纯品枸杞多糖对小鼠免疫功能的影响1
作者：罗琼 阎俊 李瑾玮 张声华
单位：罗 琼 阎俊(湖北医科大学卫生学教研室，武汉 430071)；李瑾玮 张声华 华中农业大学
关键词：纯品枸杞多糖；免疫功能；量效关系
中国老年学杂志/990122 摘 要 将纯品枸杞多糖分为每天5 mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg等5个不同剂量的实验组，灌喂小鼠，观察其对小鼠免疫功能的影响。结果显示，纯品枸杞多糖各剂量组对机体均有良好的免疫促进作用，低剂量(每天5～20 mg/kg)较高剂量(每天50～100 mg/kg)显示出更明显的免疫增强效应。尤以每天10 mg/kg剂量效果最佳，非特异性免疫和特异性免疫等项指标与其他各剂量组比较差异有极显著性。
The effects of Pure Lycium Barbarum Polysaccharides
, http://www.100md.com
on the Immunopharmacological Activity of the mice
Luo Qiong，Yan Jun,Li Jinwei et al
Department of Hygiene,Hubei Medical University,Wuhan 430071
The purified fraction Lycium barbarum polysaccharides(LBP-X) were were applied to mice with five different doses,and their effects on immunocompetence and the relationship among dose and response were studied.The results showed that all of the LBP-X possessed the action of immunoenhancement,promotion of the nonspecific immune function,enhanced the cell-mediated and humoral immunity function.Effects of lwoer doses(5～20 mg/kg.d-1) were much better than the high doses(50～100 mg/kg.d-1),especially,LBP-X 10 mg/kg.d-1had highly significant difference as compared with other dose groups on immune indices(P<0.01).
, 百拇医药
Key words Pure lycium barbarum polysaccharide(LBP-X) Immune function Relationship of dose and response
近十几年来，不少学者对枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)进行了较全面地的研究。研究表明LBP可提高正常和环磷酰胺处理小鼠脾脏T淋巴细胞增殖功能、细胞毒性T淋巴细胞的杀伤及自然杀伤细胞的活性，每天10 mg/kg剂量对S180荷瘤小鼠抑瘤率达31%〔1～2〕；对CCl4所至小鼠实验性肝损伤有明显的保护和恢复作用〔3〕；能对抗遗传毒物所诱发的遗传损伤〔4〕；促进造血功能〔5〕，具有延缓衰老和延长动物寿命〔6〕等多方面的功能。由于多糖结构复杂，纯品提取难度大，上述报道均为粗品枸杞多糖之研究结果。为了更深层次地揭示枸杞多糖的生物学活性，作者采用萃取、离子交换层析、凝胶层析等方法获得了枸杞多糖的四个纯化级分，对其结构及理化特性进行了研究〔7〕，并首次报道了纯品枸杞多糖(LBP-x)有显著的降血糖、降血脂功能〔8，9〕，且效果优于粗品。本研究旨在提供纯品枸杞多糖对小鼠免疫功能影响的准确信息。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 LBP-X 从宁夏枸杞中提取、分离纯化获得。
1.1.2 仪器 KB2137自动柱层析系统，721分光光度计。
1.1.3 试剂 Sephacryl S-300，Pharmacia产品；D-半乳糖醛酸(AR)，Sigma公司产品，DEAE纤维素，上海试剂二厂产品；植物血凝素(PHA)，广州医药工业研究所产品。
1.1.4 绵羊红细胞(SRBC)悬液 自绵羊颈静脉取血，Alsever液抗凝，4℃冰箱保存，临用前用生理盐水洗涤3次，配成10%和20%SRBC悬液。
1.1.5 鸡红细胞(CRBC)悬液 健康雄鸡翼静脉采血，Alsever液中4 ℃冰箱保存，临用前配成5%压积的CRBC悬液。
, 百拇医药
1.1.6 豚鼠补体 2～3只豚鼠，心脏取血，将分离出的血清加入压积SRBC中(1∶2 V/V)，4 ℃冰箱放置30 min。离心，吸取上清液，用生理盐水稀释成1∶10血清备用。
1.1.7 动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18±2 g由湖北省医学科学院动物室提供。
1.2 方法
1.2.1 枸杞多糖的分离纯化 枸杞子
烘干
脱脂
脱低聚糖→水提取
→浓缩→ 乙醇沉淀→脱水→真空干燥→粗品 LBP
分级→浓缩
脱盐→浓缩→冷冻干燥→纯品枸杞多糖(LBP-X)。
, 百拇医药
1.2.2 动物分组 动物随机分为正常对照组和LBP-x每天5mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg等5个不同剂量的实验组。
1.2.3 给药方式 LBP-x按剂量用生理盐水稀释后以0.5 ml/20 g灌胃，正常对照组按等量生理盐水灌胃，连续10 d。
1.2.4 指标测定 免疫器官重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、溶血素、迟发型过敏反应、淋巴细胞转化率及E玫瑰花结形成率等指标均按文献〔10〕方法进行。
1.2.5 统计方法 t检验。
2 结 果
2.1 LBP-X对小鼠非特异性免疫功能的影响
2.1.1 LBP-X对小鼠免疫器官重量的影响 免疫兴奋剂可使免疫器官(胸腺、脾脏等)增重。取18±2 g昆明种小鼠60只，随机分为6组，每组10只，雌雄各半。分别灌胃LBP-X每天5 mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg及生理盐水(对照组)，连续10 d。股动脉放血处死，取胸腺和脾脏称重(表1)。
, 百拇医药
由表1可知，与对照相比LBP-X高剂量组(50～100 mg/kg)能增加小鼠胸腺、脾脏的重量，LBP-X 低剂量组(5～20 mg/kg)能显著增加免疫器官重量。LBP-X各组间比较，胸腺、脾脏增重以LBP-X 10 mg/kg效果最好，其余各组与之相比差异有显著性或极显著性(P<0.05和P<0.01)。
表1 LBP-X各剂量组对小鼠胸腺脾脏重量的影响(mg/10g wt,n=10，
±s) 组别
剂量(mg/kg)
胸腺指数
脾脏指数
1(对照)
0
, 百拇医药
27.02±5.83
47.68±8.34
2
5
39.02±5.832)4)
67.28±8.842)3)
3
10
46.87±5.102)
71.77±9.902)
4
, 百拇医药
20
39.13±8.892)4)
60.52±8.532)4)
5
50
36.05±9.242)4)
54.12±9.622)4)
6
100
37.18±3.052)4)
56.75±9.622)4)
, http://www.100md.com
1)P<0.05；2)：P<0.01，与对照组比较；3)P<0.05，4)P<0.01，与第3组比较；下表同
2.1.2 LBP-X对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 巨噬细胞能非特异性地吞噬多种抗原，具有抗感染等重要作用。末次给LBP-X后，于小鼠腹腔内注5%CRBC0.5 ml，12 h后处死小鼠，吸取腹腔巨噬细胞，油镜检其活性，并以吞噬百分率及吞噬功能的高低表示巨噬细胞吞噬功能的大小〔吞噬百分率(%)=吞噬CRBC的巨噬细胞数/100个巨噬细胞(吞及未吞的)×100%；吞噬指数=被吞噬的CRBC数/100个巨噬细胞〕，见表2。
表2 LBP-X各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(n=10，±s) 组别
剂量(mg/kg)
, http://www.100md.com 胸腺指数
脾脏指数
1(对照)
0
37.15±7.00
0.97
2
5
62.85±5.652)4)
2.35
3
10
75.55±5.492)
, 百拇医药
2.84
4
20
61.94±5.932)4)
2.15
5
50
51.11±6.332)4)
1.69
6
100
60.22±9.152)4)
, 百拇医药
2.01
结果显示，与对照组相比LBP-X各剂量组均能显著地增强巨噬细胞的吞噬功能(P<0.01)；LBP-X各组间比较，LBP-X 10 mg/kg效果最佳，与之相比，其余各剂量组差异均有极显著性(P<0.01)。各组吞噬指数分别增加1.69～2.84倍，以LBP-X 10 mg/kg最高，对照组仅为0.97倍。
2.2 LBP-X对小鼠特异性免疫功能的影响
2.2.1 LBP-X对体液免疫功能的影响 B淋巴细胞受抗原(SBRC)刺激后，分化成浆细胞并产生抗体(溶血素)，当再次接受同一抗原时，溶血素与抗原作用，在补体的参与下使SRBC溶血，以清除抗原对机体的有害作用。取体重18±2 g昆明种小白鼠120只，随机分为6组，每组20只。灌胃LBP-X 6 d后，每鼠腹腔注射SRBC悬液0.2 ml进行免疫，4 d后股动脉放血分离血清，按文献方法〔9〕测定溶血素的含量(表3)。结果表明，与对照组相比，LBP-X各剂量组均有增加半数溶血值(HC50)的作用(P<0.01)；LBP-X各剂量组与LBP-X 10 mg/kg组比较差异有极显著性(P<0.01)。表3 LBP-X各剂量组对小鼠溶血素的影响(n=20，±s) 组 别
, 百拇医药
剂量(mg/kg)
HC50×10-3/L
HC50(倍数)
1(对照)
0
108.71±29.23
/
2
5
334.08±32.682)3)
2.17
, http://www.100md.com
3
10
385.32±35.132)
2.54
4
20
334.92±34.722)3)
1.99
5
50
312.88±36.752)4)
1.88
, 百拇医药
6
100
318.30±38.152)4)
1.93
2.2.2 LBP-X对细胞免疫功能的影响
2.2.2.1 迟发型过敏反应(DHT) T淋巴细胞受抗原刺激转变为致敏T淋巴细胞，后者产生淋巴因子(IFN)，IFN能促进吞噬细胞对抗原的吞噬以及扩大炎症反应。当相同抗原入侵机体(足趾)后，就能在IFN的作用下引起炎症反应，炎症反应的剧烈程度反映了机体细胞免疫力的强弱。灌胃LBP-X 6 d后，每只小鼠左后足趾皮下向心方向注射0.05 ml SRBC悬液(2×108个/ml)，4 d后用千分尺测量左、右后足趾部厚度，随后以0.05 ml SRBC悬液注入右后足趾，24 h后再次测量足趾部厚度(表4)。结果表明，LBP-X对小鼠迟发型过敏反应均有显著地增强作用。除LBP-X 50 mg/kg剂量为P<0.05外，其余各组为P<0.01，尤以LBP-X 10 mg/kg组效果最佳。表4 LBP-X对小鼠足趾肿胀厚度的影(mm，n=20，±s) 组别
, 百拇医药
剂量(mg/kg)
足趾肿胀厚度(mm)
增加倍数
1(对照)
0
0.081±0.02
/
2
5
0.152±0.062)3)
0.88
3
, 百拇医药 10
0.214±0.072)
1.64
4
20
0.144±0.062)3)
0.78
5
50
0.126±0.051)4)
0.56
6
, 百拇医药
100
0.139±0.072)4)
0.72
2.2.2.2 淋巴细胞转化率 采用PHA刺激淋巴细胞转化试验——小鼠体内诱导法〔10〕。取雄性小鼠60只，随机分为6组，每组10只，各组小鼠肌肉注射PHA每天10 mg/kg，共3 d；LBP-X与PHA同日给予，共8 d。第8天剪尾，取血推片，瑞氏染色，油镜下计数100个淋巴细胞、淋巴母细胞及过渡态淋巴细胞，计算它们分别所占的百分率(表5)。表5 LBP-X各剂量组对小鼠淋巴细胞转化率的影响(%，n=10，±s) 组别
剂量
(mg/kg)
, 百拇医药
淋巴母细胞
过渡型
淋巴细胞
淋巴细胞
转化率
1(对照)
0
18.22±1.31
27.11±1.79
45.33±2.91
2
5
23.55±2.45
, 百拇医药
38.56±3.17
62.11±4.722)3)
3
10
26.11±1.91
45.22±5.18
71.33±5.942)
4
20
21.33±3.62
36.11±4.89
, http://www.100md.com 57.44±7.272)4)
5
50
21.89±3.34
33.39±3.31
55.78±6.262)4)
6
100
22.31±4.44
34.67±4.14
56.78±6.352)4)
, http://www.100md.com
结果表明，LBP-X各剂量组均能有效促进淋巴细胞转化(P<0.01)。LBP-X 10 mg/kg剂量效果最佳，与其他各剂量组比较，LBP-X 5 mg/kg剂量效果次之(P<0.05)，20～100 mg/kg剂量差异有极显著性(P<0.01)。
2.2.2.3 E玫瑰花结形成率 小鼠末次给LBP-X后，股动脉放血，肝素抗凝，加入pH 7.2 Hank's液稀释1倍，用淋巴细胞分离液按文献方法〔10〕配制成淋巴细胞数为106 个/ml的淋巴细胞悬液。将0.1 ml SRBC悬液与0.1 ml淋巴细胞悬液混合，于37 ℃温箱5 min；离心2次后弃上清，加0.1%戊二醛0.1 ml固定10 min；制片，Giemsa-Wright染色。油镜下计数200个淋巴细胞，计算E花结形成率(表6)。结果显示，LBP-X各剂量组与对照组比相明显增加E玫瑰花结形成率(P<0.01)，各组分别增加0.66～1.65倍。5～20 mg/kg低剂量效果比50～100 mg/kg剂量效果好，以LBP-X 10mg/kg剂量效果最佳。表6 LBP-X各剂量组对小鼠E玫瑰花结形成率的影响(%,n=10,±s) 组别
, http://www.100md.com
剂量
(mg/kg)
E玫瑰花结形成率
倍数
1(对照)
0
22.50±2.81
/
2
5
46.56±3.652)3)
1.07
3
, 百拇医药
10
59.69±1.642)
1.65
4
20
49.19±2.112)3)
0.96
5
50
37.38±2.402)4)
0.66
6
, http://www.100md.com
100
40.56±2.202)4)
0.80
3 讨 论
本研究用枸杞多糖纯品组分(LBP-X)5个不同剂量组，开展了对小鼠免疫活性的量效关系研究，得出如下结论：LBP-X各剂量组对小鼠非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能均有显著的免疫增强作用。各项指标的结果几乎显示出同一趋势，LBP-X 5～20 mg/kg低剂量组效果优于50～100 mg/kg高剂量组，尤以10 mg/kg剂量效果更显著，统计学上此结果似呈poisson分布(λ=5)。LBP-X 10 mg/kg为最佳剂量，LBP-X 5 mg/kg剂量其次。
文献报道，粗品枸杞多糖以LBP 10 mg/kg为其最适剂量〔11〕，高剂量并非达到最好效果。纯品枸杞多糖显示出的剂量与效应关系，仍然存在最适剂量的问题。有研究认为，多糖调节机体免疫功能的关键不在剂量而在免疫力的状态水平，其机制主要是通过整体协调功能，其中以“神经-内分泌与免疫调节网络”(NIM)为主〔12～13〕。而生物生理代谢的基本规律也是在神经和内分泌的调控下，在一定域值范围内摄食营养素，达到促进机体生长发育，增进健康的最佳效果。枸杞多糖作为枸杞促进免疫功能的功能因子，从生物体新陈代谢基础理论和“神经-内分泌与免疫调节网络”学说的相互印证中可得到启迪，LBP-X的剂量效应关系基本符合生物体生存与发展的规律。
, 百拇医药
本实验研究结果进一步确证，枸杞多糖是枸杞的有效成份。纯品枸杞多糖LBP-X 10 mg/kg剂量对小鼠可达最佳免疫效果，为深层次的开发利用枸杞资源以及对枸杞多糖的临床应用价值提供了科学依据。
1 湖北省自然科学基金资助课题
作者简介：罗 琼，女，41岁，博士，副教授，从事天然活性成分化学和保健功能研究
张声华，男，63岁，教授，博士导师
参考文献
1 Wang Bai-kum，Xing Shantian，Zhou Jin-huang .Effect of Lycium barbarum polysaccharides on the immume responsese of T.CTL and NK cells innornal and cyclophosph-amide-treated mice.China J Pharmacol and Toxicol，1990；4(1)：39
, http://www.100md.com
2 王柏昆，邢善田，周金黄 et al.枸杞子多糖对S180荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响及其抑瘤作用.中国药理学与毒理学杂志，1988；2(2)：127
3 戴寿芝，王慕娣，高 乐，et al.枸杞及其多糖对果蝇和小鼠寿命的影响.老年学杂志，1990；10(20)：94
4 贺 捷，潘 力，郭富祥 et al.枸杞多糖对实验性肝损伤小鼠的保护作用.中国药理学与毒理学杂志，1993；7(4)：293
5 陶茂萱，赵忠良.枸杞多糖对两种化合物体外诱发遗传损伤的保护作用.中国药理学与毒理学杂志，1992；6(2)：136
6 周志文，周金黄.枸杞多糖对正常小鼠红系造血及集落刺激因子的影响.中华血液杂志，1991；12(8)：409
, http://www.100md.com 7 何 进，张志华.枸杞多糖LBP的分离纯化及组成研究.中国药学杂志，1996；31(12)：716
8 罗 琼，李瑾玮，张声华.枸杞及其多糖对实验性氧嘧啶糖尿病兔血糖的影响.营养学报，1997；17(4)：231
9 罗 琼，阎 俊，张声华 et al.枸杞及其多糖对家兔血脂的影响.营养学报，1997；19(4)：415
10 李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991：155-167
11 耿长山，王葛英.枸杞多糖对老年小鼠免疫功能低下的调节作用.中华老年医学杂志，1989；8(4)：236
12 周金黄.神经免疫调节研究进展.生理科学进展，1987；8(4)：236
13 Besedovsky H，Sorkin E.Network of immune-neuroendocrine interactions.Clin Exp Immunol，1977；27：1
〔1998-04-13收稿 1998-09-11修回〕, http://www.100md.com
单位：罗 琼 阎俊(湖北医科大学卫生学教研室，武汉 430071)；李瑾玮 张声华 华中农业大学
关键词：纯品枸杞多糖；免疫功能；量效关系
中国老年学杂志/990122 摘 要 将纯品枸杞多糖分为每天5 mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg等5个不同剂量的实验组，灌喂小鼠，观察其对小鼠免疫功能的影响。结果显示，纯品枸杞多糖各剂量组对机体均有良好的免疫促进作用，低剂量(每天5～20 mg/kg)较高剂量(每天50～100 mg/kg)显示出更明显的免疫增强效应。尤以每天10 mg/kg剂量效果最佳，非特异性免疫和特异性免疫等项指标与其他各剂量组比较差异有极显著性。
The effects of Pure Lycium Barbarum Polysaccharides
, http://www.100md.com
on the Immunopharmacological Activity of the mice
Luo Qiong，Yan Jun,Li Jinwei et al
Department of Hygiene,Hubei Medical University,Wuhan 430071
The purified fraction Lycium barbarum polysaccharides(LBP-X) were were applied to mice with five different doses,and their effects on immunocompetence and the relationship among dose and response were studied.The results showed that all of the LBP-X possessed the action of immunoenhancement,promotion of the nonspecific immune function,enhanced the cell-mediated and humoral immunity function.Effects of lwoer doses(5～20 mg/kg.d-1) were much better than the high doses(50～100 mg/kg.d-1),especially,LBP-X 10 mg/kg.d-1had highly significant difference as compared with other dose groups on immune indices(P<0.01).
, 百拇医药
Key words Pure lycium barbarum polysaccharide(LBP-X) Immune function Relationship of dose and response
近十几年来，不少学者对枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)进行了较全面地的研究。研究表明LBP可提高正常和环磷酰胺处理小鼠脾脏T淋巴细胞增殖功能、细胞毒性T淋巴细胞的杀伤及自然杀伤细胞的活性，每天10 mg/kg剂量对S180荷瘤小鼠抑瘤率达31%〔1～2〕；对CCl4所至小鼠实验性肝损伤有明显的保护和恢复作用〔3〕；能对抗遗传毒物所诱发的遗传损伤〔4〕；促进造血功能〔5〕，具有延缓衰老和延长动物寿命〔6〕等多方面的功能。由于多糖结构复杂，纯品提取难度大，上述报道均为粗品枸杞多糖之研究结果。为了更深层次地揭示枸杞多糖的生物学活性，作者采用萃取、离子交换层析、凝胶层析等方法获得了枸杞多糖的四个纯化级分，对其结构及理化特性进行了研究〔7〕，并首次报道了纯品枸杞多糖(LBP-x)有显著的降血糖、降血脂功能〔8，9〕，且效果优于粗品。本研究旨在提供纯品枸杞多糖对小鼠免疫功能影响的准确信息。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 LBP-X 从宁夏枸杞中提取、分离纯化获得。
1.1.2 仪器 KB2137自动柱层析系统，721分光光度计。
1.1.3 试剂 Sephacryl S-300，Pharmacia产品；D-半乳糖醛酸(AR)，Sigma公司产品，DEAE纤维素，上海试剂二厂产品；植物血凝素(PHA)，广州医药工业研究所产品。
1.1.4 绵羊红细胞(SRBC)悬液 自绵羊颈静脉取血，Alsever液抗凝，4℃冰箱保存，临用前用生理盐水洗涤3次，配成10%和20%SRBC悬液。
1.1.5 鸡红细胞(CRBC)悬液 健康雄鸡翼静脉采血，Alsever液中4 ℃冰箱保存，临用前配成5%压积的CRBC悬液。
, 百拇医药
1.1.6 豚鼠补体 2～3只豚鼠，心脏取血，将分离出的血清加入压积SRBC中(1∶2 V/V)，4 ℃冰箱放置30 min。离心，吸取上清液，用生理盐水稀释成1∶10血清备用。
1.1.7 动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18±2 g由湖北省医学科学院动物室提供。
1.2 方法
1.2.1 枸杞多糖的分离纯化 枸杞子
烘干脱脂脱低聚糖→水提取→浓缩→ 乙醇沉淀→脱水→真空干燥→粗品 LBP
分级→浓缩脱盐→浓缩→冷冻干燥→纯品枸杞多糖(LBP-X)。, 百拇医药
1.2.2 动物分组 动物随机分为正常对照组和LBP-x每天5mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg等5个不同剂量的实验组。
1.2.3 给药方式 LBP-x按剂量用生理盐水稀释后以0.5 ml/20 g灌胃，正常对照组按等量生理盐水灌胃，连续10 d。
1.2.4 指标测定 免疫器官重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、溶血素、迟发型过敏反应、淋巴细胞转化率及E玫瑰花结形成率等指标均按文献〔10〕方法进行。
1.2.5 统计方法 t检验。
2 结 果
2.1 LBP-X对小鼠非特异性免疫功能的影响
2.1.1 LBP-X对小鼠免疫器官重量的影响 免疫兴奋剂可使免疫器官(胸腺、脾脏等)增重。取18±2 g昆明种小鼠60只，随机分为6组，每组10只，雌雄各半。分别灌胃LBP-X每天5 mg/kg、10 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg及生理盐水(对照组)，连续10 d。股动脉放血处死，取胸腺和脾脏称重(表1)。
, 百拇医药
由表1可知，与对照相比LBP-X高剂量组(50～100 mg/kg)能增加小鼠胸腺、脾脏的重量，LBP-X 低剂量组(5～20 mg/kg)能显著增加免疫器官重量。LBP-X各组间比较，胸腺、脾脏增重以LBP-X 10 mg/kg效果最好，其余各组与之相比差异有显著性或极显著性(P<0.05和P<0.01)。
表1 LBP-X各剂量组对小鼠胸腺脾脏重量的影响(mg/10g wt,n=10，
±s) 组别剂量(mg/kg)
胸腺指数
脾脏指数
1(对照)
0
, 百拇医药
27.02±5.83
47.68±8.34
2
5
39.02±5.832)4)
67.28±8.842)3)
3
10
46.87±5.102)
71.77±9.902)
4
, 百拇医药
20
39.13±8.892)4)
60.52±8.532)4)
5
50
36.05±9.242)4)
54.12±9.622)4)
6
100
37.18±3.052)4)
56.75±9.622)4)
, http://www.100md.com
1)P<0.05；2)：P<0.01，与对照组比较；3)P<0.05，4)P<0.01，与第3组比较；下表同
2.1.2 LBP-X对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 巨噬细胞能非特异性地吞噬多种抗原，具有抗感染等重要作用。末次给LBP-X后，于小鼠腹腔内注5%CRBC0.5 ml，12 h后处死小鼠，吸取腹腔巨噬细胞，油镜检其活性，并以吞噬百分率及吞噬功能的高低表示巨噬细胞吞噬功能的大小〔吞噬百分率(%)=吞噬CRBC的巨噬细胞数/100个巨噬细胞(吞及未吞的)×100%；吞噬指数=被吞噬的CRBC数/100个巨噬细胞〕，见表2。
表2 LBP-X各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(n=10，
±s) 组别剂量(mg/kg)
, http://www.100md.com 胸腺指数
脾脏指数
1(对照)
0
37.15±7.00
0.97
2
5
62.85±5.652)4)
2.35
3
10
75.55±5.492)
, 百拇医药
2.84
4
20
61.94±5.932)4)
2.15
5
50
51.11±6.332)4)
1.69
6
100
60.22±9.152)4)
, 百拇医药
2.01
结果显示，与对照组相比LBP-X各剂量组均能显著地增强巨噬细胞的吞噬功能(P<0.01)；LBP-X各组间比较，LBP-X 10 mg/kg效果最佳，与之相比，其余各剂量组差异均有极显著性(P<0.01)。各组吞噬指数分别增加1.69～2.84倍，以LBP-X 10 mg/kg最高，对照组仅为0.97倍。
2.2 LBP-X对小鼠特异性免疫功能的影响
2.2.1 LBP-X对体液免疫功能的影响 B淋巴细胞受抗原(SBRC)刺激后，分化成浆细胞并产生抗体(溶血素)，当再次接受同一抗原时，溶血素与抗原作用，在补体的参与下使SRBC溶血，以清除抗原对机体的有害作用。取体重18±2 g昆明种小白鼠120只，随机分为6组，每组20只。灌胃LBP-X 6 d后，每鼠腹腔注射SRBC悬液0.2 ml进行免疫，4 d后股动脉放血分离血清，按文献方法〔9〕测定溶血素的含量(表3)。结果表明，与对照组相比，LBP-X各剂量组均有增加半数溶血值(HC50)的作用(P<0.01)；LBP-X各剂量组与LBP-X 10 mg/kg组比较差异有极显著性(P<0.01)。表3 LBP-X各剂量组对小鼠溶血素的影响(n=20，
±s) 组 别, 百拇医药
剂量(mg/kg)
HC50×10-3/L
HC50(倍数)
1(对照)
0
108.71±29.23
/
2
5
334.08±32.682)3)
2.17
, http://www.100md.com
3
10
385.32±35.132)
2.54
4
20
334.92±34.722)3)
1.99
5
50
312.88±36.752)4)
1.88
, 百拇医药
6
100
318.30±38.152)4)
1.93
2.2.2 LBP-X对细胞免疫功能的影响
2.2.2.1 迟发型过敏反应(DHT) T淋巴细胞受抗原刺激转变为致敏T淋巴细胞，后者产生淋巴因子(IFN)，IFN能促进吞噬细胞对抗原的吞噬以及扩大炎症反应。当相同抗原入侵机体(足趾)后，就能在IFN的作用下引起炎症反应，炎症反应的剧烈程度反映了机体细胞免疫力的强弱。灌胃LBP-X 6 d后，每只小鼠左后足趾皮下向心方向注射0.05 ml SRBC悬液(2×108个/ml)，4 d后用千分尺测量左、右后足趾部厚度，随后以0.05 ml SRBC悬液注入右后足趾，24 h后再次测量足趾部厚度(表4)。结果表明，LBP-X对小鼠迟发型过敏反应均有显著地增强作用。除LBP-X 50 mg/kg剂量为P<0.05外，其余各组为P<0.01，尤以LBP-X 10 mg/kg组效果最佳。表4 LBP-X对小鼠足趾肿胀厚度的影(mm，n=20，
±s) 组别, 百拇医药
剂量(mg/kg)
足趾肿胀厚度(mm)
增加倍数
1(对照)
0
0.081±0.02
/
2
5
0.152±0.062)3)
0.88
3
, 百拇医药 10
0.214±0.072)
1.64
4
20
0.144±0.062)3)
0.78
5
50
0.126±0.051)4)
0.56
6
, 百拇医药
100
0.139±0.072)4)
0.72
2.2.2.2 淋巴细胞转化率 采用PHA刺激淋巴细胞转化试验——小鼠体内诱导法〔10〕。取雄性小鼠60只，随机分为6组，每组10只，各组小鼠肌肉注射PHA每天10 mg/kg，共3 d；LBP-X与PHA同日给予，共8 d。第8天剪尾，取血推片，瑞氏染色，油镜下计数100个淋巴细胞、淋巴母细胞及过渡态淋巴细胞，计算它们分别所占的百分率(表5)。表5 LBP-X各剂量组对小鼠淋巴细胞转化率的影响(%，n=10，
±s) 组别剂量
(mg/kg)
, 百拇医药
淋巴母细胞
过渡型
淋巴细胞
淋巴细胞
转化率
1(对照)
0
18.22±1.31
27.11±1.79
45.33±2.91
2
5
23.55±2.45
, 百拇医药
38.56±3.17
62.11±4.722)3)
3
10
26.11±1.91
45.22±5.18
71.33±5.942)
4
20
21.33±3.62
36.11±4.89
, http://www.100md.com 57.44±7.272)4)
5
50
21.89±3.34
33.39±3.31
55.78±6.262)4)
6
100
22.31±4.44
34.67±4.14
56.78±6.352)4)
, http://www.100md.com
结果表明，LBP-X各剂量组均能有效促进淋巴细胞转化(P<0.01)。LBP-X 10 mg/kg剂量效果最佳，与其他各剂量组比较，LBP-X 5 mg/kg剂量效果次之(P<0.05)，20～100 mg/kg剂量差异有极显著性(P<0.01)。
2.2.2.3 E玫瑰花结形成率 小鼠末次给LBP-X后，股动脉放血，肝素抗凝，加入pH 7.2 Hank's液稀释1倍，用淋巴细胞分离液按文献方法〔10〕配制成淋巴细胞数为106 个/ml的淋巴细胞悬液。将0.1 ml SRBC悬液与0.1 ml淋巴细胞悬液混合，于37 ℃温箱5 min；离心2次后弃上清，加0.1%戊二醛0.1 ml固定10 min；制片，Giemsa-Wright染色。油镜下计数200个淋巴细胞，计算E花结形成率(表6)。结果显示，LBP-X各剂量组与对照组比相明显增加E玫瑰花结形成率(P<0.01)，各组分别增加0.66～1.65倍。5～20 mg/kg低剂量效果比50～100 mg/kg剂量效果好，以LBP-X 10mg/kg剂量效果最佳。表6 LBP-X各剂量组对小鼠E玫瑰花结形成率的影响(%,n=10,
±s) 组别, http://www.100md.com
剂量
(mg/kg)
E玫瑰花结形成率
倍数
1(对照)
0
22.50±2.81
/
2
5
46.56±3.652)3)
1.07
3
, 百拇医药
10
59.69±1.642)
1.65
4
20
49.19±2.112)3)
0.96
5
50
37.38±2.402)4)
0.66
6
, http://www.100md.com
100
40.56±2.202)4)
0.80
3 讨 论
本研究用枸杞多糖纯品组分(LBP-X)5个不同剂量组，开展了对小鼠免疫活性的量效关系研究，得出如下结论：LBP-X各剂量组对小鼠非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能均有显著的免疫增强作用。各项指标的结果几乎显示出同一趋势，LBP-X 5～20 mg/kg低剂量组效果优于50～100 mg/kg高剂量组，尤以10 mg/kg剂量效果更显著，统计学上此结果似呈poisson分布(λ=5)。LBP-X 10 mg/kg为最佳剂量，LBP-X 5 mg/kg剂量其次。
文献报道，粗品枸杞多糖以LBP 10 mg/kg为其最适剂量〔11〕，高剂量并非达到最好效果。纯品枸杞多糖显示出的剂量与效应关系，仍然存在最适剂量的问题。有研究认为，多糖调节机体免疫功能的关键不在剂量而在免疫力的状态水平，其机制主要是通过整体协调功能，其中以“神经-内分泌与免疫调节网络”(NIM)为主〔12～13〕。而生物生理代谢的基本规律也是在神经和内分泌的调控下，在一定域值范围内摄食营养素，达到促进机体生长发育，增进健康的最佳效果。枸杞多糖作为枸杞促进免疫功能的功能因子，从生物体新陈代谢基础理论和“神经-内分泌与免疫调节网络”学说的相互印证中可得到启迪，LBP-X的剂量效应关系基本符合生物体生存与发展的规律。
, 百拇医药
本实验研究结果进一步确证，枸杞多糖是枸杞的有效成份。纯品枸杞多糖LBP-X 10 mg/kg剂量对小鼠可达最佳免疫效果，为深层次的开发利用枸杞资源以及对枸杞多糖的临床应用价值提供了科学依据。
1 湖北省自然科学基金资助课题
作者简介：罗 琼，女，41岁，博士，副教授，从事天然活性成分化学和保健功能研究
张声华，男，63岁，教授，博士导师
参考文献
1 Wang Bai-kum，Xing Shantian，Zhou Jin-huang .Effect of Lycium barbarum polysaccharides on the immume responsese of T.CTL and NK cells innornal and cyclophosph-amide-treated mice.China J Pharmacol and Toxicol，1990；4(1)：39
, http://www.100md.com
2 王柏昆，邢善田，周金黄 et al.枸杞子多糖对S180荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响及其抑瘤作用.中国药理学与毒理学杂志，1988；2(2)：127
3 戴寿芝，王慕娣，高 乐，et al.枸杞及其多糖对果蝇和小鼠寿命的影响.老年学杂志，1990；10(20)：94
4 贺 捷，潘 力，郭富祥 et al.枸杞多糖对实验性肝损伤小鼠的保护作用.中国药理学与毒理学杂志，1993；7(4)：293
5 陶茂萱，赵忠良.枸杞多糖对两种化合物体外诱发遗传损伤的保护作用.中国药理学与毒理学杂志，1992；6(2)：136
6 周志文，周金黄.枸杞多糖对正常小鼠红系造血及集落刺激因子的影响.中华血液杂志，1991；12(8)：409
, http://www.100md.com 7 何 进，张志华.枸杞多糖LBP的分离纯化及组成研究.中国药学杂志，1996；31(12)：716
8 罗 琼，李瑾玮，张声华.枸杞及其多糖对实验性氧嘧啶糖尿病兔血糖的影响.营养学报，1997；17(4)：231
9 罗 琼，阎 俊，张声华 et al.枸杞及其多糖对家兔血脂的影响.营养学报，1997；19(4)：415
10 李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991：155-167
11 耿长山，王葛英.枸杞多糖对老年小鼠免疫功能低下的调节作用.中华老年医学杂志，1989；8(4)：236
12 周金黄.神经免疫调节研究进展.生理科学进展，1987；8(4)：236
13 Besedovsky H，Sorkin E.Network of immune-neuroendocrine interactions.Clin Exp Immunol，1977；27：1
〔1998-04-13收稿 1998-09-11修回〕, http://www.100md.com