CD44s和CD44v6在肺癌中的表达
作者：区景松 孙培吾 杨运有
单位：区景松 杨运有 广州医学院第一附属医院心胸外科，广州 510120；孙培吾 中山医科大学第一附属医院心胸外科，广州 510080
关键词：CD44；肺肿瘤；表达
广州医学院学报990203
提要 目的：探讨CD44在肺癌中的表达情况，用免疫组化的方法检测标准型CD44(CD44s)和含外显子v6的变异型CD44(CD44v6)在各种肺癌的表达。结果：41例非小细胞肺癌(NSCLC)包括鳞癌、腺癌、大细胞癌的CD44s表达率为70.7%，CD44v6的表达率为9.7%，而15例小细胞肺癌(SCLC)无一例表达CD44s和CD44v6。提示：(1)CD44s仅在NSCLC中表达，而在SCLC中无表达，可能是NSCLC的一个标记物；(2)CD44v6仅小部分肺鳞癌和腺癌有表达，而在其它类型的肺癌无表达：(3)CD44s在低转移的NSCLC中表达率高，而在高转移的SCLC中无表达，可能在肺癌临床诊断中有一定的应用前景。
, 百拇医药
中图分类号 R734.2
Expression of CD44s and CD44v6 in Lung Cancer
Ou Jingsong1, Sun Peiwu2, Yang Yunyou1
(1Department of Chest Surgery,the First Affiliated
Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510120；
2Department of Thoracic-Cardio Surgery,the First Affiliated
, 百拇医药
Hospital of Sun Yatsen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
In order to understand CD44 expression in lung cancer, immunohistochemical staining was used to detect the expression of standard CD44 (CD44s) and the variant isoforms containing the domains encoded by variant exon 6 (CD44v6) in various lung cancers. The results showed that the expression of CD44s or CD44v6 in 41 non-small cell lung cancer (NSCLC) cases were 70.7% and 9.7%, respectively, but no CD44s or CD44v6 expressed in 15 small cell lung cancer (SCLC)cases.It is concluded:(1)CD44s may be a novel marker of NSCLC because it expressed only in NSCLC but not in SCLC；(2)CD44v6 only expressed in a small part of pulmonary squamous cell carcinomas and adenocarcinomas,but no CD44v6 expressed in pulmonary carcinomas of other types；(3)CD44s may be a promising index in clinical practice because of its high expression in low metastatic SCLS and no expression in high metastatic SCLC.
, 百拇医药
Key words CD44；Pulmonary neoplasm；Expression
CD44是一种粘附分子，属于一种分布极广的细胞表面跨膜糖蛋白，主要有标准型(CD44s)和变异型(CD44v)两种形式[1]。在许多肿瘤中，具有转移能力的癌细胞主要表达CD44v6[2～4]，而无转移的癌细胞和正常组织细胞则主要表达CD44s[5]。CD44在肺癌细胞的表达情况还不很清楚，为此，作者对两种形式的CD44(CD44s和CD44v6)在各种肺癌细胞的表达情况进行了分析。
1 材料和方法
1.1 材料 56例肺癌标本，NSCLC 41例，其中鳞癌15例、腺癌15例、大细胞癌11例；SCLC 15例。所有标本切除后2h内用10%福尔马林固定，然后脱水，渗蜡包埋，每例标本各切取三片4μm的组织，两片分别用于CD44s和CD44v6的免疫组织化学检测，另一片用于HE染色。本实验采用的第一抗体为鼠抗人CD44s(丹麦，Dako公司)和CD44v6(美国，RND公司)单克隆抗体。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学染色 采用LSAB法。组织先脱蜡，然后用3%H2O2液消除内源性过氧化酶活性5min，用正常血清保护5min，1∶80的CD44s-抗和1∶500的CD44v6-抗分别用于两张切片，室温孵育30min，生物素化的IgG作二抗孵育15min，用链菌素*辣根过氧化酶作三抗孵育15min，用0.04%的DAB显色液显色15min，然后观察结果，以正常淋巴结组织作为检测CD44s的阳性对照，检测CD44v6用已知阳性的结肠癌作为对照，用PBS液代替抗CD44s和CD44v6抗体作为阴性对照，HE染色以判断肺癌的类型和癌细胞的位置。
1.2.2 结果判定 每片免疫组织化学结果均按强、中、弱、无染色四等记录其染色强度，并记录各片的阳性细胞数(癌细胞膜上有显色为阳性细胞)，凡出现阳性细胞者均视为阳性结果。
1.2.3 统计学方法 采用四格表确切概率法，计算χ2值。
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2 结果
2.1 CD44s在肺癌中的表达情况
56例肺癌细胞表达CD44s的检测结果见表1和图1。41例NSCLC的CD44s表达率为70.7%，而15例SCLC均无表达CD44s，两者相比差异有显著性(P<0.05)，此外，在CD44s阳性的NSCLC中，鳞癌染色强度表现为中等至强阳性的比例较腺癌和大细胞癌高，且平均阳性细胞数也较鳞癌多。
表1 CD44s在各种肺癌中表达 肺癌类型
例数
CD44s
阳性例数
CD44s
阳性率(%)
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非小细胞肺癌
41
29
70.7*
鳞癌
15
11
73.3
腺癌
15
10
66.7
大细胞癌
, 百拇医药
11
8
72.7
小细胞肺癌
15
0
0
非小细胞肺癌与小细胞肺癌比:*P<0.05
图1 免疫组织化学染色，肺鳞癌
细胞膜上CD44s阳性(×400)
2.2 CD44v6在肺癌中的表达情况
, 百拇医药
56例肺癌细胞表达CD44v6的检测结果见表2和图2。在41例NSCLC中，2例鳞癌和2例腺癌CD44v6表达阳性，而大细胞癌无表达CD44v6，CD44v6在NSCLC中的表达率为9.7%，在15例SCLC中亦无表达CD44v6。
表2 CD44v6在各种肺癌中表达 肺癌类型
例数
CD44v6
阳性例数
CD44v6
阳性率(%)
非小细胞肺癌
41
4
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9.7
鳞癌
15
2
13.3
腺癌
15
2
13.3
大细胞癌
11
0
0
小细胞肺癌
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15
0
0
图2 免疫组织化学染色，肺腺癌
细胞膜上CD44v6阳性(×400)
3 讨论
在两大类型的肺癌中，NSCLC比SCLC预后好已是众所周知，而且两者治疗方式上有所不同，故有必要探寻NSCLC相对特异性的标记物。
CD44分子的表达已被认为与许多恶性肿瘤有关，而且不同形式的CD44作用不同，因此作者对CD44s和CD44v6在不同类型肺癌的表达情况作一探索。研究结果发现，鳞癌、腺癌、大细胞癌均有一定的CD44s表达阳性率。在NSCLC中CD44s的总表达率为70.7%，而15例SCLC却无表达CD44s，二者的CD44s表达率相比差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明，CD44s仅在NSCLC中表达，而SCLC中无表达，可作为NSCLC的一个标记物，CD44s在低转移及预后较好的NSCLC表达，而在高转移、预后差的SCLC中无表达，是否提示CD44s与肺癌的转移和预后有关。另外，在NSCLC中，CD44s在预后较腺癌及大细胞癌好的鳞癌中表达强度(包括染色强度和阳性细胞数)也较前两者强，是否也提示肺癌如同神经母细胞瘤一样，CD44s表达是一个预后良好的指标[6，7]。上述问题均有待进一步研究。
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在多种其它器官的恶性肿瘤中已证明，CD44v6可能是一个提示肿瘤易转移的指标，故本研究也对CD44v6进行了检测，并发现肺癌与其它器官的肿瘤不同，只有极少部分的鳞癌和腺癌表达CD44v6，提示可能难以根据CD44v6的表达情况对肺癌的发生和诊断提供线索。
参考文献
1 Haynes BE,Liao HX,Patton KL.The transmembrane hyaluronate receptor(CD44):multiple functions,multiple forms.Cancer Cells,1991；3(9)：147
2 Salmi M,Gron-vitra K,Sointu P,et al.Regulated expression of exon v6 containing isoforms of CD44 in man:Downregulation during malignant transformation of tumors of squamocellular origin.J Cell Biol,1993；122(2):431
, 百拇医药
3 Harn HJ,Lee HS,Ho LI,et al.Selective expression of CD44 messenger RNA splice variants in four high grade human brain tumor cell lines.Biochem Mol Biol Int,1994；33(4):343
4 Kaufmann M,Heider KH.Sinn HP,et al CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length of survival.Lancet,1995；345(8950):615
5 Gunthert U,Hofmann M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells.Cell,1991；65(1):13
, 百拇医药
6 Christiansen H,Sahin K,Berthold F,et al.Comparison of DNA aneuploidy,chromosome abnormalities,MYCN amplification and CD44 expression as prognostic,factors in neuroblastoma.Eur J Cancer,1995；31A(4):541
7 Combaret V,Lasset C,Frappaz D,et al.Evaluation of CD44 prognostic value in neuroblastoma:Comparison,1995；31A(4):545
(收稿：1999-02-13), 百拇医药
单位：区景松 杨运有 广州医学院第一附属医院心胸外科，广州 510120；孙培吾 中山医科大学第一附属医院心胸外科，广州 510080
关键词：CD44；肺肿瘤；表达
广州医学院学报990203
提要 目的：探讨CD44在肺癌中的表达情况，用免疫组化的方法检测标准型CD44(CD44s)和含外显子v6的变异型CD44(CD44v6)在各种肺癌的表达。结果：41例非小细胞肺癌(NSCLC)包括鳞癌、腺癌、大细胞癌的CD44s表达率为70.7%，CD44v6的表达率为9.7%，而15例小细胞肺癌(SCLC)无一例表达CD44s和CD44v6。提示：(1)CD44s仅在NSCLC中表达，而在SCLC中无表达，可能是NSCLC的一个标记物；(2)CD44v6仅小部分肺鳞癌和腺癌有表达，而在其它类型的肺癌无表达：(3)CD44s在低转移的NSCLC中表达率高，而在高转移的SCLC中无表达，可能在肺癌临床诊断中有一定的应用前景。
, 百拇医药
中图分类号 R734.2
Expression of CD44s and CD44v6 in Lung Cancer
Ou Jingsong1, Sun Peiwu2, Yang Yunyou1
(1Department of Chest Surgery,the First Affiliated
Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510120；
2Department of Thoracic-Cardio Surgery,the First Affiliated
, 百拇医药
Hospital of Sun Yatsen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089)
In order to understand CD44 expression in lung cancer, immunohistochemical staining was used to detect the expression of standard CD44 (CD44s) and the variant isoforms containing the domains encoded by variant exon 6 (CD44v6) in various lung cancers. The results showed that the expression of CD44s or CD44v6 in 41 non-small cell lung cancer (NSCLC) cases were 70.7% and 9.7%, respectively, but no CD44s or CD44v6 expressed in 15 small cell lung cancer (SCLC)cases.It is concluded:(1)CD44s may be a novel marker of NSCLC because it expressed only in NSCLC but not in SCLC；(2)CD44v6 only expressed in a small part of pulmonary squamous cell carcinomas and adenocarcinomas,but no CD44v6 expressed in pulmonary carcinomas of other types；(3)CD44s may be a promising index in clinical practice because of its high expression in low metastatic SCLS and no expression in high metastatic SCLC.
, 百拇医药
Key words CD44；Pulmonary neoplasm；Expression
CD44是一种粘附分子，属于一种分布极广的细胞表面跨膜糖蛋白，主要有标准型(CD44s)和变异型(CD44v)两种形式[1]。在许多肿瘤中，具有转移能力的癌细胞主要表达CD44v6[2～4]，而无转移的癌细胞和正常组织细胞则主要表达CD44s[5]。CD44在肺癌细胞的表达情况还不很清楚，为此，作者对两种形式的CD44(CD44s和CD44v6)在各种肺癌细胞的表达情况进行了分析。
1 材料和方法
1.1 材料 56例肺癌标本，NSCLC 41例，其中鳞癌15例、腺癌15例、大细胞癌11例；SCLC 15例。所有标本切除后2h内用10%福尔马林固定，然后脱水，渗蜡包埋，每例标本各切取三片4μm的组织，两片分别用于CD44s和CD44v6的免疫组织化学检测，另一片用于HE染色。本实验采用的第一抗体为鼠抗人CD44s(丹麦，Dako公司)和CD44v6(美国，RND公司)单克隆抗体。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学染色 采用LSAB法。组织先脱蜡，然后用3%H2O2液消除内源性过氧化酶活性5min，用正常血清保护5min，1∶80的CD44s-抗和1∶500的CD44v6-抗分别用于两张切片，室温孵育30min，生物素化的IgG作二抗孵育15min，用链菌素*辣根过氧化酶作三抗孵育15min，用0.04%的DAB显色液显色15min，然后观察结果，以正常淋巴结组织作为检测CD44s的阳性对照，检测CD44v6用已知阳性的结肠癌作为对照，用PBS液代替抗CD44s和CD44v6抗体作为阴性对照，HE染色以判断肺癌的类型和癌细胞的位置。
1.2.2 结果判定 每片免疫组织化学结果均按强、中、弱、无染色四等记录其染色强度，并记录各片的阳性细胞数(癌细胞膜上有显色为阳性细胞)，凡出现阳性细胞者均视为阳性结果。
1.2.3 统计学方法 采用四格表确切概率法，计算χ2值。
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2 结果
2.1 CD44s在肺癌中的表达情况
56例肺癌细胞表达CD44s的检测结果见表1和图1。41例NSCLC的CD44s表达率为70.7%，而15例SCLC均无表达CD44s，两者相比差异有显著性(P<0.05)，此外，在CD44s阳性的NSCLC中，鳞癌染色强度表现为中等至强阳性的比例较腺癌和大细胞癌高，且平均阳性细胞数也较鳞癌多。
表1 CD44s在各种肺癌中表达 肺癌类型
例数
CD44s
阳性例数
CD44s
阳性率(%)
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非小细胞肺癌
41
29
70.7*
鳞癌
15
11
73.3
腺癌
15
10
66.7
大细胞癌
, 百拇医药
11
8
72.7
小细胞肺癌
15
0
0
非小细胞肺癌与小细胞肺癌比:*P<0.05
图1 免疫组织化学染色，肺鳞癌
细胞膜上CD44s阳性(×400)
2.2 CD44v6在肺癌中的表达情况
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56例肺癌细胞表达CD44v6的检测结果见表2和图2。在41例NSCLC中，2例鳞癌和2例腺癌CD44v6表达阳性，而大细胞癌无表达CD44v6，CD44v6在NSCLC中的表达率为9.7%，在15例SCLC中亦无表达CD44v6。
表2 CD44v6在各种肺癌中表达 肺癌类型
例数
CD44v6
阳性例数
CD44v6
阳性率(%)
非小细胞肺癌
41
4
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9.7
鳞癌
15
2
13.3
腺癌
15
2
13.3
大细胞癌
11
0
0
小细胞肺癌
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15
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图2 免疫组织化学染色，肺腺癌
细胞膜上CD44v6阳性(×400)
3 讨论
在两大类型的肺癌中，NSCLC比SCLC预后好已是众所周知，而且两者治疗方式上有所不同，故有必要探寻NSCLC相对特异性的标记物。
CD44分子的表达已被认为与许多恶性肿瘤有关，而且不同形式的CD44作用不同，因此作者对CD44s和CD44v6在不同类型肺癌的表达情况作一探索。研究结果发现，鳞癌、腺癌、大细胞癌均有一定的CD44s表达阳性率。在NSCLC中CD44s的总表达率为70.7%，而15例SCLC却无表达CD44s，二者的CD44s表达率相比差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明，CD44s仅在NSCLC中表达，而SCLC中无表达，可作为NSCLC的一个标记物，CD44s在低转移及预后较好的NSCLC表达，而在高转移、预后差的SCLC中无表达，是否提示CD44s与肺癌的转移和预后有关。另外，在NSCLC中，CD44s在预后较腺癌及大细胞癌好的鳞癌中表达强度(包括染色强度和阳性细胞数)也较前两者强，是否也提示肺癌如同神经母细胞瘤一样，CD44s表达是一个预后良好的指标[6，7]。上述问题均有待进一步研究。
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在多种其它器官的恶性肿瘤中已证明，CD44v6可能是一个提示肿瘤易转移的指标，故本研究也对CD44v6进行了检测，并发现肺癌与其它器官的肿瘤不同，只有极少部分的鳞癌和腺癌表达CD44v6，提示可能难以根据CD44v6的表达情况对肺癌的发生和诊断提供线索。
参考文献
1 Haynes BE,Liao HX,Patton KL.The transmembrane hyaluronate receptor(CD44):multiple functions,multiple forms.Cancer Cells,1991；3(9)：147
2 Salmi M,Gron-vitra K,Sointu P,et al.Regulated expression of exon v6 containing isoforms of CD44 in man:Downregulation during malignant transformation of tumors of squamocellular origin.J Cell Biol,1993；122(2):431
, 百拇医药
3 Harn HJ,Lee HS,Ho LI,et al.Selective expression of CD44 messenger RNA splice variants in four high grade human brain tumor cell lines.Biochem Mol Biol Int,1994；33(4):343
4 Kaufmann M,Heider KH.Sinn HP,et al CD44 variant exon epitopes in primary breast cancer and length of survival.Lancet,1995；345(8950):615
5 Gunthert U,Hofmann M,Rudy W,et al.A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells.Cell,1991；65(1):13
, 百拇医药
6 Christiansen H,Sahin K,Berthold F,et al.Comparison of DNA aneuploidy,chromosome abnormalities,MYCN amplification and CD44 expression as prognostic,factors in neuroblastoma.Eur J Cancer,1995；31A(4):541
7 Combaret V,Lasset C,Frappaz D,et al.Evaluation of CD44 prognostic value in neuroblastoma:Comparison,1995；31A(4):545
(收稿：1999-02-13), 百拇医药