幽门螺杆菌相关性胃疾病患者末梢血中Hp-CagAIgG的检测
作者：张玲霞 张沥 刘永国 张宁霞
单位：张玲霞、张沥、张宁霞 陕西省西安市中心医院；刘永国 陕西省西安市第一医院 710003
关键词：幽门螺杆菌；细胞毒素相关蛋白A；斑点金免疫渗滤试验；胃疾病
临床内科杂志/990211 【摘要】目的 了解细胞毒素相关蛋白A在Hp相关性胃疾病中的检出情况,并对所采用的方法进行评价。方法 采用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),对168例胃粘膜活检组织快速尿素酶试验、PCR检测及Warthin-Starry染色任二项Hp阳性者的末梢血进行Hp-CagAIgG检测。结果 168例Hp阳性者中,142例Hp-CagAIgG阳性(84.52%),其中慢性浅表性胃炎65.63%(21/32),慢性萎缩性胃炎78.57%(33/42),十二指肠球部溃疡94.74%(36/38),胃溃疡91.67%(33/36),胃癌95%(19/20)。结论 DIGFA能够快速诊断CagA阳性Hp感染,与ELISA法相比除具有较高的特异性及敏感性外,还具有简便、快速、准确等特点。
, 百拇医药
Detection of Hp-CagA IgG in blood ending in Hp-infected gastroduodenal diseases.
Zhang Lingxia,Zhang Li,Liu Yongguo,et al.
Department of Gastroenterology,Xian Central Hospital,Xian 710003.
【Abstract】Objective To investigate the prevalence of cytotoxin associated gene A(CagA)in Hp-infected gastroduodenal diseases and to evaluate the methods used.Methods 168 Hp-infected patients were examined to see if they have Hp-CagA IgG in their peripherat blood by dot immunogold filtration assay(DIGFA)who were examed by rapid urase,PCR and Warthin-Starry stain and two of these three examinations were positive.Results 142 in 168 patients were detected to have Hp-CagA IgG in their peripheral blood(85.52%),including chronic superficial gastritis 65.63%(21/32),chronic atrophic gastritis78.57%(33/42),duodenal ulcer94.74%(36/38),gastric ulcer 91.67%(33/36)and gastric cancer95.00%(19/20).Conclusion DIGFA may be used to detect CagA-Hp infection,not only shows better sensitivity and specificity,but also shows convenient,rapid and reliable features compared with ELISA.
, 百拇医药
【Key words】 Helicobacter pylori Cytotoxin associated gene A Dot immunogold filtration assay Stomach disease
现已确认,幽门螺杆菌(Hp)是慢性萎缩性胃炎及消化性溃疡的主要致病因素之一,与胃癌的发生也有密切关系,人群中Hp感染率在50%以上,其中60%～80%的Hp含有细胞毒素相关蛋白A(CagA),产生cagA基因,与消化系统疾病的关系十分密切[1-3]。斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)具有简便、快速、敏感、特异检测CagA等。本研究采用该方法对168例胃粘膜活检组织行快速尿素酶试验、PCR检测以及Warthin-Starry染色检测Hp任二项阳性者的末梢血进行Hp-CagA-IgG检测,以期达到快速诊断CagA阳性Hp感染的目的,并了解各种胃病与Hp-CagA感染的相互关系,指导Hp相关性胃疾病的防治。
材料与方法
, 百拇医药
一、材料:胃粘膜组织标本全部来自西安市中心医院消化科门诊及住院患者,经胃镜检查及病理组织学检查证实,其中,慢性浅表性胃炎(CSG)32例,慢性萎缩性胃炎(CAG)42例,十二指肠球部溃疡(DU)38例,胃溃疡(GU)36例,胃癌(GCa)20例,共计168例。其中男性96例,女性72例,年龄最大76岁,最小17岁。全部病例均在距幽门口5cm左右胃窦小弯侧同一部位连续取两块胃粘膜组织,分别做组织学检查、快速尿素酶试验和PCR检测。Hp-PCR检测试剂及斑点金免疫渗滤试剂盒由第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所提供。快速尿素酶试剂由珠海克隆科技有限公司提供。胃镜检查用欧林巴斯100型电子胃镜进行。
二、方法:(1)胃粘膜组织Hp的常规检查:在同一部位取两块组织,一块用10%中性福尔马林液固定,常规石蜡包埋,切片,行HE染色做出病理诊断,并采用Warthin-Starry染色,另一块组织作尿素酶试验及Hp-PCR检测。尿素酶试验、PCR检测及Warthin-Starry染色中任两项阳性者判为有Hp感染[4]。(2)末梢血中Hp-CagAIgG检测:①原理:将待检血清加于预先包被有CagA的微孔滤膜上,将羊抗人IgG结合于胶体金颗粒表面,若血清中含有IgG抗CagA抗体,便形成CagA-IgG-抗IgG,在膜上形成肉眼可见的红色斑点。②步骤:采用Hp阳性患者末梢血30μl加入稀释液1ml内待用;在斑点金免疫渗滤板膜中央加洗涤液一滴,待渗入;将待检血10μl逐滴加于膜中央,待渗入后加洗涤液3滴;将胶体金标记物15μl,逐滴加于膜中央,待渗入后,再加洗涤液3滴;③结果判定:在膜中央出现红色斑点为阳性。
, 百拇医药
结果
DIGFA对Hp阳性胃病患者末梢血中Hp-CagAIG的检测结果,见附表。
附表 Hp阳性胃病患者末梢血Hp-CagAIgG检出结果 类别
Hp阳性例数
Hp-CagAIgG阳性例数
检出率(%)
CSG
32
21
65.63
CAG
, 百拇医药
42
33
78.57
DU
38
36
94.74
GU
36
33
91.67
GCa
20
, 百拇医药 19
95.00
总计
168
142
84.52
讨论
目前诊断Hp感染的方法主要有侵入性和非侵入性两大类。前者包括组织病理学检查、尿素酶试验、细菌培养及PCR技术;后者包括尿素酶呼吸试验及ELISA法检测抗体。侵入性检查虽然直观,但费时,患者痛苦大;尿素酶呼吸试验费用昂贵,而ELISA法也存在操作复杂等不足。本研究中,尿素酶试验采用PH的改变,间接判定结果,受外界影响大,若Hp量少,不足以引起PH的改变,就会出现假阴性;W-S银染色与切片的厚度、染色的均匀程度、细菌数量的多少有密切关系,而且仅从细菌形态上进行判断,也容易出现假阳性及假阴性;PCR技术操作要求条件高,易污染,稍有不当也可能出现假阳性。本研究采用DIGFA检测Hp-CagAIgG。该方法是近年来发展起来的免疫检测新技术,其微孔膜既能吸附蛋白质,又具有快速渗滤及毛细管作用,当血清标本通过微孔膜时血清中抗体不仅能与膜上的抗原相结合,还能浓集于膜上而加快免疫反应,且胶体金标记物为红色,结合后即显红色斑点,不需加入其它试剂显示。该方法除具有ELISA法之特异、敏感等特点外,另一显著特点是快速、简便,一般可在2～3分钟内出结果,可以单人份或多人份操作,不需特殊设备,可检测血清,也可检测末梢血,为大面积、大样本的CagA阳性Hp的筛选提供快速、廉价、易普及的检测方法,对了解我国人群中CagA阳性Hp感染状况,指导CagA阳性Hp感染的诊断及治疗提供方便条件。
, 百拇医药
本研究采用斑点金免疫渗滤试验检测Hp阳性胃病患者末梢血Hp-CagAIgG,结果显示,CSG中Hp-CagAIgG为65.63%,CAG为78.57%,DU为94.74%,GU为91.67%,GCa为95%,胃及十二指肠球部溃疡和胃癌组织中CagA阳性Hp感染率显著高于胃炎组,这与文献[2,3,5]报道结果相一致。这一结果提示,DIGFA快速检测Hp-CagAIgG快速检测方法的建立,将为CagA阳性Hp感染的流行病学研究及Hp-CagA与胃、十二指肠疾病关系的研究提供重要条件。
参考文献
1.Blaser MJ,Perez GIP,kleanthous H,et al.Infection with Helicobacter pylori strains possessing CagA is associated with an increased risk of developing adenocarcinoma of the stomach.Cancer research,1995,55∶2111.
, 百拇医药
2.Covacci A,Vensini S,Bugnoli M,et al.Molecular Characterization of the 128-KDa immunobominant antigen of Helicobacter pylori associated with cytotoxicity and duodenal ulcer.Proc Nat Acaid sci USA,1993,90∶5791.
3.CHING ck,Wong BCY,K wok E,et al.Prevalence of cagA-bearing Helicobacter pylori strains detected by the anti-cag A assay in patients with peptic ulcer disease and in controls.The American Journal of Gastroenterrology,1996,91∶949.
, 百拇医药
4.周殿元,张万岱.关于幽门螺杆菌若干问题的意见(草案).中华消化杂志,1997,17(5):287.
5.Lage-Ap,Godfroid-e,Fauconnier-A,et al.Diagnosis of Helicobacter pyrlori infection by PCR;comparison with other invasive techniques and detection of cagA gene in gastric biopsy speamens.J Clin-Microbiol,1995 Oct,33(10)∶2752.
收稿:1998-04-08 修回:1998-07-21, http://www.100md.com
单位：张玲霞、张沥、张宁霞 陕西省西安市中心医院；刘永国 陕西省西安市第一医院 710003
关键词：幽门螺杆菌；细胞毒素相关蛋白A；斑点金免疫渗滤试验；胃疾病
临床内科杂志/990211 【摘要】目的 了解细胞毒素相关蛋白A在Hp相关性胃疾病中的检出情况,并对所采用的方法进行评价。方法 采用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),对168例胃粘膜活检组织快速尿素酶试验、PCR检测及Warthin-Starry染色任二项Hp阳性者的末梢血进行Hp-CagAIgG检测。结果 168例Hp阳性者中,142例Hp-CagAIgG阳性(84.52%),其中慢性浅表性胃炎65.63%(21/32),慢性萎缩性胃炎78.57%(33/42),十二指肠球部溃疡94.74%(36/38),胃溃疡91.67%(33/36),胃癌95%(19/20)。结论 DIGFA能够快速诊断CagA阳性Hp感染,与ELISA法相比除具有较高的特异性及敏感性外,还具有简便、快速、准确等特点。
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Detection of Hp-CagA IgG in blood ending in Hp-infected gastroduodenal diseases.
Zhang Lingxia,Zhang Li,Liu Yongguo,et al.
Department of Gastroenterology,Xian Central Hospital,Xian 710003.
【Abstract】Objective To investigate the prevalence of cytotoxin associated gene A(CagA)in Hp-infected gastroduodenal diseases and to evaluate the methods used.Methods 168 Hp-infected patients were examined to see if they have Hp-CagA IgG in their peripherat blood by dot immunogold filtration assay(DIGFA)who were examed by rapid urase,PCR and Warthin-Starry stain and two of these three examinations were positive.Results 142 in 168 patients were detected to have Hp-CagA IgG in their peripheral blood(85.52%),including chronic superficial gastritis 65.63%(21/32),chronic atrophic gastritis78.57%(33/42),duodenal ulcer94.74%(36/38),gastric ulcer 91.67%(33/36)and gastric cancer95.00%(19/20).Conclusion DIGFA may be used to detect CagA-Hp infection,not only shows better sensitivity and specificity,but also shows convenient,rapid and reliable features compared with ELISA.
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【Key words】 Helicobacter pylori Cytotoxin associated gene A Dot immunogold filtration assay Stomach disease
现已确认,幽门螺杆菌(Hp)是慢性萎缩性胃炎及消化性溃疡的主要致病因素之一,与胃癌的发生也有密切关系,人群中Hp感染率在50%以上,其中60%～80%的Hp含有细胞毒素相关蛋白A(CagA),产生cagA基因,与消化系统疾病的关系十分密切[1-3]。斑点金免疫渗滤试验(DIGFA)具有简便、快速、敏感、特异检测CagA等。本研究采用该方法对168例胃粘膜活检组织行快速尿素酶试验、PCR检测以及Warthin-Starry染色检测Hp任二项阳性者的末梢血进行Hp-CagA-IgG检测,以期达到快速诊断CagA阳性Hp感染的目的,并了解各种胃病与Hp-CagA感染的相互关系,指导Hp相关性胃疾病的防治。
材料与方法
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一、材料:胃粘膜组织标本全部来自西安市中心医院消化科门诊及住院患者,经胃镜检查及病理组织学检查证实,其中,慢性浅表性胃炎(CSG)32例,慢性萎缩性胃炎(CAG)42例,十二指肠球部溃疡(DU)38例,胃溃疡(GU)36例,胃癌(GCa)20例,共计168例。其中男性96例,女性72例,年龄最大76岁,最小17岁。全部病例均在距幽门口5cm左右胃窦小弯侧同一部位连续取两块胃粘膜组织,分别做组织学检查、快速尿素酶试验和PCR检测。Hp-PCR检测试剂及斑点金免疫渗滤试剂盒由第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所提供。快速尿素酶试剂由珠海克隆科技有限公司提供。胃镜检查用欧林巴斯100型电子胃镜进行。
二、方法:(1)胃粘膜组织Hp的常规检查:在同一部位取两块组织,一块用10%中性福尔马林液固定,常规石蜡包埋,切片,行HE染色做出病理诊断,并采用Warthin-Starry染色,另一块组织作尿素酶试验及Hp-PCR检测。尿素酶试验、PCR检测及Warthin-Starry染色中任两项阳性者判为有Hp感染[4]。(2)末梢血中Hp-CagAIgG检测:①原理:将待检血清加于预先包被有CagA的微孔滤膜上,将羊抗人IgG结合于胶体金颗粒表面,若血清中含有IgG抗CagA抗体,便形成CagA-IgG-抗IgG,在膜上形成肉眼可见的红色斑点。②步骤:采用Hp阳性患者末梢血30μl加入稀释液1ml内待用;在斑点金免疫渗滤板膜中央加洗涤液一滴,待渗入;将待检血10μl逐滴加于膜中央,待渗入后加洗涤液3滴;将胶体金标记物15μl,逐滴加于膜中央,待渗入后,再加洗涤液3滴;③结果判定:在膜中央出现红色斑点为阳性。
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结果
DIGFA对Hp阳性胃病患者末梢血中Hp-CagAIG的检测结果,见附表。
附表 Hp阳性胃病患者末梢血Hp-CagAIgG检出结果 类别
Hp阳性例数
Hp-CagAIgG阳性例数
检出率(%)
CSG
32
21
65.63
CAG
, 百拇医药
42
33
78.57
DU
38
36
94.74
GU
36
33
91.67
GCa
20
, 百拇医药 19
95.00
总计
168
142
84.52
讨论
目前诊断Hp感染的方法主要有侵入性和非侵入性两大类。前者包括组织病理学检查、尿素酶试验、细菌培养及PCR技术;后者包括尿素酶呼吸试验及ELISA法检测抗体。侵入性检查虽然直观,但费时,患者痛苦大;尿素酶呼吸试验费用昂贵,而ELISA法也存在操作复杂等不足。本研究中,尿素酶试验采用PH的改变,间接判定结果,受外界影响大,若Hp量少,不足以引起PH的改变,就会出现假阴性;W-S银染色与切片的厚度、染色的均匀程度、细菌数量的多少有密切关系,而且仅从细菌形态上进行判断,也容易出现假阳性及假阴性;PCR技术操作要求条件高,易污染,稍有不当也可能出现假阳性。本研究采用DIGFA检测Hp-CagAIgG。该方法是近年来发展起来的免疫检测新技术,其微孔膜既能吸附蛋白质,又具有快速渗滤及毛细管作用,当血清标本通过微孔膜时血清中抗体不仅能与膜上的抗原相结合,还能浓集于膜上而加快免疫反应,且胶体金标记物为红色,结合后即显红色斑点,不需加入其它试剂显示。该方法除具有ELISA法之特异、敏感等特点外,另一显著特点是快速、简便,一般可在2～3分钟内出结果,可以单人份或多人份操作,不需特殊设备,可检测血清,也可检测末梢血,为大面积、大样本的CagA阳性Hp的筛选提供快速、廉价、易普及的检测方法,对了解我国人群中CagA阳性Hp感染状况,指导CagA阳性Hp感染的诊断及治疗提供方便条件。
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本研究采用斑点金免疫渗滤试验检测Hp阳性胃病患者末梢血Hp-CagAIgG,结果显示,CSG中Hp-CagAIgG为65.63%,CAG为78.57%,DU为94.74%,GU为91.67%,GCa为95%,胃及十二指肠球部溃疡和胃癌组织中CagA阳性Hp感染率显著高于胃炎组,这与文献[2,3,5]报道结果相一致。这一结果提示,DIGFA快速检测Hp-CagAIgG快速检测方法的建立,将为CagA阳性Hp感染的流行病学研究及Hp-CagA与胃、十二指肠疾病关系的研究提供重要条件。
参考文献
1.Blaser MJ,Perez GIP,kleanthous H,et al.Infection with Helicobacter pylori strains possessing CagA is associated with an increased risk of developing adenocarcinoma of the stomach.Cancer research,1995,55∶2111.
, 百拇医药
2.Covacci A,Vensini S,Bugnoli M,et al.Molecular Characterization of the 128-KDa immunobominant antigen of Helicobacter pylori associated with cytotoxicity and duodenal ulcer.Proc Nat Acaid sci USA,1993,90∶5791.
3.CHING ck,Wong BCY,K wok E,et al.Prevalence of cagA-bearing Helicobacter pylori strains detected by the anti-cag A assay in patients with peptic ulcer disease and in controls.The American Journal of Gastroenterrology,1996,91∶949.
, 百拇医药
4.周殿元,张万岱.关于幽门螺杆菌若干问题的意见(草案).中华消化杂志,1997,17(5):287.
5.Lage-Ap,Godfroid-e,Fauconnier-A,et al.Diagnosis of Helicobacter pyrlori infection by PCR;comparison with other invasive techniques and detection of cagA gene in gastric biopsy speamens.J Clin-Microbiol,1995 Oct,33(10)∶2752.
收稿:1998-04-08 修回:1998-07-21, http://www.100md.com