.长春：吉林人民出版社，1982：374
[2] 王宪楷.天然药物化学.北京：人民卫生出版社，1992：165
[3] Leboeuf M, et al.Planta Med,1983,(48):234
[4] Guinaudeau H, et al. J Nat Prod,1983,6(46):768,770
[5] Abd-EI Atti S, et al.J Nat Prod,1982,(45):476
[6] Marsaioli A J, et al.Phytochemistry,1980, 19:995
[7] Watanabe Y, et al.Phytochemistry,1975, 14:2522
(1998-05-22收稿), http://www.100md.com