糖尿病早期大鼠肾小管上皮细胞凋亡与增殖的观察
作者：康健 羊惠君 李爱冬
单位：康 健(川北医学院人体解剖学教研室 637000)；羊惠君 李爱冬(华西医科大学人体解剖学教研室)
关键词：糖尿病大鼠；肾小管上皮细胞；凋亡和增殖
川北医学院学报/990202提 要 为了解糖尿病早期肾小管上皮细胞(renal tubular epithlial cells, 简称RTECs)是否有损害，探讨微蛋白尿发生的机制。方法：四氧嘧啶(alloxan)尾静脉注射(50 mg/kg)雄性Wistar大鼠60只，石蜡包埋肾切片经TUNEL法和PCNA、BrdU免疫组化染色。结果：成模后20～60 d和90～140 d，TUNEL法阳性RTECs主要出现在远端小管、髓质肾小管、集合管。PCNA、BrdU免疫组化染色阳性RTECs主要见于注射后40 d、130～140 d皮质和髓质肾小管、集合管，其出现的部位、数量与凋亡基本一致。结论：本研究结果表明，高糖对RTECs是一种亚坏死性损伤剂，导致其凋亡发生率增加，同时可能影响肾小管重吸收和分泌功能。RTECs增殖发生略晚，但与凋亡发生率相匹配。笔者推测借此种机制糖尿病早期RTECs的数目和肾小管的形态得以保护，造成一般组织学方法不能将RTECs的损伤检测出来。
, http://www.100md.com
文章编号：1005-3697(1999)62-0001-03 中图分类号：R587.1 文献标识码：A
An Observation on Apoptosis and Proliferation of the Renal Tubular
Epithelium of rats in the Early Phase of Diabetes Mellitus
Kang Jian
Department of Anatomy, North Sichuan Medical
College, Nanchong 637000 Yang Huijun, Li Aidong
Department of Anatomy, School of Basic Medical Sciences,West China University of Medical Sciences, Chengdu 61004
, http://www.100md.com
ABSTRACT In order to know whether or not the renal tubular epithelial cells(RTECs)are damaged during the early phase of diabetes mellitus(DN),and to understand the pathogenic mechanism of micro-protein urine, we designed this experiment. MATERIAL AND METHODS:60 male Wistar rats were injected alloxan (50mg/kg)through the tail vein; the paraffin-embedded sections of kidneys were displayed by TUNEL method, PCNA and BrdU immunohistochemical staining. RESULTS:①During 20～60 days and 90～140 days after the injection, TUNEL(+) RTECs were mainly distributed in the distant tubules, the medullar tubules, and the collection tubules. The TUNEL(+) cells possessed typical morphological characteristics of apoptosis, and apoptotic bodies were occasionally found. With the extension of DN, the majority of TUNEL(+) RTECs were located in the medulla. ②On the 40 th day and during 130～140 days after the injection, the PCNA and BrdU positive immunostained RTECs were mainly distributed in the cortical and medullar tubules and collecting tubules. Their location and number were the same as those of the apoptotic RTECs. CONCLUSION:The above results suggested high blood sugar was a subnecrotic damage agent to RTECs, and could increase the apoptotic cells, and might offect the reabsorption and secretion of the renal tubules. The proliferation of RTECs occurred slightly later, and its rate matched up to apoptosis of RTECs. We guessed that in the early phase of DN the normal quantity of RTECs and morphological characteristics of the renal tubules were maintained through this new balance, which caused the damage of RTECs not to be observed by ordinary histological methods.
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Key Words Diabetes Rat Apoptosis Proliferation Renal tubular epithelial cell
糖尿病肾病是糖尿病的主要慢性并发症之一，超过30 %的终末期肾功能衰竭是由糖尿病所致[1]。以往较强调肾小球病变在糖尿病肾病中的作用，近年，Ziyadeh[2]推测肾小管病变也对糖尿病早期微蛋白尿的发生起重要作用，肾小管对蛋白质的重吸收率和分泌率异常是亚临床蛋白尿的原因，但至今未发现糖尿病早期有RTECs损害的形态学证据。Ishii等(3)最近报道了短期持续高糖输入可导致RTECs发生凋亡，Lieberthal等(4)报道缺血、中毒导致RTECs凋亡发生是急性肾功衰的主要原因之一。据此笔者对糖尿病早期大鼠RTECs的凋亡与增殖特性进行观察，以期加深了解糖尿病肾病的发生机理。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 糖尿病大鼠模型
健康雄性Wistar大鼠(华西医科大学实验动物中心提供)60只，体重200～300g，四氧嘧啶(alloxan)尾静脉注射(50 mg/kg)造糖尿病模型，24 h后测尿糖(试纸法)、血糖(美国强生公司血糖仪)，以后每周测量一次尿糖、血糖。尿糖(+++)、血溏25 mmol/L(正常为6 mmol/L以下)以上的为模型鼠，分别在7、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140 d处死两只模型鼠，以及两只同窝未注射大鼠。处死前2 h按50 mg/kg腹腔内注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-dexoy-uridine,BrdU)，然后按30 mg/kg苯巴比妥腹腔注射麻醉，4 %多聚甲醛经心灌注固定。取出肾，经脱水、透明、包埋后，制7μm厚的连续石蜡切片。
1.2 TUNEL法染色
①预处理：切片经脱腊、水化后，入0.01M柠檬酸液，经微波(国产Galanz微波炉750w)处理2～3 min(86～89℃)。②凋亡细胞标记：将TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labelling TUNEL)液Ⅰ与Ⅱ(宝灵曼公司，德国)按1∶9比例在蜡膜上混匀后覆盖切片上组织，孵育80 min(37℃)；抗荧光素抗体(结合有碱性磷酸酶)孵育45 min(37℃)；坚固成红色，光镜观察。
, 百拇医药
1.3 免疫组化染色
切片经脱腊、水化后，用0.03 %甲醇-过氧化氢液处理5 min,再经0.1 %胰蛋白酶消化5 min。用单克隆抗增殖细胞核抗原(proliferative cellular nuclear antigen, PCNA)血清(1∶100，DAK0)，抗BrdU血清(1∶50，Santa Cruezy)为一抗孵育切片过夜(4 ℃)；生物素标记的抗鼠(兔)IgG血清(Vector公司，美国)孵育2 h(室温)；ABC复合物(Vector公司，美国)孵育2 h(室温)；DAB-H2O2成色；苏木素背景染色，光镜观察。
2 结果
2.1 肾小管TUNEL法标记
对照组大鼠肾小管和集合管RTECs为TUNEL法标记阴性。实验组大鼠肾分别在20～60、90～140 d出现TUNEL法标记阳性的RTECs，以40 d和130 d的数目最多。被标记的细胞可见核浓缩(图1a)、新月形核(图1b)、环形核(图1c)等凋亡细胞典型的形态学特征，偶尔可见凋亡小体(图1d)。阳性细胞主要位于远端小管、髓质肾小管和集合管。20～60 d实验大鼠远端小管阳性细胞数多于近端小管，髓质小管和集合管阳性细胞又比皮质小管多(图2a,b)。90～140 d实验大鼠皮质小管上皮细胞偶见TUNEL法阳性细胞，数量明显少于第一次，而髓质小管阳性细胞数明显多于第一次(图2c,d)。70～80 d实验大鼠未见有RTECs被TUNEL法标记阳性。所有切片肾小球未见TUNEL法标记阳性细胞。
, 百拇医药
图1 糖尿病大鼠凋亡的RTECs具有典型的形态特征，TUNEL法染色，×10000。
A.阳性细胞核内染色质浓缩(↑)， B.呈新月形(↑)，C.呈环形(↑)。 D.偶见RTEC衍变为凋亡小体(↑)。
2.2 PCNA、BrdU免疫组化反应
对照组大鼠肾小管和集合管RTECs为PCNA和BrdU免疫组化染色阴性。实验组大鼠肾分别在40 d、130～140 d出现PCNA和BrdU阳性的RTECs，主要位于皮质远端小管、髓质小管和集合管(图3a,b、c、d)。从连续切片上看，具有PCNA、BrdU阳性的肾小管和集合管，同时具有TUNEL阳性细胞，而且数目基本一致。
2.3 皮、髓质肾小管与间质的观察
7～140天实验组与对照组大鼠比较，未见皮、髓质肾小管萎缩和基底膜增厚，未见肾间质扩张和纤维化，与正常大鼠小管和间质的形态、结构基本一致。
, 百拇医药
图2 糖尿病大鼠RTECs凋亡发生的部位，TUNEL法染色，×400。
A.40 d模型大鼠皮质RTECs凋亡(↑)；
B.40 d模型大鼠髓质RTECs凋亡(↑)；
C.90 d模型大鼠皮质RTECs凋亡(↑)；
D.90 d模型大鼠髓质RTECs凋亡(↑)。
图3 糖尿病RTECs增殖发生的部位，×400。
A.40 d模型大鼠皮质RTECs增殖(↑)，PCNA免疫组化染色；
B.40 d模型大鼠髓质RTECs增殖(↑)，BrdU免疫组化染色；
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C.130 d模型大鼠皮质RTECs增殖(↑)，PCNA免疫组化染色；
D.130 d模型大鼠髓质RTECs增殖(↑)，BrdU免疫组化染色。
3 讨论
3.1 高糖造成RTECs凋亡的加速
TUNEL法是近年来常用的一种标记凋亡细胞的特异方法。因RTECs具有很低的凋亡发生频率[5]，凋亡细胞的形态变化过程时间短，正常肾切片很难找到TUNEL阳性细胞[5]。Lieberthal[4]等观察到RTECs在受到亚坏死性损害(如低程度的缺氧、小剂量的中毒)时有凋亡发生频率增高，肾切片上可见有RTECs呈TUNEL法染色阳性。并认为，这是肾清除受损细胞同时避免免疫反应的防御反应。本研究观察到糖尿病早期远端小管、髓质小管和集合管有TUNEL法标记阳性的RTECs，这说明糖尿病的高糖对RTECs来讲为一种亚坏死损伤剂，它可损害RTECs，引起它们凋亡发生频率增加。肾也可能以这种方式在糖尿病早期清除受损RTECs，避免炎症反应。
, 百拇医药
过去缺乏糖尿病早期RTECs损害的证据，将微蛋白尿的原因完全归于肾小球滤过率增加。最近不少作者[1、6、7]通过尿液的检测，推测糖尿病早期肾小管功能障碍也是引起微蛋白尿的原因。本次实验结果提示糖尿病早期高糖对RTECs有损害，在诱导RTECs凋亡的同时可能影响它的功能，为解释糖尿病早期有肾小管功能紊乱提供了形态学的证据。
3.2 RTECs凋亡加速同时有增殖加速
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种δ聚合酶的附属蛋白，能促进DNA聚合酶δ延伸DNA链，在G1/S期交界处开始出现于细胞核中，以S期合成量最大，可作为判断细胞进入周期的一个标志[8]。BrdU能代替胸腺嘧啶参与DNA合成，在S期大量掺入细胞核中，也是判断细胞处于增殖的常用标志。正常RTECs具有很低的增殖发生频率[5]，不能被PCNA和BrdU所标记[5]。本次研究观察到：糖尿病早期大鼠肾远端小管、髓质肾小管和集合管的RTECs有两次被PCNA和BrdU所标记，这一结果表明糖尿病早期大鼠RTECs不仅有凋亡频率增加，也有增殖频率的增加。
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如从PCNA和BrdU免疫反应阳性RTECs出现的部位和数目来看，它们与TUNEL法染色阳性RTECs的情况基本一致，但出现的时间略晚于后者。结果提示糖尿病早期RTECs凋亡与增殖具有明显的时空关系，可能某一部位RTECs发生凋亡后，此处即有RTECs增殖，以补充减少的RTECs的数目。根据以前和本次研究都未观察到糖尿病早期肾小管有形态的改变，笔者还推测糖尿病早期RTECs凋亡发生频率与增殖频率的新平衡可能是一种肾脏的保护机制，借以维持肾小管的正常形态结构。因此，常规组织学染色方法不易检测出糖尿病早期肾小管形态结构的改变。
参考文献
1 侯凡凡，张训.晚期糖基化终产物和氧化应激反应在糖尿病肾病发病机制中的作用.中华肾脏病杂志，1997；13(6)：376～378
2 Ziyadeh FN, Goldfarb S. The renal tubulointerstitium in diabetes mellitus. Kidney Int, 1991;39:464～475
, 百拇医药
3 Ishii N, Ogawa Z, Suzuki K, et al.Glucose loading induces DNA fragmentation in rat proximal tubular cells. Metabolism, 1996;45(110:1348～1353
4 Lieberthal W, Levine JS. Mechanisms of apoptosis and its potential role in renal tubular epithelial cell injury. Am J Physiol, 1996;271:F477～488
5 Bttyan R and Gobe G. Apoptosis in the mammalian Kidney:incidence, effectors, and molecular control in normal development and disease states. Advpharmacol, 1997;41:369
, http://www.100md.com
6 沈克勤，杨俊伟，郑丰，等.非胰岛素依赖性糖尿病肾病患者肾小管间质病变的观察.中华肾脏病杂志，1995；11(5)：272～274
7 周江华，郝传明，林善锬，等.α1-微球蛋白在糖尿病肾病早期病变诊断中的意义.中华肾脏病杂志，1995；11(1)：26～27
8 Dierendonk JHV, Wijsman JH, Keijzer R, et al. Cell-cycle-related staining patterns of antiproliferating cell nuclear antigen monoclonal antibodies, comparison with BrdUrd labeling and Ki-67 staining. Am J Pathol, 1991;138:1165～1172
(收稿日期：1999-04-28), 百拇医药
单位：康 健(川北医学院人体解剖学教研室 637000)；羊惠君 李爱冬(华西医科大学人体解剖学教研室)
关键词：糖尿病大鼠；肾小管上皮细胞；凋亡和增殖
川北医学院学报/990202提 要 为了解糖尿病早期肾小管上皮细胞(renal tubular epithlial cells, 简称RTECs)是否有损害，探讨微蛋白尿发生的机制。方法：四氧嘧啶(alloxan)尾静脉注射(50 mg/kg)雄性Wistar大鼠60只，石蜡包埋肾切片经TUNEL法和PCNA、BrdU免疫组化染色。结果：成模后20～60 d和90～140 d，TUNEL法阳性RTECs主要出现在远端小管、髓质肾小管、集合管。PCNA、BrdU免疫组化染色阳性RTECs主要见于注射后40 d、130～140 d皮质和髓质肾小管、集合管，其出现的部位、数量与凋亡基本一致。结论：本研究结果表明，高糖对RTECs是一种亚坏死性损伤剂，导致其凋亡发生率增加，同时可能影响肾小管重吸收和分泌功能。RTECs增殖发生略晚，但与凋亡发生率相匹配。笔者推测借此种机制糖尿病早期RTECs的数目和肾小管的形态得以保护，造成一般组织学方法不能将RTECs的损伤检测出来。
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文章编号：1005-3697(1999)62-0001-03 中图分类号：R587.1 文献标识码：A
An Observation on Apoptosis and Proliferation of the Renal Tubular
Epithelium of rats in the Early Phase of Diabetes Mellitus
Kang Jian
Department of Anatomy, North Sichuan Medical
College, Nanchong 637000 Yang Huijun, Li Aidong
Department of Anatomy, School of Basic Medical Sciences,West China University of Medical Sciences, Chengdu 61004
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ABSTRACT In order to know whether or not the renal tubular epithelial cells(RTECs)are damaged during the early phase of diabetes mellitus(DN),and to understand the pathogenic mechanism of micro-protein urine, we designed this experiment. MATERIAL AND METHODS:60 male Wistar rats were injected alloxan (50mg/kg)through the tail vein; the paraffin-embedded sections of kidneys were displayed by TUNEL method, PCNA and BrdU immunohistochemical staining. RESULTS:①During 20～60 days and 90～140 days after the injection, TUNEL(+) RTECs were mainly distributed in the distant tubules, the medullar tubules, and the collection tubules. The TUNEL(+) cells possessed typical morphological characteristics of apoptosis, and apoptotic bodies were occasionally found. With the extension of DN, the majority of TUNEL(+) RTECs were located in the medulla. ②On the 40 th day and during 130～140 days after the injection, the PCNA and BrdU positive immunostained RTECs were mainly distributed in the cortical and medullar tubules and collecting tubules. Their location and number were the same as those of the apoptotic RTECs. CONCLUSION:The above results suggested high blood sugar was a subnecrotic damage agent to RTECs, and could increase the apoptotic cells, and might offect the reabsorption and secretion of the renal tubules. The proliferation of RTECs occurred slightly later, and its rate matched up to apoptosis of RTECs. We guessed that in the early phase of DN the normal quantity of RTECs and morphological characteristics of the renal tubules were maintained through this new balance, which caused the damage of RTECs not to be observed by ordinary histological methods.
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Key Words Diabetes Rat Apoptosis Proliferation Renal tubular epithelial cell
糖尿病肾病是糖尿病的主要慢性并发症之一，超过30 %的终末期肾功能衰竭是由糖尿病所致[1]。以往较强调肾小球病变在糖尿病肾病中的作用，近年，Ziyadeh[2]推测肾小管病变也对糖尿病早期微蛋白尿的发生起重要作用，肾小管对蛋白质的重吸收率和分泌率异常是亚临床蛋白尿的原因，但至今未发现糖尿病早期有RTECs损害的形态学证据。Ishii等(3)最近报道了短期持续高糖输入可导致RTECs发生凋亡，Lieberthal等(4)报道缺血、中毒导致RTECs凋亡发生是急性肾功衰的主要原因之一。据此笔者对糖尿病早期大鼠RTECs的凋亡与增殖特性进行观察，以期加深了解糖尿病肾病的发生机理。
1 材料与方法
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1.1 糖尿病大鼠模型
健康雄性Wistar大鼠(华西医科大学实验动物中心提供)60只，体重200～300g，四氧嘧啶(alloxan)尾静脉注射(50 mg/kg)造糖尿病模型，24 h后测尿糖(试纸法)、血糖(美国强生公司血糖仪)，以后每周测量一次尿糖、血糖。尿糖(+++)、血溏25 mmol/L(正常为6 mmol/L以下)以上的为模型鼠，分别在7、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140 d处死两只模型鼠，以及两只同窝未注射大鼠。处死前2 h按50 mg/kg腹腔内注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-dexoy-uridine,BrdU)，然后按30 mg/kg苯巴比妥腹腔注射麻醉，4 %多聚甲醛经心灌注固定。取出肾，经脱水、透明、包埋后，制7μm厚的连续石蜡切片。
1.2 TUNEL法染色
①预处理：切片经脱腊、水化后，入0.01M柠檬酸液，经微波(国产Galanz微波炉750w)处理2～3 min(86～89℃)。②凋亡细胞标记：将TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labelling TUNEL)液Ⅰ与Ⅱ(宝灵曼公司，德国)按1∶9比例在蜡膜上混匀后覆盖切片上组织，孵育80 min(37℃)；抗荧光素抗体(结合有碱性磷酸酶)孵育45 min(37℃)；坚固成红色，光镜观察。
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1.3 免疫组化染色
切片经脱腊、水化后，用0.03 %甲醇-过氧化氢液处理5 min,再经0.1 %胰蛋白酶消化5 min。用单克隆抗增殖细胞核抗原(proliferative cellular nuclear antigen, PCNA)血清(1∶100，DAK0)，抗BrdU血清(1∶50，Santa Cruezy)为一抗孵育切片过夜(4 ℃)；生物素标记的抗鼠(兔)IgG血清(Vector公司，美国)孵育2 h(室温)；ABC复合物(Vector公司，美国)孵育2 h(室温)；DAB-H2O2成色；苏木素背景染色，光镜观察。
2 结果
2.1 肾小管TUNEL法标记
对照组大鼠肾小管和集合管RTECs为TUNEL法标记阴性。实验组大鼠肾分别在20～60、90～140 d出现TUNEL法标记阳性的RTECs，以40 d和130 d的数目最多。被标记的细胞可见核浓缩(图1a)、新月形核(图1b)、环形核(图1c)等凋亡细胞典型的形态学特征，偶尔可见凋亡小体(图1d)。阳性细胞主要位于远端小管、髓质肾小管和集合管。20～60 d实验大鼠远端小管阳性细胞数多于近端小管，髓质小管和集合管阳性细胞又比皮质小管多(图2a,b)。90～140 d实验大鼠皮质小管上皮细胞偶见TUNEL法阳性细胞，数量明显少于第一次，而髓质小管阳性细胞数明显多于第一次(图2c,d)。70～80 d实验大鼠未见有RTECs被TUNEL法标记阳性。所有切片肾小球未见TUNEL法标记阳性细胞。
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图1 糖尿病大鼠凋亡的RTECs具有典型的形态特征，TUNEL法染色，×10000。
A.阳性细胞核内染色质浓缩(↑)， B.呈新月形(↑)，C.呈环形(↑)。 D.偶见RTEC衍变为凋亡小体(↑)。
2.2 PCNA、BrdU免疫组化反应
对照组大鼠肾小管和集合管RTECs为PCNA和BrdU免疫组化染色阴性。实验组大鼠肾分别在40 d、130～140 d出现PCNA和BrdU阳性的RTECs，主要位于皮质远端小管、髓质小管和集合管(图3a,b、c、d)。从连续切片上看，具有PCNA、BrdU阳性的肾小管和集合管，同时具有TUNEL阳性细胞，而且数目基本一致。
2.3 皮、髓质肾小管与间质的观察
7～140天实验组与对照组大鼠比较，未见皮、髓质肾小管萎缩和基底膜增厚，未见肾间质扩张和纤维化，与正常大鼠小管和间质的形态、结构基本一致。
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图2 糖尿病大鼠RTECs凋亡发生的部位，TUNEL法染色，×400。
A.40 d模型大鼠皮质RTECs凋亡(↑)；
B.40 d模型大鼠髓质RTECs凋亡(↑)；
C.90 d模型大鼠皮质RTECs凋亡(↑)；
D.90 d模型大鼠髓质RTECs凋亡(↑)。
图3 糖尿病RTECs增殖发生的部位，×400。
A.40 d模型大鼠皮质RTECs增殖(↑)，PCNA免疫组化染色；
B.40 d模型大鼠髓质RTECs增殖(↑)，BrdU免疫组化染色；
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C.130 d模型大鼠皮质RTECs增殖(↑)，PCNA免疫组化染色；
D.130 d模型大鼠髓质RTECs增殖(↑)，BrdU免疫组化染色。
3 讨论
3.1 高糖造成RTECs凋亡的加速
TUNEL法是近年来常用的一种标记凋亡细胞的特异方法。因RTECs具有很低的凋亡发生频率[5]，凋亡细胞的形态变化过程时间短，正常肾切片很难找到TUNEL阳性细胞[5]。Lieberthal[4]等观察到RTECs在受到亚坏死性损害(如低程度的缺氧、小剂量的中毒)时有凋亡发生频率增高，肾切片上可见有RTECs呈TUNEL法染色阳性。并认为，这是肾清除受损细胞同时避免免疫反应的防御反应。本研究观察到糖尿病早期远端小管、髓质小管和集合管有TUNEL法标记阳性的RTECs，这说明糖尿病的高糖对RTECs来讲为一种亚坏死损伤剂，它可损害RTECs，引起它们凋亡发生频率增加。肾也可能以这种方式在糖尿病早期清除受损RTECs，避免炎症反应。
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过去缺乏糖尿病早期RTECs损害的证据，将微蛋白尿的原因完全归于肾小球滤过率增加。最近不少作者[1、6、7]通过尿液的检测，推测糖尿病早期肾小管功能障碍也是引起微蛋白尿的原因。本次实验结果提示糖尿病早期高糖对RTECs有损害，在诱导RTECs凋亡的同时可能影响它的功能，为解释糖尿病早期有肾小管功能紊乱提供了形态学的证据。
3.2 RTECs凋亡加速同时有增殖加速
增殖细胞核抗原(PCNA)是一种δ聚合酶的附属蛋白，能促进DNA聚合酶δ延伸DNA链，在G1/S期交界处开始出现于细胞核中，以S期合成量最大，可作为判断细胞进入周期的一个标志[8]。BrdU能代替胸腺嘧啶参与DNA合成，在S期大量掺入细胞核中，也是判断细胞处于增殖的常用标志。正常RTECs具有很低的增殖发生频率[5]，不能被PCNA和BrdU所标记[5]。本次研究观察到：糖尿病早期大鼠肾远端小管、髓质肾小管和集合管的RTECs有两次被PCNA和BrdU所标记，这一结果表明糖尿病早期大鼠RTECs不仅有凋亡频率增加，也有增殖频率的增加。
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如从PCNA和BrdU免疫反应阳性RTECs出现的部位和数目来看，它们与TUNEL法染色阳性RTECs的情况基本一致，但出现的时间略晚于后者。结果提示糖尿病早期RTECs凋亡与增殖具有明显的时空关系，可能某一部位RTECs发生凋亡后，此处即有RTECs增殖，以补充减少的RTECs的数目。根据以前和本次研究都未观察到糖尿病早期肾小管有形态的改变，笔者还推测糖尿病早期RTECs凋亡发生频率与增殖频率的新平衡可能是一种肾脏的保护机制，借以维持肾小管的正常形态结构。因此，常规组织学染色方法不易检测出糖尿病早期肾小管形态结构的改变。
参考文献
1 侯凡凡，张训.晚期糖基化终产物和氧化应激反应在糖尿病肾病发病机制中的作用.中华肾脏病杂志，1997；13(6)：376～378
2 Ziyadeh FN, Goldfarb S. The renal tubulointerstitium in diabetes mellitus. Kidney Int, 1991;39:464～475
, 百拇医药
3 Ishii N, Ogawa Z, Suzuki K, et al.Glucose loading induces DNA fragmentation in rat proximal tubular cells. Metabolism, 1996;45(110:1348～1353
4 Lieberthal W, Levine JS. Mechanisms of apoptosis and its potential role in renal tubular epithelial cell injury. Am J Physiol, 1996;271:F477～488
5 Bttyan R and Gobe G. Apoptosis in the mammalian Kidney:incidence, effectors, and molecular control in normal development and disease states. Advpharmacol, 1997;41:369
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6 沈克勤，杨俊伟，郑丰，等.非胰岛素依赖性糖尿病肾病患者肾小管间质病变的观察.中华肾脏病杂志，1995；11(5)：272～274
7 周江华，郝传明，林善锬，等.α1-微球蛋白在糖尿病肾病早期病变诊断中的意义.中华肾脏病杂志，1995；11(1)：26～27
8 Dierendonk JHV, Wijsman JH, Keijzer R, et al. Cell-cycle-related staining patterns of antiproliferating cell nuclear antigen monoclonal antibodies, comparison with BrdUrd labeling and Ki-67 staining. Am J Pathol, 1991;138:1165～1172
(收稿日期：1999-04-28), 百拇医药