氧氟沙星对耐药结核分枝杆菌的抗菌活性观察
作者：吴龙章 谭守勇 蔡杏珊 潘美玉
单位：广州市胸科医院，广州 510000
关键词：氧氟沙星；MIC；结核分枝杆菌
广州医学院学报990219 中图分类号 R978.19
目前，临床上几种常用的抗结核药物均已产生不同程度的抗药性。加速研制开发和筛选新的抗结核药物，是一个刻不容缓的重要课题。为此我们对临床分离出的耐药株种，用氧氟沙星(Ofloxacin)进行了抑制结核分枝杆菌敏感试验，并与临床上常用的雷米封(ISoniazid,INH)利福平(Rimfampin,RFP)进行了比较，报告如下。
1 材料和方法
1.1 菌株来源 52株均来自我院肺结核住院病人从痰液中分离出并经按常规鉴定为结核分枝杆菌且对INH、RFP等药物产生抗药性的株种。其中50株在1个月内未用过氧氟沙星；1株用药不详；另1株则在2周内临床上使用过氧氟沙星治疗。
, 百拇医药
1.2 为了验证实验的可靠性，我们在每批试验过程中以H37RV标准菌株进行了平行性对照试验。
1.3 抗结核试验药物来源 氧氟沙星由日本第一制药株式会社提供；INH、RFP则采用美国BD公司提供的样品。
2 方法
2.1 实验方法 均按BACTEC法进行[1]。
2.2 各株种氧氟沙星、INH、RFP药物敏感试验。其中氧氟沙星的抑菌浓度是：0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L；INH和RFP抑菌浓度分别依次为：0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0mg/L和1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg/L。
2.3 药敏试验结果判断标准 INH和RFP依照BACTEC法进行判读；氧氟沙星则按日本第一制药株式会社提供的标准评判[2]。
, 百拇医药
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 氧氟沙星和INH、RFP抑制结核分枝杆菌的活性作用见表1。INH、RFP的耐药率为100%。
表1 52株结核分枝杆菌药敏试验结果 Antbiotic
MIC Range
MIc50
MIC90
Sensitivity(%)
Ofloxacin
0.25～8.0
, 百拇医药 1.0
4.0
96.15
Isoniazid
0.05～2.0
1.0
>2.0
0.00
Rifampin
1.0～32.0
32.0
>32.0
0.00
, 百拇医药
3.2 三种药物对H37RV标准菌株的MIC 50和MIC 90的数值见表2。
表2 H37RV株药敏试验结果 Antbiotic
MIC Range
MIc50
MIC90
Sensitivity(%)
Ofloxacin
0.25～8.0
0.5
0.5
100.0
, http://www.100md.com
Isoniazid
0.05～2.0
10.05
0.05
100.0
Rifampin
1.0～32.0
1.0
1.0
100.0
3.3 临床标本分离出的52株结核分枝杆菌，其对INH、RFP、SM、EMB的耐药和对氧氟沙星敏感浓度的分布见表3。表3 52株菌株耐药及氧氟沙星抑菌浓度分布情况 Susceptibil patte to
, 百拇医药
four drugs
(INH.SM.RFP.EMB)
No、of
isolates
Susceptibil to ofloxacin
MICmg/L
0.25～2.0
4.0～8.0
>8.0
Resist to H.R
19
, 百拇医药 17
2
0
Resist to H.R.S
15
10
4
1
Resist to H.R.S.E
12
11
1
0
, 百拇医药
Resist to H.R.E
6
3
2
1
Total
52
41
9
2
4 讨论
4.1 据Garcia-Rodriguez′s等在1988年的实验报道[4]，氧氟沙星对结核分枝杆菌的MIC50和MIC90均在0.5mg/L；1990年Van′s所做的147例实验，也重复了前者的实验数据。我们用H37RV标准菌株对氧氟沙星抑菌试验结果，与上述各学者相同。但临床标本分离出的结核分枝杆菌，则与Gorzynski′s和Tomioka′s等所做的实验较为接近。
, http://www.100md.com
4.2 临床分离出的结核分枝杆菌，由于某些客观因素，如大量使用抗生素，可使细菌将带有遗传信息的DNA，通过接合或转导作用而把R因子传递给另一细菌或感染原发性耐药菌株。其对抗结核药物的MIC值比H37RV标准株要高。
氧氟沙星对H37RV株的MIC50和MIC90均在0.5mg/L；而临床分离出的结核分枝杆菌的MIC50在1.0mg/L，MIC90则高达4.0,mg/L；INH的MIC50，临床分离出的结核分枝杆菌在1.0mg/L,MIC90也在2.0mg/L以上；RFP的MIC50和MIC90，依次为32和>32mg/L；这与H37RV株的INH和RFP的MIC50和MIC90的0.05和1.0mg/L浓度相比较，有显著性的差异(P<0.01)。
4.3 52株临床分离菌株中，有2例对氧氟沙星产生抗药性(占3.85%)，究其原因：其中1例患者入院后第2天即留取痰液标本作结核分枝杆菌培养，而入院前服药情况不详；另1例患者则在留取痰液标本作结核分枝杆菌培养前的17天，曾连续服用可乐必妥(每次200mg,每天2次)13天，后改服氧氟沙星至留取标本当日，该患者在服用可乐必妥13天和氧氟沙星4天后就产生了对氧氟沙星的抗药性，这能否说明由于大量使用喹诺酮类药物，引起抗生素介导的选择性耐药突变而致结核分枝杆菌对氧氟沙星易产生抗药性[5]?尚待进一步研究证实。
, http://www.100md.com
4.4 本实验结果表明：氧氟沙星对结核分枝杆菌有明显的抗菌活性，当临床分离出的菌株对几种常用的抗结核药物产生耐受性时，氧氟沙星不失为一种有效的首选药物。
参考文献
1 吴龙章.BACTEC系统在结核菌快速培养中的应用.中华结核和呼吸杂志，1992；4：245
2 Wing Wai Yew,Susan Yuk-lin Kwan,Wing Keung Ma,et al.In-vitro activity of quinolones and macrolides against mycobateria.J Antimicrob Chemother,1994；34:343～351
3 郭钧主编.结核病细菌学.辽宁科学技术出版社，1983；132～153
, 百拇医药 4 J.A,Garcia-Rodriguez,A.C.Gomez Garcia.In-vitro activities of quinolones against mycobacteria.J Antimicrob Chemother,1993；32:797～808
5 Pena C,Albareda JM,Pallares R,et al.Relationship between quinolone use and emergence of ciprofloxacin-resistant Escherichia coli in bloodstream infections.Antimicrob Agents Chemother,1995；39:520～524
(收稿：1999-02-19), 百拇医药
单位：广州市胸科医院，广州 510000
关键词：氧氟沙星；MIC；结核分枝杆菌
广州医学院学报990219 中图分类号 R978.19
目前，临床上几种常用的抗结核药物均已产生不同程度的抗药性。加速研制开发和筛选新的抗结核药物，是一个刻不容缓的重要课题。为此我们对临床分离出的耐药株种，用氧氟沙星(Ofloxacin)进行了抑制结核分枝杆菌敏感试验，并与临床上常用的雷米封(ISoniazid,INH)利福平(Rimfampin,RFP)进行了比较，报告如下。
1 材料和方法
1.1 菌株来源 52株均来自我院肺结核住院病人从痰液中分离出并经按常规鉴定为结核分枝杆菌且对INH、RFP等药物产生抗药性的株种。其中50株在1个月内未用过氧氟沙星；1株用药不详；另1株则在2周内临床上使用过氧氟沙星治疗。
, 百拇医药
1.2 为了验证实验的可靠性，我们在每批试验过程中以H37RV标准菌株进行了平行性对照试验。
1.3 抗结核试验药物来源 氧氟沙星由日本第一制药株式会社提供；INH、RFP则采用美国BD公司提供的样品。
2 方法
2.1 实验方法 均按BACTEC法进行[1]。
2.2 各株种氧氟沙星、INH、RFP药物敏感试验。其中氧氟沙星的抑菌浓度是：0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L；INH和RFP抑菌浓度分别依次为：0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0mg/L和1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg/L。
2.3 药敏试验结果判断标准 INH和RFP依照BACTEC法进行判读；氧氟沙星则按日本第一制药株式会社提供的标准评判[2]。
, 百拇医药
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 氧氟沙星和INH、RFP抑制结核分枝杆菌的活性作用见表1。INH、RFP的耐药率为100%。
表1 52株结核分枝杆菌药敏试验结果 Antbiotic
MIC Range
MIc50
MIC90
Sensitivity(%)
Ofloxacin
0.25～8.0
, 百拇医药 1.0
4.0
96.15
Isoniazid
0.05～2.0
1.0
>2.0
0.00
Rifampin
1.0～32.0
32.0
>32.0
0.00
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3.2 三种药物对H37RV标准菌株的MIC 50和MIC 90的数值见表2。
表2 H37RV株药敏试验结果 Antbiotic
MIC Range
MIc50
MIC90
Sensitivity(%)
Ofloxacin
0.25～8.0
0.5
0.5
100.0
, http://www.100md.com
Isoniazid
0.05～2.0
10.05
0.05
100.0
Rifampin
1.0～32.0
1.0
1.0
100.0
3.3 临床标本分离出的52株结核分枝杆菌，其对INH、RFP、SM、EMB的耐药和对氧氟沙星敏感浓度的分布见表3。表3 52株菌株耐药及氧氟沙星抑菌浓度分布情况 Susceptibil patte to
, 百拇医药
four drugs
(INH.SM.RFP.EMB)
No、of
isolates
Susceptibil to ofloxacin
MICmg/L
0.25～2.0
4.0～8.0
>8.0
Resist to H.R
19
, 百拇医药 17
2
0
Resist to H.R.S
15
10
4
1
Resist to H.R.S.E
12
11
1
0
, 百拇医药
Resist to H.R.E
6
3
2
1
Total
52
41
9
2
4 讨论
4.1 据Garcia-Rodriguez′s等在1988年的实验报道[4]，氧氟沙星对结核分枝杆菌的MIC50和MIC90均在0.5mg/L；1990年Van′s所做的147例实验，也重复了前者的实验数据。我们用H37RV标准菌株对氧氟沙星抑菌试验结果，与上述各学者相同。但临床标本分离出的结核分枝杆菌，则与Gorzynski′s和Tomioka′s等所做的实验较为接近。
, http://www.100md.com
4.2 临床分离出的结核分枝杆菌，由于某些客观因素，如大量使用抗生素，可使细菌将带有遗传信息的DNA，通过接合或转导作用而把R因子传递给另一细菌或感染原发性耐药菌株。其对抗结核药物的MIC值比H37RV标准株要高。
氧氟沙星对H37RV株的MIC50和MIC90均在0.5mg/L；而临床分离出的结核分枝杆菌的MIC50在1.0mg/L，MIC90则高达4.0,mg/L；INH的MIC50，临床分离出的结核分枝杆菌在1.0mg/L,MIC90也在2.0mg/L以上；RFP的MIC50和MIC90，依次为32和>32mg/L；这与H37RV株的INH和RFP的MIC50和MIC90的0.05和1.0mg/L浓度相比较，有显著性的差异(P<0.01)。
4.3 52株临床分离菌株中，有2例对氧氟沙星产生抗药性(占3.85%)，究其原因：其中1例患者入院后第2天即留取痰液标本作结核分枝杆菌培养，而入院前服药情况不详；另1例患者则在留取痰液标本作结核分枝杆菌培养前的17天，曾连续服用可乐必妥(每次200mg,每天2次)13天，后改服氧氟沙星至留取标本当日，该患者在服用可乐必妥13天和氧氟沙星4天后就产生了对氧氟沙星的抗药性，这能否说明由于大量使用喹诺酮类药物，引起抗生素介导的选择性耐药突变而致结核分枝杆菌对氧氟沙星易产生抗药性[5]?尚待进一步研究证实。
, http://www.100md.com
4.4 本实验结果表明：氧氟沙星对结核分枝杆菌有明显的抗菌活性，当临床分离出的菌株对几种常用的抗结核药物产生耐受性时，氧氟沙星不失为一种有效的首选药物。
参考文献
1 吴龙章.BACTEC系统在结核菌快速培养中的应用.中华结核和呼吸杂志，1992；4：245
2 Wing Wai Yew,Susan Yuk-lin Kwan,Wing Keung Ma,et al.In-vitro activity of quinolones and macrolides against mycobateria.J Antimicrob Chemother,1994；34:343～351
3 郭钧主编.结核病细菌学.辽宁科学技术出版社，1983；132～153
, 百拇医药 4 J.A,Garcia-Rodriguez,A.C.Gomez Garcia.In-vitro activities of quinolones against mycobacteria.J Antimicrob Chemother,1993；32:797～808
5 Pena C,Albareda JM,Pallares R,et al.Relationship between quinolone use and emergence of ciprofloxacin-resistant Escherichia coli in bloodstream infections.Antimicrob Agents Chemother,1995；39:520～524
(收稿：1999-02-19), 百拇医药