CD3AK细胞冻融提取液的抗肿瘤活性研究
作者：李明远 李虹 肖丽英 蒋中华 李华玲 牟家琬
单位：华西医科大学微生物学教研室(成都610041)
关键词：
华西医学WEST CHINA MEDICAL JOURNAL1999年 第14卷 第2期 Vol [中图分类号]R392.12 [文献标识码]E
[文章编号]1002-0179(1999)02-0248-01
肿瘤的生物治疗(Biotherapy)在当今被认为是除手术、放疗、化疗以外的第四种有效的肿瘤治疗手段。继八十年代后期的LAK细胞和TIL细胞后，抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)激活的杀伤细胞(CD3 McAb-Activated Killer Cells，CD3AK细胞)是近年来被认为比LAK细胞杀瘤活性更强、杀瘤谱更广的新型免疫活性细胞。但CD3AK细胞存在细胞数量有限、不易保存和运输困难等不足，且杀瘤作用依赖于rIL-2的联合作用，故临床毒副作用较大，这些都影响了CD3AK细胞的推广和应用。根据国内外学者对CD3AK细胞的杀瘤机制研究，发现主要与膜淋巴素、穿孔素、TNF、IL-1、IL-6等因子有关。我们认为如果能提取CD3AK细胞的杀瘤活性因子，不仅可以克服细胞制剂的上述缺点，而且使用方便，可以多途径反复注射；使用时也不依赖rIL-2，可减轻毒副作用。本文对CD3AK细胞冻融提取液的抗瘤活性进行了初步研究。
, http://www.100md.com
实验取正常人外周血，按常规分离外周血单个核细胞(PBMC)，将PBMC悬液加入细胞培养瓶，加入含rIL-2(50U/ml)和CD3 McAb(25ng/ml)的RPMI1640，诱导培养72小时后，离心去上清，重新加入只含50U/ml rIL-2的完全RPMI1640中作扩增培养，4天后收集的细胞即为CD3AK细胞。将收集的CD3AK细胞经超声粉碎并-20℃反复冻融三次，低温离心，收集上清液即为CD3AK细胞冻融提取液。体内抗肿瘤实验用体重为20～25克的昆明小鼠，将H22瘤细胞接种于其右前肢腋窝皮下形成荷瘤小鼠，并将实验小鼠分组。A组在肿瘤局部注射(i.t.)CD3AK细胞冻融提取液0.2ml/只，B组腹腔注射(i.p.)等体积的CD3AK细胞冻融提取液，C组i.p.注射等体积生理盐水(对照组)。每天注射一次，连续8天。最后一次注射后4天处死小鼠，剥取瘤块，称瘤重，并按公式计算抑瘤率。体外杀瘤活性测定用MTT法，实验组在96孔细胞培养板内分别加入CD3AK细胞、相当细胞数量的CD3AK细胞冻融提取液各100μl作为效应细胞(物)，再加入相同体积的K562或Raji靶细胞。37℃、5%CO2条件下孵育24小时后，每孔加入20μlMTT液，继续孵育4小时，再加入裂解液100μl/孔，37℃孵箱内过夜后用酶标仪在540nm波长下测定光吸收值(A540)，并按公式计算杀瘤活性。
, 百拇医药
实验结果显示，低剂量的CD3McAb(25ng/ml)和rIL-2(50U/ml)能明显诱导PBMC的活化和增殖；激活后的CD3AK细胞冻融提取液可抑制H22细胞在小鼠体内生长，其抑瘤率达68.20%(肿瘤局部注射)和60.38%(腹腔注射)；在体外实验中发现CD3AK细胞冻融提取液对K562和Raji靶细胞均具有较强的杀瘤活性，其杀瘤活性分别为83.32%和66.83%。与CD3AK细胞的杀瘤活性相比无显著性差异(P>0.05)。
根据报道，CD3McAb对T淋巴细胞的作用具有双重性，大剂量(mg级)CD3McAb产生免疫抑制作用，临床上常用于抑制移植排斥反应。小剂量(μg或ng级)CD3McAb一次性使用后，通过与T细胞表面的TCR-CD3复合物结合，启动跨膜信号传导系统，使T细胞DNA复制、细胞增殖，IL-2R表达。以小剂量IL-2维持，能使T细胞活化增殖，分泌活性因子，CD8+细胞比例升高，增强NK细胞和单核细胞杀伤活性，这就是CD3AK细胞比LAK杀瘤活性更强的原因所在。本研究中发现，CD3McAb的合适用量为20～50ng/ml；CD3AK细胞冻融提取液在体内和体外均具有良好的抗肿瘤作用，而且具有广谱的抗肿瘤作用，即对H22、K562、Raji等均具抑瘤效果，与CD3AK细胞无明显差别。CD3AK细胞冻融提取液与LAK和TIL细胞相比，具有取材容易、使用方便、易于保存和运输等优点，不失为肿瘤生物治疗的一条新思路。而有关其杀瘤机制则有待于进一步深入研究阐明。
(收稿日期：1999-03-24), http://www.100md.com
单位：华西医科大学微生物学教研室(成都610041)
关键词：
华西医学WEST CHINA MEDICAL JOURNAL1999年 第14卷 第2期 Vol [中图分类号]R392.12 [文献标识码]E
[文章编号]1002-0179(1999)02-0248-01
肿瘤的生物治疗(Biotherapy)在当今被认为是除手术、放疗、化疗以外的第四种有效的肿瘤治疗手段。继八十年代后期的LAK细胞和TIL细胞后，抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)激活的杀伤细胞(CD3 McAb-Activated Killer Cells，CD3AK细胞)是近年来被认为比LAK细胞杀瘤活性更强、杀瘤谱更广的新型免疫活性细胞。但CD3AK细胞存在细胞数量有限、不易保存和运输困难等不足，且杀瘤作用依赖于rIL-2的联合作用，故临床毒副作用较大，这些都影响了CD3AK细胞的推广和应用。根据国内外学者对CD3AK细胞的杀瘤机制研究，发现主要与膜淋巴素、穿孔素、TNF、IL-1、IL-6等因子有关。我们认为如果能提取CD3AK细胞的杀瘤活性因子，不仅可以克服细胞制剂的上述缺点，而且使用方便，可以多途径反复注射；使用时也不依赖rIL-2，可减轻毒副作用。本文对CD3AK细胞冻融提取液的抗瘤活性进行了初步研究。
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实验取正常人外周血，按常规分离外周血单个核细胞(PBMC)，将PBMC悬液加入细胞培养瓶，加入含rIL-2(50U/ml)和CD3 McAb(25ng/ml)的RPMI1640，诱导培养72小时后，离心去上清，重新加入只含50U/ml rIL-2的完全RPMI1640中作扩增培养，4天后收集的细胞即为CD3AK细胞。将收集的CD3AK细胞经超声粉碎并-20℃反复冻融三次，低温离心，收集上清液即为CD3AK细胞冻融提取液。体内抗肿瘤实验用体重为20～25克的昆明小鼠，将H22瘤细胞接种于其右前肢腋窝皮下形成荷瘤小鼠，并将实验小鼠分组。A组在肿瘤局部注射(i.t.)CD3AK细胞冻融提取液0.2ml/只，B组腹腔注射(i.p.)等体积的CD3AK细胞冻融提取液，C组i.p.注射等体积生理盐水(对照组)。每天注射一次，连续8天。最后一次注射后4天处死小鼠，剥取瘤块，称瘤重，并按公式计算抑瘤率。体外杀瘤活性测定用MTT法，实验组在96孔细胞培养板内分别加入CD3AK细胞、相当细胞数量的CD3AK细胞冻融提取液各100μl作为效应细胞(物)，再加入相同体积的K562或Raji靶细胞。37℃、5%CO2条件下孵育24小时后，每孔加入20μlMTT液，继续孵育4小时，再加入裂解液100μl/孔，37℃孵箱内过夜后用酶标仪在540nm波长下测定光吸收值(A540)，并按公式计算杀瘤活性。
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实验结果显示，低剂量的CD3McAb(25ng/ml)和rIL-2(50U/ml)能明显诱导PBMC的活化和增殖；激活后的CD3AK细胞冻融提取液可抑制H22细胞在小鼠体内生长，其抑瘤率达68.20%(肿瘤局部注射)和60.38%(腹腔注射)；在体外实验中发现CD3AK细胞冻融提取液对K562和Raji靶细胞均具有较强的杀瘤活性，其杀瘤活性分别为83.32%和66.83%。与CD3AK细胞的杀瘤活性相比无显著性差异(P>0.05)。
根据报道，CD3McAb对T淋巴细胞的作用具有双重性，大剂量(mg级)CD3McAb产生免疫抑制作用，临床上常用于抑制移植排斥反应。小剂量(μg或ng级)CD3McAb一次性使用后，通过与T细胞表面的TCR-CD3复合物结合，启动跨膜信号传导系统，使T细胞DNA复制、细胞增殖，IL-2R表达。以小剂量IL-2维持，能使T细胞活化增殖，分泌活性因子，CD8+细胞比例升高，增强NK细胞和单核细胞杀伤活性，这就是CD3AK细胞比LAK杀瘤活性更强的原因所在。本研究中发现，CD3McAb的合适用量为20～50ng/ml；CD3AK细胞冻融提取液在体内和体外均具有良好的抗肿瘤作用，而且具有广谱的抗肿瘤作用，即对H22、K562、Raji等均具抑瘤效果，与CD3AK细胞无明显差别。CD3AK细胞冻融提取液与LAK和TIL细胞相比，具有取材容易、使用方便、易于保存和运输等优点，不失为肿瘤生物治疗的一条新思路。而有关其杀瘤机制则有待于进一步深入研究阐明。
(收稿日期：1999-03-24), http://www.100md.com