241例性别发育异常患者病因的遗传学分析
作者：张 立 李建平 余元勋 谢向农
单位：安徽省优生优育遗传医学中心， 安徽 合肥 230031
关键词：性别发育异常；病因；染色体；SRY基因
疾病控制杂志990107
【摘要】 目的 从医学遗传学角度探讨性别发育异常的病因。 方法 采用外周血淋巴细胞培养技术及PCR基因诊断技术，对241例性发育异常患者进行染色体检查及SRY基因检测。 结果 发现染色体异常核型45例，异常率18.7%，其中常染色体异常7例，占异常总数的15.6%，性染色体异常30例，占66.7%，性反转核型8例，占17.8%。在性反转综合征中，SRY基因与表型相符5例，不符3例。 结论 染色体异常、SRY基因的改变是导致性别发育异常的重要原因之一，对该类患者进行细胞遗传学和分子遗传学检测，有助于病因诊断及临床处理。
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【中图分类号】 R596.02；R691.1； 【文献标识码】 A 【文章编号】 1008-6013(1999)01-0019-02R711.1
A genetics study on the cause of sexual development abnormality in Anhui Province
Zhang Li, Li Jianping, Yu Yuanxun, Xie Xiangnong.
Anhui Medical Genetic Center of Improving Birth Outcome and Child Development， Hefei 230031， China
【Abstract】 Objective To study the cause of sexual development abnormality in respect of medical genetics. Method Chromosome and SRY gene were detected with peripheral blood lymphocytic culture and PCR gene diagnosis on 241 patients with abnormally sexual development. Results There were 45(18.67%) chromosome abnormalities of karyotype. Among all abnormalities, autosomal abnormalities accounted for 15.6%, sex chromosome abnormalities, 66.7% and karyotype of sexual reversion, 17.8%. On sexual reversion syndrome, SRY gene was in accordance with phenotype in 5 patients and wasn't in accordance with phenotype in 3 patients. Conclusions Chromosome abnormalities and SRY gene change were one of the important factors resulting in sexual development abnormalities, detection of this kind of patients with the methods of cytogenetics and molecular genetics is helpful to etiological diagnosis and clinical treatment.
, 百拇医药
【Key words】 sexual development abnormelity; cause of disease; chromosome; SRY gene
从医学遗传学角度探讨性别异常的发生并研究染色体异常、SRY基因与表型的关系，对防治性别异常疾病、产前诊断及优生优育等都具有重要意义。近年来我们对241例具有性别不明、男性原发性不育及女性原发及继发闭经患者，分别进行了细胞遗传学和PCR-SRY基因检测，现报告如下。
1 对象与方法
1.1 对象 病例来源于1989年1月～1998年12月安徽地区各大医院妇产科、泌尿外科、小儿科及本中心等初诊后就诊的病人，共241例。其中，男性原发性不育78例，女性原发及继发闭经54例，性别不明及第二性征不发育的109例。
1.2 方法
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1.2.1 资料收集 结合咨询者以往的病历以及各种检查报告单，详细询问并记录病史，有针对性地进行体格检查，并将有关资料保留存档。
1.2.2 细胞遗传学检查 取外周血种入1640培养液按常规淋巴细胞培养和制片，G显带分析30个分裂相，必要时做C带分析，嵌合体患者至少分析80个分裂相，凡涉及染色体关键片段定位的，均做高分辨染色体分析。
1.2.3 SRY基因检测 常规制备DNA模板，设置正常男、女对照组，PCR试剂盒由上海医学遗传研究所提供，按说明书配制反应体系，扩增反应在DNA热循环仪中进行，在2%琼酯糖凝胶中电泳，紫外透射光下观察结果，正常男性对照样本应出现161 bp的SRY基因扩增带，女性则无。
2 结果
2.1 染色体分析 检出染色体异常45例，其中常染色体异常7例，占异常总数的15.6%。性染色体异常30例，占66.7%，性反转核型8例，占17.8%。克氏综合征染色体异常率最高，共20例，占异常总数的44.4%，其次为性反转综合征8例，占17.8%。染色体异常类型及主要症状见表1。
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2.2 SRY基因分析 8例性反转综合征患者，表型男，染色体核型46 xx， SRY(+)2例；表型男，核型46 xx，SRY(-)1例。表型女，核型46 xy，SRY(+)2例；表型女，核型为46 xy，SRY(-)3例。
表1 45例染色体异常核型及主要症状表 类别
异常核型
n
异常率
(%)
表型
主要症状
常染色体
46，xy,21 p+
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1
2.2
男
性功能障碍，不育
结构异常
46，xy,3 p-
1
2.2
男
小睾丸、小阴茎
46,xx,rob(13，13)
1
2.2
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男
阴蒂肥大，尿道下裂
46,xx,t(1，17)(p34,q25)△
1
2.2
女
继发闭经，宫体小
性染色体
46,x,del(x)(q12-qter)
2
4.4
女
, 百拇医药
幼稚型子宫、无卵巢
结构异常
46,x,del(y)(q12-qter)
1
2.2
男
小睾丸、无精子
性染色体
45,xo
2
4.4
女
Turner综合征
, 百拇医药
数目异常
47,xxy
14
31.1
男
克氏综合征
47,xyy
1
2.2
男
性别异常
染色体
46,xy,135
, 百拇医药
1
2.2
男
第二性征不发育
形态异常
46,xy,(y≥18)
3
6.7
男
小阴茎、小睾丸
46,xy,(1)(qh+)
1
2.2
, 百拇医药
男
无精子、睾丸正常大小
嵌合体
46,xy/47,xxy
5
11.1
男
克氏综合征
数目异常
46,xx/47,xxy
1
2.2
男
, 百拇医药
克氏综合征
45,xo/46,xy
1
2.2
男
尿道下裂，左侧睾丸缺如
46,xy/45,xy,-9
1
2.2
男
先天性睾丸发育不全
性反转
46,xy
, 百拇医药
5
11.1
女
性反转综合征
核型
46,xx
3
6.7
男
性反转综合征
△为国内首报核型
3 讨论
男性原发性不育，以克氏综合征发病率最高，染色体异常率为25.6%(20/78)，与文献报道的2.2%～33%[1]相近。该综合征是常见的睾丸分化异常疾病，也是导致男性性机能低下及不育的病因之一。一般认为此类患者因睾丸发育受多余的X染色体影响，曲细精管上皮细胞玻璃样变性和纤维化，造成生精上皮死亡而导致不育。本病属性染色体疾病，因此外周血染色体检查是确诊的唯一可靠手段。有资料报道，男性不育患者中YRRM2基因缺陷，可造成男子无精或少精，是导致男性不育的重要因素。
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闭经是女性性功能异常的一个重要标志，除进行临床、内分泌功能等项检查外，染色体检查是当前不可缺少的诊断方法。本文原发及继发闭经患者54例，检出5例染色体异常核型，异常率为9.3%。其中2例为Turner综合征，2例为Xq12-qter缺失，1例为罗氏(rob.)易位。染色体异常可引起原发闭经已成共识，而继发闭经较少见，本组1例46，xx.rob(13，13)患者，临床表现为继发闭经4年，宫体小于正常。因此，在除去各种疾病或功能失调引起的继发闭经外，不能忽略了细胞遗传学分析的重要性。
性别的决定可能涉及到性染色体及常染色体上多个基因的共同作用。目前，常染色体上的基因缺失或异常可以引起性反转或性发育异常已越来越受到人们重视。本研究发现一例性别不明患儿，染色体核型为46,xx,t(1，17)(p34,q25)，17q和1p34发生平衡易位导致性别发育异常在国内还未见报道。此患儿的表型异常可能是断点附近遗传物质微小的丢失、位置效应或基因突变，其临床资料支持了Chapell[2]的假设。
, 百拇医药
性反转综合征包括46,xx男性和46,xy女性，患者的染色体核型与其表型相反。近年来研究表明定位于Y染色体短臂上的性别决定区基因SRY(睾丸决定因素)，在人类的性别决定中起主导作用，SRY基因的突变、缺失将导致性反转。本文采用PCR技术检测SRY基因，确定了8名性别不明患者的真实性别。5例SRY基因与表型相符而与核型不符的患者中3例为46，xy，SRY(-)，表型女性，睾丸缺如，表现出染色体性别与性腺性别不相符的性反转综合征特征。患者虽有Y染色体，但无SRY基因片段，从而引起睾丸分化发育的失败。因此，该病发生性反转的机理是缺失SRY基因所致。另2例核型46,xx，男性表型患者，有SRY基因，其机理可能是，父源染色体减数分裂过程中发现了xp-yp不等交换，含有睾丸决定因子的片段转移至x染色体短臂上[3]，性别的染色体决定基础被破坏，使女性核型个体表现为男性。其余3例，SRY基因与表型不符的患者，其性反转的出现，可能是由于SRY基因中存在点突变或参与性别发育的其它相关基因发生突变，不受性染色体SRY基因的调控，从而出现基因型与表型不符的现象。
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作者简介：张 立，女，40岁，助理研究员
余元勋，男，54岁，博士，研究员
参考文献
[1] 孙 源.1074例男性不育症患者细胞遗传学分析.中华医学遗传学杂志， 1997，14(2)：121.
[2] La chapell A. Evidence for the existence of an antosomal testis determining gene. TDFA. Gyto-genet cell Genet, 1987，46:605A.
[3] Dyke DC, Hanson JW, Moose JW, et al. Clinical management issues in males with sex chromosomal mosaicism and discordant pnenotype/sex chromosomal patterns. Clin pediatr,1991，30(1)：15～21.
收稿日期 1998-12-16, 百拇医药
单位：安徽省优生优育遗传医学中心， 安徽 合肥 230031
关键词：性别发育异常；病因；染色体；SRY基因
疾病控制杂志990107
【摘要】 目的 从医学遗传学角度探讨性别发育异常的病因。 方法 采用外周血淋巴细胞培养技术及PCR基因诊断技术，对241例性发育异常患者进行染色体检查及SRY基因检测。 结果 发现染色体异常核型45例，异常率18.7%，其中常染色体异常7例，占异常总数的15.6%，性染色体异常30例，占66.7%，性反转核型8例，占17.8%。在性反转综合征中，SRY基因与表型相符5例，不符3例。 结论 染色体异常、SRY基因的改变是导致性别发育异常的重要原因之一，对该类患者进行细胞遗传学和分子遗传学检测，有助于病因诊断及临床处理。
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【中图分类号】 R596.02；R691.1； 【文献标识码】 A 【文章编号】 1008-6013(1999)01-0019-02R711.1
A genetics study on the cause of sexual development abnormality in Anhui Province
Zhang Li, Li Jianping, Yu Yuanxun, Xie Xiangnong.
Anhui Medical Genetic Center of Improving Birth Outcome and Child Development， Hefei 230031， China
【Abstract】 Objective To study the cause of sexual development abnormality in respect of medical genetics. Method Chromosome and SRY gene were detected with peripheral blood lymphocytic culture and PCR gene diagnosis on 241 patients with abnormally sexual development. Results There were 45(18.67%) chromosome abnormalities of karyotype. Among all abnormalities, autosomal abnormalities accounted for 15.6%, sex chromosome abnormalities, 66.7% and karyotype of sexual reversion, 17.8%. On sexual reversion syndrome, SRY gene was in accordance with phenotype in 5 patients and wasn't in accordance with phenotype in 3 patients. Conclusions Chromosome abnormalities and SRY gene change were one of the important factors resulting in sexual development abnormalities, detection of this kind of patients with the methods of cytogenetics and molecular genetics is helpful to etiological diagnosis and clinical treatment.
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【Key words】 sexual development abnormelity; cause of disease; chromosome; SRY gene
从医学遗传学角度探讨性别异常的发生并研究染色体异常、SRY基因与表型的关系，对防治性别异常疾病、产前诊断及优生优育等都具有重要意义。近年来我们对241例具有性别不明、男性原发性不育及女性原发及继发闭经患者，分别进行了细胞遗传学和PCR-SRY基因检测，现报告如下。
1 对象与方法
1.1 对象 病例来源于1989年1月～1998年12月安徽地区各大医院妇产科、泌尿外科、小儿科及本中心等初诊后就诊的病人，共241例。其中，男性原发性不育78例，女性原发及继发闭经54例，性别不明及第二性征不发育的109例。
1.2 方法
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1.2.1 资料收集 结合咨询者以往的病历以及各种检查报告单，详细询问并记录病史，有针对性地进行体格检查，并将有关资料保留存档。
1.2.2 细胞遗传学检查 取外周血种入1640培养液按常规淋巴细胞培养和制片，G显带分析30个分裂相，必要时做C带分析，嵌合体患者至少分析80个分裂相，凡涉及染色体关键片段定位的，均做高分辨染色体分析。
1.2.3 SRY基因检测 常规制备DNA模板，设置正常男、女对照组，PCR试剂盒由上海医学遗传研究所提供，按说明书配制反应体系，扩增反应在DNA热循环仪中进行，在2%琼酯糖凝胶中电泳，紫外透射光下观察结果，正常男性对照样本应出现161 bp的SRY基因扩增带，女性则无。
2 结果
2.1 染色体分析 检出染色体异常45例，其中常染色体异常7例，占异常总数的15.6%。性染色体异常30例，占66.7%，性反转核型8例，占17.8%。克氏综合征染色体异常率最高，共20例，占异常总数的44.4%，其次为性反转综合征8例，占17.8%。染色体异常类型及主要症状见表1。
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2.2 SRY基因分析 8例性反转综合征患者，表型男，染色体核型46 xx， SRY(+)2例；表型男，核型46 xx，SRY(-)1例。表型女，核型46 xy，SRY(+)2例；表型女，核型为46 xy，SRY(-)3例。
表1 45例染色体异常核型及主要症状表 类别
异常核型
n
异常率
(%)
表型
主要症状
常染色体
46，xy,21 p+
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1
2.2
男
性功能障碍，不育
结构异常
46，xy,3 p-
1
2.2
男
小睾丸、小阴茎
46,xx,rob(13，13)
1
2.2
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男
阴蒂肥大，尿道下裂
46,xx,t(1，17)(p34,q25)△
1
2.2
女
继发闭经，宫体小
性染色体
46,x,del(x)(q12-qter)
2
4.4
女
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幼稚型子宫、无卵巢
结构异常
46,x,del(y)(q12-qter)
1
2.2
男
小睾丸、无精子
性染色体
45,xo
2
4.4
女
Turner综合征
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数目异常
47,xxy
14
31.1
男
克氏综合征
47,xyy
1
2.2
男
性别异常
染色体
46,xy,135
, 百拇医药
1
2.2
男
第二性征不发育
形态异常
46,xy,(y≥18)
3
6.7
男
小阴茎、小睾丸
46,xy,(1)(qh+)
1
2.2
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男
无精子、睾丸正常大小
嵌合体
46,xy/47,xxy
5
11.1
男
克氏综合征
数目异常
46,xx/47,xxy
1
2.2
男
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克氏综合征
45,xo/46,xy
1
2.2
男
尿道下裂，左侧睾丸缺如
46,xy/45,xy,-9
1
2.2
男
先天性睾丸发育不全
性反转
46,xy
, 百拇医药
5
11.1
女
性反转综合征
核型
46,xx
3
6.7
男
性反转综合征
△为国内首报核型
3 讨论
男性原发性不育，以克氏综合征发病率最高，染色体异常率为25.6%(20/78)，与文献报道的2.2%～33%[1]相近。该综合征是常见的睾丸分化异常疾病，也是导致男性性机能低下及不育的病因之一。一般认为此类患者因睾丸发育受多余的X染色体影响，曲细精管上皮细胞玻璃样变性和纤维化，造成生精上皮死亡而导致不育。本病属性染色体疾病，因此外周血染色体检查是确诊的唯一可靠手段。有资料报道，男性不育患者中YRRM2基因缺陷，可造成男子无精或少精，是导致男性不育的重要因素。
, http://www.100md.com
闭经是女性性功能异常的一个重要标志，除进行临床、内分泌功能等项检查外，染色体检查是当前不可缺少的诊断方法。本文原发及继发闭经患者54例，检出5例染色体异常核型，异常率为9.3%。其中2例为Turner综合征，2例为Xq12-qter缺失，1例为罗氏(rob.)易位。染色体异常可引起原发闭经已成共识，而继发闭经较少见，本组1例46，xx.rob(13，13)患者，临床表现为继发闭经4年，宫体小于正常。因此，在除去各种疾病或功能失调引起的继发闭经外，不能忽略了细胞遗传学分析的重要性。
性别的决定可能涉及到性染色体及常染色体上多个基因的共同作用。目前，常染色体上的基因缺失或异常可以引起性反转或性发育异常已越来越受到人们重视。本研究发现一例性别不明患儿，染色体核型为46,xx,t(1，17)(p34,q25)，17q和1p34发生平衡易位导致性别发育异常在国内还未见报道。此患儿的表型异常可能是断点附近遗传物质微小的丢失、位置效应或基因突变，其临床资料支持了Chapell[2]的假设。
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性反转综合征包括46,xx男性和46,xy女性，患者的染色体核型与其表型相反。近年来研究表明定位于Y染色体短臂上的性别决定区基因SRY(睾丸决定因素)，在人类的性别决定中起主导作用，SRY基因的突变、缺失将导致性反转。本文采用PCR技术检测SRY基因，确定了8名性别不明患者的真实性别。5例SRY基因与表型相符而与核型不符的患者中3例为46，xy，SRY(-)，表型女性，睾丸缺如，表现出染色体性别与性腺性别不相符的性反转综合征特征。患者虽有Y染色体，但无SRY基因片段，从而引起睾丸分化发育的失败。因此，该病发生性反转的机理是缺失SRY基因所致。另2例核型46,xx，男性表型患者，有SRY基因，其机理可能是，父源染色体减数分裂过程中发现了xp-yp不等交换，含有睾丸决定因子的片段转移至x染色体短臂上[3]，性别的染色体决定基础被破坏，使女性核型个体表现为男性。其余3例，SRY基因与表型不符的患者，其性反转的出现，可能是由于SRY基因中存在点突变或参与性别发育的其它相关基因发生突变，不受性染色体SRY基因的调控，从而出现基因型与表型不符的现象。
, 百拇医药
作者简介：张 立，女，40岁，助理研究员
余元勋，男，54岁，博士，研究员
参考文献
[1] 孙 源.1074例男性不育症患者细胞遗传学分析.中华医学遗传学杂志， 1997，14(2)：121.
[2] La chapell A. Evidence for the existence of an antosomal testis determining gene. TDFA. Gyto-genet cell Genet, 1987，46:605A.
[3] Dyke DC, Hanson JW, Moose JW, et al. Clinical management issues in males with sex chromosomal mosaicism and discordant pnenotype/sex chromosomal patterns. Clin pediatr,1991，30(1)：15～21.
收稿日期 1998-12-16, 百拇医药