慢性肝病患者血清鲎试验与肿瘤坏死因子的检测健
作者：谢建萍 林敏西 刘安国 范学工 郭思
单位：谢建萍 林敏西 刘安国 范学工 附属湘雅医院传染科 长沙 410008；郭思健 附属湘雅医院检验科 长沙 410008
关键词：肝炎；病毒性；人；内毒素血症；肿瘤坏死因子；治疗应用；双歧杆菌活菌制剂*
湖南医科大学学报990223 提 要 用鲎试验方法(LLT)检测153例慢性肝病的肠源性内毒素发生率；比较鲎试验阳性及阴性组病人肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平；观察丽珠肠乐治疗肝病合并内毒素血症组LLT阴转率。结果显示：①慢性肝病者LLT阳性发生率为65.36%，以重症肝炎最高。②LLT阳性组TNF-α水平较正常组和LLT阴性组为高。③服丽珠肠乐治疗后，肝病合并LLT阳性组的转阴率较对照组为高。提示慢性肝病常合并内毒素血症；TNF-α在肝病所致肠源性内毒素血症发病中起重要作用；丽珠肠乐对缓解肠源性内毒素血症有效。
, http://www.100md.com
Determination of TNF-α and endotoxemia in patients with
chronic liver diseasesXie Jianping Lin Minxi Liu Anguo Fan Xuegong
(Department of Infectious Diseases, Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008)
The incidence of endotoxemia in 153 patients with different liver diseases was determined by Limulus Lysaite Test(LLT). Comparative studies were carried out on the levels of tumour necrosis factor-α(TNF-α) between positive and negative endotoxemia in patients suffering from chronic liver diseases. At the same time, 58 patients of positive endotoxemia were divided into two groups-bifidobiogen group(38 cases) and control group(20 cases). The patients in bifidobiogen group were treated mainly with daily administration of bifidobiogen for 1 month besides general liver-protection therapy and the bifidobiogen was not given to the control group. The results showed that: ①Incidence of endotoxemia in 153 patients suffering from various types of liver diseases was 65.36%; the highest rate was found in the patients with severe hepatitis; ②The TNF-α level was obviously increased in the patients of positive endotoxemia; ③The total efficacy in bifidobiogen group was significantly higher than that in control group. The data suggest that chronic liver diseases are generally complicated with endotoxemia, and TNF-α plays an important role in the pathogenesis of endotoxemia. The serum endotoxin level may be reduced after the treatment with bifidobiogen.
, 百拇医药
Key words hepatitis; endotoxemia; tumour necrosis factor; treatment
内毒素血症与肝损害互为因果。慢性病毒性肝炎由于肝功能受损，肝脏正常的解毒功能降低，肠道粘膜屏障功能减弱，病人因免疫功能受损而致肠源性内毒素血症。肿瘤坏死因子(TNF-α)在内毒素所致的肝损害中起关键作用。丽珠肠乐系双歧杆菌活菌制剂，有调节正常肠道菌群的功能及降低内毒素血症的作用[1]。作者于1997年8月～1998年10月观察了153例慢性肝病的鲎试验(LLT)阳性率及其与TNF-α的关系，并观察LLT阳性者在服用丽珠肠乐后的变化。
1 临床资料
1.1 病例选择与分组 153例慢性肝病均系我院门诊及住院病人，男124例，女29例，年龄19～65(平均38.4±14.2)岁。病例分型按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议讨论修订的标准[2]。分组：慢性肝病组98例，即将符合慢性轻、中、重度肝炎诊断标准的病例合为一组；重症肝炎组35例和肝硬化组20例。在LLT阳性及LLT阴性病例中，随机选择各30例检测TNF-α水平。正常对照组29例为中心血站献血员。
, 百拇医药
选择LLT阳性病人69例，分丽珠肠乐组(观察组)和对照组；两组病例的年龄、病程、肝功能损害的程度具有可比性。另11例疗程不足及半途退出者未统计在内。
1.2 检测及给药方法
1.2.1 内毒素检测 采用LLT半定量法检测血中内毒素。空腹抽血，分离血清后加热预处理，以清除血清抑 制鲎试剂的因子。将待测标本按 1∶10，1∶100，1∶1?!000，1∶10?!000，1∶10万稀释。然后按说明操作，LLT试剂盒由上海医学化验所生产。
1.2.2 TNF-α的测定 采用放射免疫法。试剂由中国同位素公司北方生物技术研究所提供。
1.2.3 给药方法 丽珠肠乐组和对照组基础护肝治疗相同。丽珠肠乐组病人在原有护肝治疗基础上，加用口服丽珠肠乐，每次2粒，每日三次，疗程1月。丽珠肠乐由珠海丽珠集团提供，每粒含双歧杆菌活菌0.5亿个。
, 百拇医药
1.3 观察指标 ①三组慢性肝病(慢性肝病组、重症肝炎组、肝硬化组)LLT的阳性率。②LLT阳性及阴性病人TNF-α水平的变化。③丽珠肠乐治疗前后LLT阴转率的变化。
1.4 统计学分析 所得数据输入计算机建立数据库，运用SPSS统计软件包进行统计分析。使用方法有χ2检验、F检验和t检验。
2 结果
2.1 慢性肝病血清LLT的检测 结果见表1。三组肝病病人LLT阳性效价差异无显著性(χ2=2.81,P>0.05)。 其总LLT阳性率明显高于正常对照组，差异有高度显著性 (χ2=60.92,P<0.01)。
表1 慢性肝病病人LLT检测 分组
例数
, 百拇医药
(n)
LLT
阴性数
LLT阳性数
阳性率
(%)
1∶10
1∶100
1∶1000
1∶1万
1∶10万
合计
慢性肝病
, 百拇医药
98
42
3
6
15
30
2
56
57.14
重型肝炎
35
5
1
2
, http://www.100md.com
5
21
1
30
85.71
肝硬化
20
6
0
1
3
10
0
14
, http://www.100md.com
70.00
合计
153
53
4
9
23
61
3
100
65.36①
正常对照
29
, 百拇医药
28
0
0
1
0
0
1
3.44
①与对照组比较P<0.01
2.2 部分慢性肝病病人血清TNF-α水平比较 结果见表2。LLT阳性病人的TNF-α水平显著高于LLT阴性组及对照组(P<0.05)。
表2 LLT阳性与阴性组血清TNF-α比较(
±2S) 组别
, http://www.100md.com
例数(n)
TNF-α(ng.ml-1)
正常对照组
29
14.9895±4.147
LLT阳性组
30
33.3181±10.459①
LLT阴性组
30
18.2670±8.570
, 百拇医药
①与正常组及LLT阴性组比较差异均有显著性(P<0.05,F=9.56)
2.3 丽珠肠乐治疗前后LLT转阴率比较 表3示，治疗后丽珠肠乐组阴转率明显高于对照组(P<0.01)。
表3 慢性肝炎病人丽珠肠乐治疗前后LLT阴转率比较 组别
治疗前LLT
阳性例数
治疗后例数
阴转率%
P
阴性
未转阴
, 百拇医药 丽珠肠乐组
对照组
38
20
28
2
10
18
73.7
10.0
<0.01
3 讨论
内毒素即脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖成份，具有多种生物活性，临床常用鲎试验方法检测。正常情况下，肠源性内毒素主要经肝脏枯否细胞解毒。肝病时，肝脏对内毒素的清除解毒功能下降，内毒素由门静脉进入血中形成肠源性内毒素血症并损害肝细胞，导致肝细胞坏死。
, 百拇医药
本文三组慢性肝病LLT检测结果，LLT阳性率普遍增高；病情越重，阳性率越高，均高于正常对照组。此结果与文献报道结果相近似[3]。
内毒素除直接对肝脏造成损伤外，主要还通过刺激单核巨噬细胞分泌多种细胞因子，其中包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。TNF-α不仅能介导内毒素的多种生物学作用，而且通过诱生其它炎症介质协同作用，从不同的环节对肝脏产生炎症反应和组织损伤[4，5]。本文检测结果显示，慢性肝病LLT阳性病人TNF-α较LLT阴性及正常人明显增高，差异有显著性(P<0.05)。进一步说明LPS系一重要的致病因子。内毒素与TNF互为因果，对肝病的发生、发展产生重要影响。
据此认为，防治肠源性内毒素血症对缓解肝炎病情，促进病人的康复将会起到积极作用。内毒素血症的清除目前尚无特效方法。双歧杆菌是人的肠道优势厌氧菌。它通过磷壁酸与肠粘膜上皮细胞紧密结合，与乳酸杆菌等厌氧菌形成天然的生物屏障。在双歧杆菌的代谢过程中产生酸性物质，降低肠道pH值，直接影响革兰氏阴性腐败菌，使其不能定植存活和繁殖[6]，致内毒素生成、吸收减少，血中内毒素水平下降，从而减轻对肝脏的损害。此外，它所合成的多种氨基酸、菌体蛋白和维生素又可为人体利用，故能有效地降低内毒素血症，减少对巨噬细胞的刺激，降低肿瘤坏死因子的水平。
, 百拇医药
本文用含双歧杆菌活菌的微生态制剂丽珠肠乐治疗肠源性内毒素血症的肝病患者38例，LLT转阴率为73.7%，显著高于对照组。证明丽珠肠乐对清除肠源性内毒血症有良好的效果。但其对TNF-α的影响尚待观察。
综上所述，作者认为慢性病毒性肝炎肠源性内毒素血症发生率高，肠道微生态调节剂能有效地减轻或清除肠源性内毒素血症，故该制剂可作为肝病辅助治疗的一种可行的方法。
中国图书分号 R373.21 参考文献
[1]李春梅，王超，张成有，等.丽珠肠乐对肝硬化的疗效观察.中国微生态学杂志，1994，6(2)：21-23
[2]第5次全国传染病寄生虫病学术会议.病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13(4)：241-247
[3]李平，朱无难，王申生，等.肝病患者血浆内毒素定量测定及其临床意义.中华内科杂志，1984，23(6)：340-344
, 百拇医药
[4]范志明，秦靖，高金凤，等.微生态调节治疗肝硬化病人内毒素及肿瘤坏死因子的影响.中华实验和临床病毒学杂志，1994，8(4)：361-363
[5]Sakaguchi S, Furusawa S, Yokota R, et al. The enhance effect of tumour necrosis factor-apha on oxidative stress in endotoxemia. Pharmacol Toxicol, 1996,79(5):259-265
[6]康白主编.双歧杆菌.大连：大连海事大学出版社，1998：85-97
收稿日期：1998-11-16, 百拇医药
单位：谢建萍 林敏西 刘安国 范学工 附属湘雅医院传染科 长沙 410008；郭思健 附属湘雅医院检验科 长沙 410008
关键词：肝炎；病毒性；人；内毒素血症；肿瘤坏死因子；治疗应用；双歧杆菌活菌制剂*
湖南医科大学学报990223 提 要 用鲎试验方法(LLT)检测153例慢性肝病的肠源性内毒素发生率；比较鲎试验阳性及阴性组病人肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平；观察丽珠肠乐治疗肝病合并内毒素血症组LLT阴转率。结果显示：①慢性肝病者LLT阳性发生率为65.36%，以重症肝炎最高。②LLT阳性组TNF-α水平较正常组和LLT阴性组为高。③服丽珠肠乐治疗后，肝病合并LLT阳性组的转阴率较对照组为高。提示慢性肝病常合并内毒素血症；TNF-α在肝病所致肠源性内毒素血症发病中起重要作用；丽珠肠乐对缓解肠源性内毒素血症有效。
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Determination of TNF-α and endotoxemia in patients with
chronic liver diseasesXie Jianping Lin Minxi Liu Anguo Fan Xuegong
(Department of Infectious Diseases, Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008)
The incidence of endotoxemia in 153 patients with different liver diseases was determined by Limulus Lysaite Test(LLT). Comparative studies were carried out on the levels of tumour necrosis factor-α(TNF-α) between positive and negative endotoxemia in patients suffering from chronic liver diseases. At the same time, 58 patients of positive endotoxemia were divided into two groups-bifidobiogen group(38 cases) and control group(20 cases). The patients in bifidobiogen group were treated mainly with daily administration of bifidobiogen for 1 month besides general liver-protection therapy and the bifidobiogen was not given to the control group. The results showed that: ①Incidence of endotoxemia in 153 patients suffering from various types of liver diseases was 65.36%; the highest rate was found in the patients with severe hepatitis; ②The TNF-α level was obviously increased in the patients of positive endotoxemia; ③The total efficacy in bifidobiogen group was significantly higher than that in control group. The data suggest that chronic liver diseases are generally complicated with endotoxemia, and TNF-α plays an important role in the pathogenesis of endotoxemia. The serum endotoxin level may be reduced after the treatment with bifidobiogen.
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Key words hepatitis; endotoxemia; tumour necrosis factor; treatment
内毒素血症与肝损害互为因果。慢性病毒性肝炎由于肝功能受损，肝脏正常的解毒功能降低，肠道粘膜屏障功能减弱，病人因免疫功能受损而致肠源性内毒素血症。肿瘤坏死因子(TNF-α)在内毒素所致的肝损害中起关键作用。丽珠肠乐系双歧杆菌活菌制剂，有调节正常肠道菌群的功能及降低内毒素血症的作用[1]。作者于1997年8月～1998年10月观察了153例慢性肝病的鲎试验(LLT)阳性率及其与TNF-α的关系，并观察LLT阳性者在服用丽珠肠乐后的变化。
1 临床资料
1.1 病例选择与分组 153例慢性肝病均系我院门诊及住院病人，男124例，女29例，年龄19～65(平均38.4±14.2)岁。病例分型按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议讨论修订的标准[2]。分组：慢性肝病组98例，即将符合慢性轻、中、重度肝炎诊断标准的病例合为一组；重症肝炎组35例和肝硬化组20例。在LLT阳性及LLT阴性病例中，随机选择各30例检测TNF-α水平。正常对照组29例为中心血站献血员。
, 百拇医药
选择LLT阳性病人69例，分丽珠肠乐组(观察组)和对照组；两组病例的年龄、病程、肝功能损害的程度具有可比性。另11例疗程不足及半途退出者未统计在内。
1.2 检测及给药方法
1.2.1 内毒素检测 采用LLT半定量法检测血中内毒素。空腹抽血，分离血清后加热预处理，以清除血清抑 制鲎试剂的因子。将待测标本按 1∶10，1∶100，1∶1?!000，1∶10?!000，1∶10万稀释。然后按说明操作，LLT试剂盒由上海医学化验所生产。
1.2.2 TNF-α的测定 采用放射免疫法。试剂由中国同位素公司北方生物技术研究所提供。
1.2.3 给药方法 丽珠肠乐组和对照组基础护肝治疗相同。丽珠肠乐组病人在原有护肝治疗基础上，加用口服丽珠肠乐，每次2粒，每日三次，疗程1月。丽珠肠乐由珠海丽珠集团提供，每粒含双歧杆菌活菌0.5亿个。
, 百拇医药
1.3 观察指标 ①三组慢性肝病(慢性肝病组、重症肝炎组、肝硬化组)LLT的阳性率。②LLT阳性及阴性病人TNF-α水平的变化。③丽珠肠乐治疗前后LLT阴转率的变化。
1.4 统计学分析 所得数据输入计算机建立数据库，运用SPSS统计软件包进行统计分析。使用方法有χ2检验、F检验和t检验。
2 结果
2.1 慢性肝病血清LLT的检测 结果见表1。三组肝病病人LLT阳性效价差异无显著性(χ2=2.81,P>0.05)。 其总LLT阳性率明显高于正常对照组，差异有高度显著性 (χ2=60.92,P<0.01)。
表1 慢性肝病病人LLT检测 分组
例数
, 百拇医药
(n)
LLT
阴性数
LLT阳性数
阳性率
(%)
1∶10
1∶100
1∶1000
1∶1万
1∶10万
合计
慢性肝病
, 百拇医药
98
42
3
6
15
30
2
56
57.14
重型肝炎
35
5
1
2
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5
21
1
30
85.71
肝硬化
20
6
0
1
3
10
0
14
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70.00
合计
153
53
4
9
23
61
3
100
65.36①
正常对照
29
, 百拇医药
28
0
0
1
0
0
1
3.44
①与对照组比较P<0.01
2.2 部分慢性肝病病人血清TNF-α水平比较 结果见表2。LLT阳性病人的TNF-α水平显著高于LLT阴性组及对照组(P<0.05)。
表2 LLT阳性与阴性组血清TNF-α比较(
±2S) 组别, http://www.100md.com
例数(n)
TNF-α(ng.ml-1)
正常对照组
29
14.9895±4.147
LLT阳性组
30
33.3181±10.459①
LLT阴性组
30
18.2670±8.570
, 百拇医药
①与正常组及LLT阴性组比较差异均有显著性(P<0.05,F=9.56)
2.3 丽珠肠乐治疗前后LLT转阴率比较 表3示，治疗后丽珠肠乐组阴转率明显高于对照组(P<0.01)。
表3 慢性肝炎病人丽珠肠乐治疗前后LLT阴转率比较 组别
治疗前LLT
阳性例数
治疗后例数
阴转率%
P
阴性
未转阴
, 百拇医药 丽珠肠乐组
对照组
38
20
28
2
10
18
73.7
10.0
<0.01
3 讨论
内毒素即脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖成份，具有多种生物活性，临床常用鲎试验方法检测。正常情况下，肠源性内毒素主要经肝脏枯否细胞解毒。肝病时，肝脏对内毒素的清除解毒功能下降，内毒素由门静脉进入血中形成肠源性内毒素血症并损害肝细胞，导致肝细胞坏死。
, 百拇医药
本文三组慢性肝病LLT检测结果，LLT阳性率普遍增高；病情越重，阳性率越高，均高于正常对照组。此结果与文献报道结果相近似[3]。
内毒素除直接对肝脏造成损伤外，主要还通过刺激单核巨噬细胞分泌多种细胞因子，其中包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。TNF-α不仅能介导内毒素的多种生物学作用，而且通过诱生其它炎症介质协同作用，从不同的环节对肝脏产生炎症反应和组织损伤[4，5]。本文检测结果显示，慢性肝病LLT阳性病人TNF-α较LLT阴性及正常人明显增高，差异有显著性(P<0.05)。进一步说明LPS系一重要的致病因子。内毒素与TNF互为因果，对肝病的发生、发展产生重要影响。
据此认为，防治肠源性内毒素血症对缓解肝炎病情，促进病人的康复将会起到积极作用。内毒素血症的清除目前尚无特效方法。双歧杆菌是人的肠道优势厌氧菌。它通过磷壁酸与肠粘膜上皮细胞紧密结合，与乳酸杆菌等厌氧菌形成天然的生物屏障。在双歧杆菌的代谢过程中产生酸性物质，降低肠道pH值，直接影响革兰氏阴性腐败菌，使其不能定植存活和繁殖[6]，致内毒素生成、吸收减少，血中内毒素水平下降，从而减轻对肝脏的损害。此外，它所合成的多种氨基酸、菌体蛋白和维生素又可为人体利用，故能有效地降低内毒素血症，减少对巨噬细胞的刺激，降低肿瘤坏死因子的水平。
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本文用含双歧杆菌活菌的微生态制剂丽珠肠乐治疗肠源性内毒素血症的肝病患者38例，LLT转阴率为73.7%，显著高于对照组。证明丽珠肠乐对清除肠源性内毒血症有良好的效果。但其对TNF-α的影响尚待观察。
综上所述，作者认为慢性病毒性肝炎肠源性内毒素血症发生率高，肠道微生态调节剂能有效地减轻或清除肠源性内毒素血症，故该制剂可作为肝病辅助治疗的一种可行的方法。
中国图书分号 R373.21 参考文献
[1]李春梅，王超，张成有，等.丽珠肠乐对肝硬化的疗效观察.中国微生态学杂志，1994，6(2)：21-23
[2]第5次全国传染病寄生虫病学术会议.病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13(4)：241-247
[3]李平，朱无难，王申生，等.肝病患者血浆内毒素定量测定及其临床意义.中华内科杂志，1984，23(6)：340-344
, 百拇医药
[4]范志明，秦靖，高金凤，等.微生态调节治疗肝硬化病人内毒素及肿瘤坏死因子的影响.中华实验和临床病毒学杂志，1994，8(4)：361-363
[5]Sakaguchi S, Furusawa S, Yokota R, et al. The enhance effect of tumour necrosis factor-apha on oxidative stress in endotoxemia. Pharmacol Toxicol, 1996,79(5):259-265
[6]康白主编.双歧杆菌.大连：大连海事大学出版社，1998：85-97
收稿日期：1998-11-16, 百拇医药