益肾补骨液的稳定性研究
作者：张水寒 陈宗宪 杨永华
单位：张水寒 陈宗宪 杨永华(湖南省中医药研究院 长沙410006)
关键词：益肾补骨液；稳定性；结合蒽醌；化学动力学
湖南中医学院学报/990108 提要 采用初均速试验对益肾补骨液进行了稳定性考察，依样品中结合蒽醌含量变化求得室温下有效期(t0.9)为1.9ly，提示益肾补骨液在室温下稳定性良好。
中国图书分类号 R927.11
益肾补骨液系卫生部药品标准中药成方制剂十册收载的品种，具有滋补肝肾，强壮筋骨之功效，用于肝肾不足，劳伤腰痛，筋骨折伤。为控制其内在质量，保证该药滋补功效，我们参照《中药新药研制与申报》[1]中关于加速试验法及应用的方法对该药进行了初均速加温试验，并对其稳定性进行了研究。结果表明，益肾补骨液在室温下稳定性良好。
, http://www.100md.com
1 实验材料
仪器：Lambdalb型可见紫外分光光度计(美国PE公司)，恒温加热装置(自制)。
药物及对照品：1，8-二羟基蒽醌对照品由中国药品生物制品检定所提供，化学试剂为国产分析纯或优级纯，益肾补骨液由我院剂改室制备(批号980420)。
2 方法与结果
2.1 方法
采用初均速加速破坏试验法将益肾补骨液同批号样品10瓶，每瓶取10ml置于安瓿瓶中，密塞，放置于恒温加热盆里，按表1设置温度和时间加热，到时间后立即取出，用冷水冷却至室温，放于干燥器中备用。
表1 加速破坏试验条件设置 温度(℃)
95
, 百拇医药
90
85
80
75
70
65
60
55
50
恒温时间(h)
1
2
3
4
, 百拇医药
5
6
7
8
9
10
2.2 样品含量测定
2.2.1 比色波长的选择 按标准曲线制备项下方法，将待测液于Lambdalb型可见紫外分光光度计测得最大吸收度，结果表明λmax 504nm。
2.2.2 稳定性试验 吸取标准曲线制备项下的标准液2ml于具塞刻度试管中，水浴蒸干，加入5%NaOH-2%NH4OH混合碱液8ml溶解，自加入混合碱液时间起，以5%NaOH-2%NH4OH混合碱液为空白，在504nm处测定吸收值，结果表明，在2h内吸收值稳定。
, 百拇医药
2.2.3 标准曲线的制备 准确称取105℃干燥至恒重的1、8-二羟基蒽醌对照品10.00mg置50ml容量瓶中，用乙醚溶解并稀释至刻度，摇匀，准确吸取2.0ml置10ml容量瓶中，加乙醚至刻度即得40μg/ml的标准液。准确吸取标准液1、2、3、4、5ml，分别置干燥试管中，水浴蒸去乙醚，加5%NaOH-2%NH4OH混合碱液10ml，摇匀，放置30min，按选定的测定条件进行试验。求得回归方程：y＝-7.0619×10-3+3.8368×10-3x(y为吸收度，x为对照液的量)，相关系数r＝0.9992(n＝
5)。
2.2.4 含量测定 游离蒽醌的含量测定：准确吸取经加速破坏的各样品液1.0ml，置分液漏斗中，加无水乙醚10ml，萃取。乙醚萃取液用5%NaOH-2%NH4OH混合碱液萃取2次(5ml，3ml)，将混合碱液萃取液分别置10ml具塞刻度试管中，沸水浴上加热4min，挥去乙醚，用冷水冷却至室温，补加氨水至原体积，摇匀，放置30min。按选定的测定条件测定其吸收度，并计算其含量。
, 百拇医药
总蒽醌含量测定：准确吸取前述各样品液1.0ml于10ml具塞刻度试管中，加蒸馏水至1.5ml，加40%FeCl3.6H2O溶液1ml，沸水浴加热20min，再加入HCl 0.5ml，并于沸水浴上加热水解30min，并不断振摇，完毕，立即用冷水冷却至室温，倾入分液漏斗中，加10ml乙醚萃取，萃取液用5%NaOH-2%NH4OH萃取2次(5.0ml，3.0ml)，余同前操作，计算其含量。
结合蒽醌的含量：测得总蒽醌与游离蒽醌之差即为结合蒽醌的含量。以上各样品中，游离蒽醌、总蒽醌、结合蒽醌的含量测定结果见表2。
表2 益肾补骨液加速试验中大黄蒽醌含量测定 温度(k)
恒温时间(h)
总蒽醌(μg/ml)
, 百拇医药
游离蒽醌(μg/ml)
结合蒽醌(μg/ml)
结合蒽醌含量(%)
368
1
204.8483
81.9594
122.8889
90.26
363
2
205.0829
, http://www.100md.com
79.8222
125.2607
91.99
358
3
205.3696
78.9361
126.4335
92.86
353
4
205.4477
77.5808
, http://www.100md.com
127.8669
93.91
348
5
205.8908
76.7207
129.1701
94.87
343
6
205.9951
75.6000
130.3951
, 百拇医药
95.77
338
7
205.9951
74.1925
131.8026
96.80
333
8
206.5945
73.6713
132.9232
97.63
, http://www.100md.com
328
9
206.6206
71.8729
134.7477
98.97
323
10
206.6467
70.7502
135.8945
99.81
293
, 百拇医药
11
206.7509
70.5958
136.1551
2.3 结果 以结合蒽醌的初始浓度为Co，将在不同温度(Ti)和相应时间(ti)时所测浓度分别转换成残存率，并取均值Ci，按下式计算不同温度时的初速度(Voi)，Voi＝(Co-Ci)/ti。
以lgVoi对1/T回归，得直线回归方程lgVoi＝a+b/Ti和直线相关系数r，再根据Arrhenius公式lgVoi＝lgA-E/RTi求出反应活化能E。式中R为气体常数，R＝8.314J.mol-1K-1，E＝
-2.303Rb。由直线回归方程推算室温(293K)下的lgV293K，从反对数求得V293K。由Voi＝(Co-Ci)/ti求出室温贮存期，即计算T＝293K时100%-C%＝10%时的时间t，得t20℃0.9。
, 百拇医药
数据处理结果： lgVoi＝15.05489-5935.4953/Ti， r＝-0.9734，E＝13669.45J.mol-1，V295K＝6.27×10-6h-1t20℃0.9＝1.91年。
3 小结
应用初均速法设计，采用分光光度法测定益肾补骨液中大黄总蒽醌的含量，结果变化不大，无法预测其稳定性；而根据结合蒽醌的含量变化预测稳定性是可行的，计算结果本品可放置1.91年，提示本品使用期限符合1年半的规定。
初均速法预测其有效期，为使用和贮存该药提供参考依据，其比经典恒温法取样次数少，计算简洁，不易产生误差。
参考文献
[1] 王北婴.中药新药研制与申报.北京：中国中医药出版社，1995.199
(收稿日期 1998-10-12)
, 百拇医药
单位：张水寒 陈宗宪 杨永华(湖南省中医药研究院 长沙410006)
关键词：益肾补骨液；稳定性；结合蒽醌；化学动力学
湖南中医学院学报/990108 提要 采用初均速试验对益肾补骨液进行了稳定性考察，依样品中结合蒽醌含量变化求得室温下有效期(t0.9)为1.9ly，提示益肾补骨液在室温下稳定性良好。
中国图书分类号 R927.11
益肾补骨液系卫生部药品标准中药成方制剂十册收载的品种，具有滋补肝肾，强壮筋骨之功效，用于肝肾不足，劳伤腰痛，筋骨折伤。为控制其内在质量，保证该药滋补功效，我们参照《中药新药研制与申报》[1]中关于加速试验法及应用的方法对该药进行了初均速加温试验，并对其稳定性进行了研究。结果表明，益肾补骨液在室温下稳定性良好。
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1 实验材料
仪器：Lambdalb型可见紫外分光光度计(美国PE公司)，恒温加热装置(自制)。
药物及对照品：1，8-二羟基蒽醌对照品由中国药品生物制品检定所提供，化学试剂为国产分析纯或优级纯，益肾补骨液由我院剂改室制备(批号980420)。
2 方法与结果
2.1 方法
采用初均速加速破坏试验法将益肾补骨液同批号样品10瓶，每瓶取10ml置于安瓿瓶中，密塞，放置于恒温加热盆里，按表1设置温度和时间加热，到时间后立即取出，用冷水冷却至室温，放于干燥器中备用。
表1 加速破坏试验条件设置 温度(℃)
95
, 百拇医药
90
85
80
75
70
65
60
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恒温时间(h)
1
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2.2 样品含量测定
2.2.1 比色波长的选择 按标准曲线制备项下方法，将待测液于Lambdalb型可见紫外分光光度计测得最大吸收度，结果表明λmax 504nm。
2.2.2 稳定性试验 吸取标准曲线制备项下的标准液2ml于具塞刻度试管中，水浴蒸干，加入5%NaOH-2%NH4OH混合碱液8ml溶解，自加入混合碱液时间起，以5%NaOH-2%NH4OH混合碱液为空白，在504nm处测定吸收值，结果表明，在2h内吸收值稳定。
, 百拇医药
2.2.3 标准曲线的制备 准确称取105℃干燥至恒重的1、8-二羟基蒽醌对照品10.00mg置50ml容量瓶中，用乙醚溶解并稀释至刻度，摇匀，准确吸取2.0ml置10ml容量瓶中，加乙醚至刻度即得40μg/ml的标准液。准确吸取标准液1、2、3、4、5ml，分别置干燥试管中，水浴蒸去乙醚，加5%NaOH-2%NH4OH混合碱液10ml，摇匀，放置30min，按选定的测定条件进行试验。求得回归方程：y＝-7.0619×10-3+3.8368×10-3x(y为吸收度，x为对照液的量)，相关系数r＝0.9992(n＝
5)。
2.2.4 含量测定 游离蒽醌的含量测定：准确吸取经加速破坏的各样品液1.0ml，置分液漏斗中，加无水乙醚10ml，萃取。乙醚萃取液用5%NaOH-2%NH4OH混合碱液萃取2次(5ml，3ml)，将混合碱液萃取液分别置10ml具塞刻度试管中，沸水浴上加热4min，挥去乙醚，用冷水冷却至室温，补加氨水至原体积，摇匀，放置30min。按选定的测定条件测定其吸收度，并计算其含量。
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总蒽醌含量测定：准确吸取前述各样品液1.0ml于10ml具塞刻度试管中，加蒸馏水至1.5ml，加40%FeCl3.6H2O溶液1ml，沸水浴加热20min，再加入HCl 0.5ml，并于沸水浴上加热水解30min，并不断振摇，完毕，立即用冷水冷却至室温，倾入分液漏斗中，加10ml乙醚萃取，萃取液用5%NaOH-2%NH4OH萃取2次(5.0ml，3.0ml)，余同前操作，计算其含量。
结合蒽醌的含量：测得总蒽醌与游离蒽醌之差即为结合蒽醌的含量。以上各样品中，游离蒽醌、总蒽醌、结合蒽醌的含量测定结果见表2。
表2 益肾补骨液加速试验中大黄蒽醌含量测定 温度(k)
恒温时间(h)
总蒽醌(μg/ml)
, 百拇医药
游离蒽醌(μg/ml)
结合蒽醌(μg/ml)
结合蒽醌含量(%)
368
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204.8483
81.9594
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70.5958
136.1551
2.3 结果 以结合蒽醌的初始浓度为Co，将在不同温度(Ti)和相应时间(ti)时所测浓度分别转换成残存率，并取均值Ci，按下式计算不同温度时的初速度(Voi)，Voi＝(Co-Ci)/ti。
以lgVoi对1/T回归，得直线回归方程lgVoi＝a+b/Ti和直线相关系数r，再根据Arrhenius公式lgVoi＝lgA-E/RTi求出反应活化能E。式中R为气体常数，R＝8.314J.mol-1K-1，E＝
-2.303Rb。由直线回归方程推算室温(293K)下的lgV293K，从反对数求得V293K。由Voi＝(Co-Ci)/ti求出室温贮存期，即计算T＝293K时100%-C%＝10%时的时间t，得t20℃0.9。
, 百拇医药
数据处理结果： lgVoi＝15.05489-5935.4953/Ti， r＝-0.9734，E＝13669.45J.mol-1，V295K＝6.27×10-6h-1t20℃0.9＝1.91年。
3 小结
应用初均速法设计，采用分光光度法测定益肾补骨液中大黄总蒽醌的含量，结果变化不大，无法预测其稳定性；而根据结合蒽醌的含量变化预测稳定性是可行的，计算结果本品可放置1.91年，提示本品使用期限符合1年半的规定。
初均速法预测其有效期，为使用和贮存该药提供参考依据，其比经典恒温法取样次数少，计算简洁，不易产生误差。
参考文献
[1] 王北婴.中药新药研制与申报.北京：中国中医药出版社，1995.199
(收稿日期 1998-10-12)
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