病毒感染后肌炎动物模型的肌酶变化☆
作者：吴文涛* 侯熙德△
单位：* 南京军区南京总医院神经内科(210002)；△ 南京医科大学第一附属医院神经内科
关键词：病毒感染后肌炎；动物模型；肌酶谱
中国神经精神疾病杂志990117 【摘要】 目的 探讨肌酶谱对病毒感染后肌炎的诊断价值并分析病毒感染性肌炎的发病特点。方法 分别用0.1 mL,0.3 mL毒力为10-5TCID50的柯萨奇病毒B1感染豚鼠建立肌炎模型，检测了两组病毒感染前后豚鼠的肌酶：磷酸肌酸激酶(CPK)，乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)。结果 病毒感染3周后肌酶谱较病毒感染前显著升高(P<0.01)，与豚鼠症状一致。病毒感染5周后与3周后的肌酶谱无显著差异(P<0.05)，但两组肌酶谱升高阳性率有显著差异(P>0.05)，其中以CPK升高幅度最大。结论 ①肌酶谱对病毒感染后肌炎具有较高的诊断价值。②病毒感染3周后即见肌酶升高提示病毒感染后肌炎呈急性或亚急性起病。
, 百拇医药
本研究通过用不同量的柯萨奇病毒B1(CVB1)感染辅以兔肌匀浆(阈下剂量)加完全弗氏佐剂免疫正常豚鼠，建立肌炎动物模型，并对其肌酶谱(磷酸肌酸激酶CPK，乳酸脱氢酶LDH和谷草转氨酶AST)进行了分析，得到一些有意义的结果。
1 材料和方法
1.1 PM动物模型的建立 60只短毛英国种豚鼠(南京医科大学动物中心提供)，体重300～500 g，雌雄各半随机分为两组。A组24只，B组36只。A、B两组分别用0.1mL,0.3mL毒力为10-5TCID50的CVB1一次腹腔注射感染豚鼠，并且每只每周向颈部或背部皮下注射完全弗氏佐剂0.15mL加兔肌匀浆0.15mL(内含干重抗原3 mg，该剂量经实验证实多次注射不致病[1])1次。
1.2 肌酶谱的检测 病毒感染前和病毒感染3、5周后自心脏穿刺取血，每次取血2 mL盛于干净试管，离心5 min(3000 r/min)，取血清0.5mL，应用OLYMPUS-AU800型自动生化仪检测，试剂由Beckman公司出品。
, 百拇医药
2 结果
病毒感染后第3周观察两组均有部分豚鼠出现倦怠，食欲下降，活动减少，生长缓慢，双下肢肌力弱。至第5周四肢对称无力，行走缓慢摇摆。病毒感染前及感染3、5周后检测豚鼠肌酶谱，结果见表1。
表1 病毒感染前后的豚鼠肌酶谱(IU/L)
感染前
3周后
5周后
CPK
391.5±237.5
2734.2±1308.21)
3263.3±696.6
, 百拇医药
LDH
200.2±93.8
382.9±124.21)
313.1±116.7
AST
66.4±17.9
207.2±81.41)
112.3±44.7
1)与病毒感染前肌酶比较，P<0.01
由表1可知，病毒感染3周后肌酶谱继续明显升高，其中以CPK升高幅度最大，其次为AST，LDH。但感染5周后较感染3周后肌酶谱继续升高不明显，t检验无显著差异。其中LDH，AST感染5周后有所下降，与3周后的部分血标本轻度溶血有关。病毒感染5周后CPK升高阳性率为29.4%(15/51，51份有效豚鼠血清中有15份升高，其它标本有明显溶血)，LDH为7.8%(4/51)，AST为15.7%(8/51)。此时CPK最高达7660 IU/L， LDH最高值为539.9 IU/L，AST最高值为189.1 IU/L。以上结果得出，CPK升高率最高，升高幅度最大。A，B组豚鼠肌酶谱升高情况见表2。
, 百拇医药
表2 两组豚鼠病毒感染后肌酶升高率的比较 分组
3周后1)
5周后2)
A
14.3%(1/7)
11.8(2/17)
B
33.3%(3/9)
38.2%(13/34)3)
注：1) 病毒感染3周后为减少心脏穿刺取血致豚鼠死亡，A组随机检测了7只豚鼠有效血清，B组检测了9只； 2) 5周后因死亡和标本溶血，A组的有效血清为17份，B组为34份；3) 与A组5周后比较，P<0.05
, http://www.100md.com
由表2可知，5周后B组肌酶升高阳性率明显高于A组。
3 讨论
肌酶谱的检测在国外肌炎动物模型研究中尚未见采用。我们认为：肌酶谱一般反映全身肌肉病变，可作为早期诊断依据且简便易行，创伤小可重复多次检查，有助于判断病情变化，并可作为确定肌炎模型建立与否的主要依据之一。本研究选用易于取血的豚鼠做实验也基于此。肌酶谱的升高多在病程的活动期，CPK，LDH，AST广泛存在于肌细胞中，当肌纤维炎性病变时，肌细胞被破坏或肌细胞膜通透性增高，上述肌酶就被释放至血清中[2]。本实验，豚鼠的肌酶升高幅度以CPK的升高幅度最大，特异性最高。
本实验中，豚鼠肌酶谱在病毒感染后第3周已见升高，其中CPK最高已达7660IU/L，但第5周肌酶谱继续升高不明显且阳性率也未见上升。结合豚鼠症状及病理改变进行性加重不明显，提示：1.病毒感染诱发的肌炎主要呈急性或亚急性起病，与其它原因诱发的肌炎呈亚急性或慢性起病的特点不同[3]。2.病毒感染诱发的肌炎可能存在自限性，有待进一步研究。
, 百拇医药
不同量的病毒感染豚鼠组的肌酶谱升高阳性率均不高(本文实验组中最高为38.2%)，但病毒感染5周后存在明显差异，结合有关研究结果，提示不仅病毒的血清型，毒力和感染量与肌炎发病相关，且与动物种类，年龄，体重等因素有关[4，5]，说明肌炎的发病是多因性的。
☆ 江苏省教委自然科学基金资助课题(批准号：教95046)
参考文献
1 吴文涛，储旭华，侯熙德.柯萨奇病毒诱发实验性多发性肌炎的初步研究.卒中与神经疾病，1996，3(4)：176
2 Pearson CM, Bohan A. The spectrum of polymyositis and dermatomyositis. Medical Clinics of North America, 1977，61(2):439
, 百拇医药
3 侯熙德，蔡 昭，沈鸣九，等.多发性肌炎动物模型的研究.中国实验免疫学杂志，1993，5(5)：3
4 Ray CG, Minnich LL, Johnson PC. Selective polymyositis induced by coxackievirus B1 in mice. The Journal of Infectious Disease, 1979， 140(2):239
5 Hays AP, Gamboa ET. Acute viral myositis. In:Engel AG and Banker BQ (ed). Myology.New York: Mackrow\|hill book company, 1986. 1456-1457
(1998-04-05收稿), 百拇医药(吴文涛* 侯熙德△)
单位：* 南京军区南京总医院神经内科(210002)；△ 南京医科大学第一附属医院神经内科
关键词：病毒感染后肌炎；动物模型；肌酶谱
中国神经精神疾病杂志990117 【摘要】 目的 探讨肌酶谱对病毒感染后肌炎的诊断价值并分析病毒感染性肌炎的发病特点。方法 分别用0.1 mL,0.3 mL毒力为10-5TCID50的柯萨奇病毒B1感染豚鼠建立肌炎模型，检测了两组病毒感染前后豚鼠的肌酶：磷酸肌酸激酶(CPK)，乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)。结果 病毒感染3周后肌酶谱较病毒感染前显著升高(P<0.01)，与豚鼠症状一致。病毒感染5周后与3周后的肌酶谱无显著差异(P<0.05)，但两组肌酶谱升高阳性率有显著差异(P>0.05)，其中以CPK升高幅度最大。结论 ①肌酶谱对病毒感染后肌炎具有较高的诊断价值。②病毒感染3周后即见肌酶升高提示病毒感染后肌炎呈急性或亚急性起病。
, 百拇医药
本研究通过用不同量的柯萨奇病毒B1(CVB1)感染辅以兔肌匀浆(阈下剂量)加完全弗氏佐剂免疫正常豚鼠，建立肌炎动物模型，并对其肌酶谱(磷酸肌酸激酶CPK，乳酸脱氢酶LDH和谷草转氨酶AST)进行了分析，得到一些有意义的结果。
1 材料和方法
1.1 PM动物模型的建立 60只短毛英国种豚鼠(南京医科大学动物中心提供)，体重300～500 g，雌雄各半随机分为两组。A组24只，B组36只。A、B两组分别用0.1mL,0.3mL毒力为10-5TCID50的CVB1一次腹腔注射感染豚鼠，并且每只每周向颈部或背部皮下注射完全弗氏佐剂0.15mL加兔肌匀浆0.15mL(内含干重抗原3 mg，该剂量经实验证实多次注射不致病[1])1次。
1.2 肌酶谱的检测 病毒感染前和病毒感染3、5周后自心脏穿刺取血，每次取血2 mL盛于干净试管，离心5 min(3000 r/min)，取血清0.5mL，应用OLYMPUS-AU800型自动生化仪检测，试剂由Beckman公司出品。
, 百拇医药
2 结果
病毒感染后第3周观察两组均有部分豚鼠出现倦怠，食欲下降，活动减少，生长缓慢，双下肢肌力弱。至第5周四肢对称无力，行走缓慢摇摆。病毒感染前及感染3、5周后检测豚鼠肌酶谱，结果见表1。
表1 病毒感染前后的豚鼠肌酶谱(IU/L)
感染前
3周后
5周后
CPK
391.5±237.5
2734.2±1308.21)
3263.3±696.6
, 百拇医药
LDH
200.2±93.8
382.9±124.21)
313.1±116.7
AST
66.4±17.9
207.2±81.41)
112.3±44.7
1)与病毒感染前肌酶比较，P<0.01
由表1可知，病毒感染3周后肌酶谱继续明显升高，其中以CPK升高幅度最大，其次为AST，LDH。但感染5周后较感染3周后肌酶谱继续升高不明显，t检验无显著差异。其中LDH，AST感染5周后有所下降，与3周后的部分血标本轻度溶血有关。病毒感染5周后CPK升高阳性率为29.4%(15/51，51份有效豚鼠血清中有15份升高，其它标本有明显溶血)，LDH为7.8%(4/51)，AST为15.7%(8/51)。此时CPK最高达7660 IU/L， LDH最高值为539.9 IU/L，AST最高值为189.1 IU/L。以上结果得出，CPK升高率最高，升高幅度最大。A，B组豚鼠肌酶谱升高情况见表2。
, 百拇医药
表2 两组豚鼠病毒感染后肌酶升高率的比较 分组
3周后1)
5周后2)
A
14.3%(1/7)
11.8(2/17)
B
33.3%(3/9)
38.2%(13/34)3)
注：1) 病毒感染3周后为减少心脏穿刺取血致豚鼠死亡，A组随机检测了7只豚鼠有效血清，B组检测了9只； 2) 5周后因死亡和标本溶血，A组的有效血清为17份，B组为34份；3) 与A组5周后比较，P<0.05
, http://www.100md.com
由表2可知，5周后B组肌酶升高阳性率明显高于A组。
3 讨论
肌酶谱的检测在国外肌炎动物模型研究中尚未见采用。我们认为：肌酶谱一般反映全身肌肉病变，可作为早期诊断依据且简便易行，创伤小可重复多次检查，有助于判断病情变化，并可作为确定肌炎模型建立与否的主要依据之一。本研究选用易于取血的豚鼠做实验也基于此。肌酶谱的升高多在病程的活动期，CPK，LDH，AST广泛存在于肌细胞中，当肌纤维炎性病变时，肌细胞被破坏或肌细胞膜通透性增高，上述肌酶就被释放至血清中[2]。本实验，豚鼠的肌酶升高幅度以CPK的升高幅度最大，特异性最高。
本实验中，豚鼠肌酶谱在病毒感染后第3周已见升高，其中CPK最高已达7660IU/L，但第5周肌酶谱继续升高不明显且阳性率也未见上升。结合豚鼠症状及病理改变进行性加重不明显，提示：1.病毒感染诱发的肌炎主要呈急性或亚急性起病，与其它原因诱发的肌炎呈亚急性或慢性起病的特点不同[3]。2.病毒感染诱发的肌炎可能存在自限性，有待进一步研究。
, 百拇医药
不同量的病毒感染豚鼠组的肌酶谱升高阳性率均不高(本文实验组中最高为38.2%)，但病毒感染5周后存在明显差异，结合有关研究结果，提示不仅病毒的血清型，毒力和感染量与肌炎发病相关，且与动物种类，年龄，体重等因素有关[4，5]，说明肌炎的发病是多因性的。
☆ 江苏省教委自然科学基金资助课题(批准号：教95046)
参考文献
1 吴文涛，储旭华，侯熙德.柯萨奇病毒诱发实验性多发性肌炎的初步研究.卒中与神经疾病，1996，3(4)：176
2 Pearson CM, Bohan A. The spectrum of polymyositis and dermatomyositis. Medical Clinics of North America, 1977，61(2):439
, 百拇医药
3 侯熙德，蔡 昭，沈鸣九，等.多发性肌炎动物模型的研究.中国实验免疫学杂志，1993，5(5)：3
4 Ray CG, Minnich LL, Johnson PC. Selective polymyositis induced by coxackievirus B1 in mice. The Journal of Infectious Disease, 1979， 140(2):239
5 Hays AP, Gamboa ET. Acute viral myositis. In:Engel AG and Banker BQ (ed). Myology.New York: Mackrow\|hill book company, 1986. 1456-1457
(1998-04-05收稿), 百拇医药(吴文涛* 侯熙德△)