在石蜡切片中检测ER、PR的体会
作者：吴惠茜 梁惠珍 车丽洪
单位：吴惠茜 梁惠珍 车丽洪(中山医科大学病理教研室，广州 510089)
关键词：抗原修复；免疫组织化学；受体；雌激素；受体；孕激素
临床与实验病理学杂志990237
中国图书分类号 R392.3
文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0181-02
检测组织切片上某些肿瘤细胞的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)，对指导临床内分泌治疗及推测肿瘤预后有重要意义。如何成功地检测肿瘤细胞内的ER、PR受体，是广大病理工作者最为关心的问题。一些医院由于种种原因，致使在染色过程中达不到理想的结果。针对存在的一些问题，我们收集了部分乳腺标本，对不同的固定时间、不同的抗原修复方法进行了比较和摸索，对如何提高ER、PR的检测率得出一些体会。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 新鲜良性乳腺组织2例；乳腺癌标本4例；鼠抗人ER、PR；S-P检测试剂盒(迈新公司即用型产品)。
1.2 方法 将标本分成5个时间组，投入10%福尔马林液中，分别固定4、8、16、24、48 h，然后按常规方法进行脱水、浸蜡、包埋。4 μm切片后，将切片贴在硅化处理过的载玻片上60℃烤片30～60 min。常规脱蜡至水。用0.01 mol*L-1 pH 6.0柠檬酸缓冲液进行抗原修复，按S-P法进行免疫组化染色。
1.3 染色方法 正常血清孵育10 min；滴加ER、PR单抗置4℃冰箱中过夜，PBS洗3次，每次3 min；加入二抗置37℃孵育10 min，PBS洗3次，每次3 min；加入S-P试剂37℃孵育10 min，PBS洗3次，每次3 min；镜下DAB显色；浅染苏木素；常规脱水、封片。
, 百拇医药
2 结果与讨论
阳性细胞为大小均匀的棕色颗粒，仅见于细胞核内。根据不同的固定时间，其结果基本相同(表1)。从表中可见，不同的固定时间对石蜡切片中显示ER、PR的结果没有明显的差异，并不会因为固定时间的长短，致使阳性结果反应不一，从而对检测ER、PR受体必须固定48 h以上的说法持不同的看法。常规的固定时间一般来说对ER、PR的检测影响并不大，无论固定时间的长短，所显示的结果基本上是一致的。我们的体会是标本必须及时固定，这有利于抗原的保存，防止抗原在组织细胞内弥散、丢失或失去免疫活性，从而确保ER、PR阳性的准确性。
表1 不同固定时间ER/PR显示结果 编号
ER/PR显示结果
4 h
8 h
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16 h
24 h
48 h
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抗原修复方法有多种，其中包括微波、高压、煮沸抗原修复法。我们选出几个不同固定时间的标本，用微波和煮沸方法进行了比较，结果见表2。
表2 ER/PR微波与煮沸比较 固定时间(h)
ER/PR结果
微波
煮沸
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从表中我们可以看到，用微波和煮沸处理的切片，经过免疫组化染色后，结果基本相同。但经微波处理的组织背景较淡，而煮沸处理的标本背景较深，甚至有时出现胞浆染色，而煮沸处理的切片阳性细胞定位好，背景清晰，见不到胞浆着色，因此我们认为用煮沸的方法来进行抗原修复效果更理想。我们对煮沸时间从5、10、20、30 min进行了探索。筛选出较为理想的煮沸时间(表3)。表3 不同的煮沸时间ER/PR结果显示 煮沸时间(min)
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ER/PR结果
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从染色的结果来判断，以30 min加热煮沸处理的切片ER阳性结果最好，比其他煮沸时间的阳性率要高、要强。但煮沸时间的长短对PR的结果影响不大，各种煮沸时间的结果均相同。综上所述，我们认为固定并非是影响ER、PR阳性结果的因素，及时的固定非常重要，抗原修复也是必不可少的。各实验室应根据各自的实验条件，选择合适的实验方法。
作者简介：吴惠茜，女，43岁，主管技师
收稿日期：1998-12-24, 百拇医药
单位：吴惠茜 梁惠珍 车丽洪(中山医科大学病理教研室，广州 510089)
关键词：抗原修复；免疫组织化学；受体；雌激素；受体；孕激素
临床与实验病理学杂志990237
中国图书分类号 R392.3
文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0181-02
检测组织切片上某些肿瘤细胞的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)，对指导临床内分泌治疗及推测肿瘤预后有重要意义。如何成功地检测肿瘤细胞内的ER、PR受体，是广大病理工作者最为关心的问题。一些医院由于种种原因，致使在染色过程中达不到理想的结果。针对存在的一些问题，我们收集了部分乳腺标本，对不同的固定时间、不同的抗原修复方法进行了比较和摸索，对如何提高ER、PR的检测率得出一些体会。
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1 材料和方法
1.1 材料 新鲜良性乳腺组织2例；乳腺癌标本4例；鼠抗人ER、PR；S-P检测试剂盒(迈新公司即用型产品)。
1.2 方法 将标本分成5个时间组，投入10%福尔马林液中，分别固定4、8、16、24、48 h，然后按常规方法进行脱水、浸蜡、包埋。4 μm切片后，将切片贴在硅化处理过的载玻片上60℃烤片30～60 min。常规脱蜡至水。用0.01 mol*L-1 pH 6.0柠檬酸缓冲液进行抗原修复，按S-P法进行免疫组化染色。
1.3 染色方法 正常血清孵育10 min；滴加ER、PR单抗置4℃冰箱中过夜，PBS洗3次，每次3 min；加入二抗置37℃孵育10 min，PBS洗3次，每次3 min；加入S-P试剂37℃孵育10 min，PBS洗3次，每次3 min；镜下DAB显色；浅染苏木素；常规脱水、封片。
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2 结果与讨论
阳性细胞为大小均匀的棕色颗粒，仅见于细胞核内。根据不同的固定时间，其结果基本相同(表1)。从表中可见，不同的固定时间对石蜡切片中显示ER、PR的结果没有明显的差异，并不会因为固定时间的长短，致使阳性结果反应不一，从而对检测ER、PR受体必须固定48 h以上的说法持不同的看法。常规的固定时间一般来说对ER、PR的检测影响并不大，无论固定时间的长短，所显示的结果基本上是一致的。我们的体会是标本必须及时固定，这有利于抗原的保存，防止抗原在组织细胞内弥散、丢失或失去免疫活性，从而确保ER、PR阳性的准确性。
表1 不同固定时间ER/PR显示结果 编号
ER/PR显示结果
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抗原修复方法有多种，其中包括微波、高压、煮沸抗原修复法。我们选出几个不同固定时间的标本，用微波和煮沸方法进行了比较，结果见表2。
表2 ER/PR微波与煮沸比较 固定时间(h)
ER/PR结果
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//从表中我们可以看到，用微波和煮沸处理的切片，经过免疫组化染色后，结果基本相同。但经微波处理的组织背景较淡，而煮沸处理的标本背景较深，甚至有时出现胞浆染色，而煮沸处理的切片阳性细胞定位好，背景清晰，见不到胞浆着色，因此我们认为用煮沸的方法来进行抗原修复效果更理想。我们对煮沸时间从5、10、20、30 min进行了探索。筛选出较为理想的煮沸时间(表3)。表3 不同的煮沸时间ER/PR结果显示 煮沸时间(min)
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ER/PR结果
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/从染色的结果来判断，以30 min加热煮沸处理的切片ER阳性结果最好，比其他煮沸时间的阳性率要高、要强。但煮沸时间的长短对PR的结果影响不大，各种煮沸时间的结果均相同。综上所述，我们认为固定并非是影响ER、PR阳性结果的因素，及时的固定非常重要，抗原修复也是必不可少的。各实验室应根据各自的实验条件，选择合适的实验方法。
作者简介：吴惠茜，女，43岁，主管技师
收稿日期：1998-12-24, 百拇医药