妊娠滋养细胞疾病表皮生长因子受体表达的研究
作者：王新宇 石一复
单位：浙江医科大学附属妇产科医院(杭州，310006)
关键词：滋养层肿瘤；葡萄胎；表皮生长因子受体；免疫组织化学
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【摘要】目的：研究表皮生长因子受体(EGFR)在妊娠滋养细胞疾病中的组织定位和表达，探讨EGFR与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法：采用单克隆抗体SP免疫组化技术测定31例葡萄胎及42例妊娠滋养细胞肿瘤中EGFR的表达情况。结果：EGFR阳性颗粒定位于合体滋养细胞的胞膜及胞浆中；侵蚀性葡萄胎EGFR表达明显弱于葡萄胎(P<0.05)，绒癌的EGFR表达明显弱于葡萄胎(P<0.01)，但侵蚀性葡萄胎与绒癌的EGFR表达无明显差异(P>0.05)；宋氏分期Ⅰ、Ⅱ期组EGFR表达明显强于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)，WHO预后评分≤4分组与>4分组的EGFR表达无显著差异(P>0.05)，血β-hCG初值≥105U/L组与<105U/L组间无显著差异。结论：EGFR表达降低导致滋养细胞恶变因素之一，EGFR表达减弱则滋养细胞转移能力增强。
, 百拇医药
中图号：R737.33 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)02-0218-02
Study on the expression of epidermal growth
factor receptor in gestational trophoblast disease
WANG Xin-yu,SHI Yi-fu
Obstetric and Gynecology Hospital of Zhejiang Medical University Hangzhou 310006,China
【Abstract】 Objective:To investigate the histological localization and expression of epidermal growth factor receptor(EGFR)in gestational trophoblast disease(GTD)and to explore the relationship between the EGFR expression and GTD.Methods:31 hydatidiform mole and 42 gestational trophoblast tumor(GTT)were detected with an immuno-histochemical technique involing EGFR monoclonal antibody.Results:immunostain with anti-epidermal growth factor receptor antibody was exclusively localized to the syncytiotrophoblasts;EGFR immunostain of invasive hydatid mole and choriocarcinoma tissues were significantly lower than that of hydatidiform mole(P<0.05,P<0.01);but there was no significant difference of EGFR expression between invasive hydatid mole and choriocarcinoma(P>0.05)；Groups of GTT stage Ⅰ、Ⅱ showed significant hifher intensity than group of GTT stage Ⅲ、Ⅳ (P<0.05)；there was no significant difference of EGFR expression between groups of GTT high risk and low-middle risk(P>0.05)；there was no difference between groups of β-hCG level≥105U/L and <105 U/L. Conclusions:decreased expression of EGFR in trophoblast insulted in malignant transformation;decreased expression of EGFR increased the metastatic ability in GTT.
, 百拇医药
Key words: Trophoblastic tumor;hydatidiform mole;Epidermal growth factor receptor;Immunohistochemistry
妊娠滋养细胞疾病(Gestational trophoblast disease,GTD)有较高的发病率，目前虽在治疗上已取得较为满意的结果，但其发病机理、恶变相关因素、预后评估等仍未明了。尽管GTD中均有滋养细胞的异常增生和高表达的人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotrophin, HCG)，但各种疾病的病理学与临床特征截然不同。有报道，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)过度表达常作为乳腺癌、胃癌等肿瘤的预后因素[1]。妊娠滋养细胞富含EGFR，但EGFR与妊娠滋养细胞的恶性转化及在GTD中的作用报道甚少。本文采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶联结免疫组织化学方法(SP法)对42例妊娠滋养细胞肿瘤和31例葡萄胎组织中EGFR行半定量研究，探讨EGFR表达的临床意义。
, http://www.100md.com
1 资料与方法
1.1 资料
1989年1月～1997年10月在我院住院治疗的葡萄胎首次刮宫组织31例，年龄范围22～52岁，中位年龄26岁，同期住院并行手术治疗的妊娠滋养细胞肿瘤病例42例，其中侵蚀性葡萄胎20例，绒癌22例，年龄范围21～53岁，中位年龄29岁。所有病例均经组织学证实。选取1997年4月在我院行人工流产的健康妇女早孕绒毛组织10例作为对照，年龄20～32岁，中位年龄24岁。
1.2 方法
鼠抗人EGFR单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。操作方法按SP试剂盒说明进行。DAB染色，苏木素复染。用已知EGFR阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断标准
, 百拇医药
以细胞膜或细胞浆内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞，将染色强度计分(0：无着色；1：浅棕褐色；2：棕褐色；3：深棕褐色)和阳性细胞百分率计分(0：无阳性细胞；1：1%～25%；2：26%～49%；3：≥50%)相加为EGFR免疫组化染色计分，并以0～1分为(-)，2分为(+)，3～4分为(++)，5～6分为(+++)。
1.4 统计学处理
行等级资料秩和检验，显著性检验水准α=0.05(单侧)
2 结果
2.1 EGFR免疫组化定位
EGFR阳性颗粒只在合体滋养细胞表达，主要定位于合体滋养细胞表面，亦可在部分合体滋养细胞胞浆中见到阳性颗粒。细胞滋养细胞及间质细胞不表达EGFR。
, 百拇医药 2.2 EGFR免疫组化半定量分析
2.2.1 正常早孕绒毛与葡萄胎的EGFR表达无显著性差异(P>0.05)；侵蚀性葡萄胎EGFR表达明显弱于早孕绒毛和葡萄胎(P<0.005，P<0.005)，绒癌的EGFR表达亦明显弱于早孕绒毛和葡萄胎(P<0.01，P<0.01)；但侵蚀性葡萄胎与绒癌的EGFR表达无显著差异(P>0.05)。详见表1。
表1 早孕绒毛和滋养细胞疾病EGFR表达结果
组别
例数
EGFR表达(例，%)
-
+
++
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+++
早孕绒毛
10
0
1(10)
5(50)
4(40)
葡萄胎
31
0
7(23)
17(54)
7(23)
, http://www.100md.com
侵葡
20
4(20)
7(35)
8(40)
1(5)
绒癌
22
3(14)
12(55)
7(32)
0(0)
2.2.2 所收集妊娠滋养细胞肿瘤中，共有23例术前未行化疗。按宋氏分期Ⅰ、Ⅱ期14例，Ⅲ、Ⅳ期9例，按WHO预后评分，≤4分组16例，>4分组7例，按血βHCG初值分为≥105U/ml组17例，<105U/ml组6例。统计学结果表明，Ⅰ、Ⅱ期EGFR表达明显强于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)，但WHO评分两组间EGFR表达无明显差异(P>0.05)，血HCG初值水平两组间无明显差异(P>0.05)。具体见表2。表2 妊娠滋养细胞肿瘤临床指标与EGFR表达结果
, http://www.100md.com
组别
例数
EGFR表达(例，%)
-
+
++
+++
宋氏分期
Ⅰ、Ⅱ期
14
0
7(50)
7(50)
, http://www.100md.com
0
Ⅱ、Ⅲ期
9
1(1/9)*
4(4/9)*
4(4/9)*
0
WHO评分
≤4分
16
0
8(50)
, 百拇医药
7(44)
1(16)
>4分
7
0
3(3/7)*
4(4/7)*
0(1)
血βHCG水平(U/L)
≥105
17
0
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8(47)
8(47)
1(6)
<105
6
0
3(3/6)*
3(3/6)*
0(-)
*：例数少于10，未计百分数
3 讨论
生长因子是一类通过与细胞膜特异受体结合，发挥调节细胞生长作用的肽类分子。研究表明，表皮生长因子及其受体不仅参与正常细胞的生长调节，且与肿瘤的发生发展密切相关。
, 百拇医药
本文结果表明，与正常绒毛一样，葡萄胎、侵蚀性葡萄胎与绒癌的合体滋养细胞表达EGFR。有研究表明，在绒癌BeWo细胞株中加入EGF能刺激HCG的产生、分泌，抗EGF抗体则能抑制β-HCG和胎盘生乳素的分泌[2]，说明在GTD中可能存在EGF/EGFR的自分泌-旁分泌机制。侵蚀性葡萄胎、绒癌中EGFR的表达比早孕绒毛、葡萄胎明显减弱，Ⅲ、Ⅳ期妊娠滋养细胞肿瘤的EGFR表达弱于Ⅰ、Ⅱ期，表明滋养细胞中EGFR表达减弱与滋养细胞恶性转化有关，并且与滋养细胞的恶性转移能力有关。许多研究表明，EGFR过度表达与肿瘤形成成正相关[3]，为什么在滋养细胞的恶性转化中EGFR的表达会降低?原因尚不清楚。推测可能的机制为：(1)正常滋养细胞需要较多量的EGFR促进其适当的增殖分化，一旦恶性转化发生，细胞会失去其正常的调节机制，包括产生EGFR，体外病毒转化试验已证实这一点[4]；(2)癌基因erbB2与EGFR高度同源，通过旁分泌途径使得EGFR模拟转化细胞的特性，使得细胞不断生长，引发细胞恶性变[5]；(3)在恶性滋养细胞中，由于EGT或TGFα与EGFR结合，使得EGFR内化降解，导致EGFR的降调节至低水平[6]；(4)在恶性转化细胞，碱性成纤维细胞生长因子可以产生、结合受体，使得细胞表面的生长因子受体不需识别配体，即可激发细胞内生长反应[7]。
, 百拇医药
本文数据表明，EGFR表达与妊娠滋养细胞肿瘤的WHO评分无关，与血β-HCG水平无关，推测可能与所选取的病例偏于中、低度恶性有关(仅3例绒癌WHO评分≥8分)，需今后扩大样本作进一步研究。
综上所述，EGFR低表达与滋养细胞恶变有关，与滋养细胞的恶性转移有关，对指导临床工作有一定的意义。但对其预后的评估尚有待进一步研究。
参考文献
1 Mansour OA,Zekri AR,Harvey J,et al.Epidermal growth factor receptor status and effect on breast cancer pation〔J〕.Anticancer Res,1997,17(48):3107.
2 Futamtra K,Maruo T,Mochizuk M,Differential effects of dibutyryl cyclic AMP and epidermal growth factor on the synthesis and secretion of human chorionic gonadotrophin and its subunit by trophoblastic and non- trophoblastic cells〔J〕. Acta obstet Gynecol Japonica,1987,39:1641.
, 百拇医药
3 Well A,Welxh JB,Lazar CS,et al.Ligand- induced transformation by a nonintrrnalozng epidermal growth factor receptor〔J〕.Science,1990,247:962.
4 Reynolds RK,Talavera F,Roberts JA,et al.Characterization of epidermal growth factor receptor in normal and neoplastic human endometrium〔J〕.Cancer,1990,9:1967.
5 Rogeli S,Weinberg RA,Fanning P,et al.Basic fibroblastic growth factor fused to a signal peptide transforms xell〔J〕.Nature,1988,331:173.
, http://www.100md.com
6 Sorrentino JM,Hendrix MJ.Epidermal growth factor recptor binding studies in endometral cell culture〔J〕.Life Sci,1984,34:1769
7 Steller MA,Mok Sch,Yeh J.Effects of cytokines on epidermal growth factor receptor expression by malignant torphoblas cell in vitro〔J〕.J Reprod Med,1994,39:209.
收稿日期：1998-07-30；修回日期：1998-09-09, 百拇医药
单位：浙江医科大学附属妇产科医院(杭州，310006)
关键词：滋养层肿瘤；葡萄胎；表皮生长因子受体；免疫组织化学
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【摘要】目的：研究表皮生长因子受体(EGFR)在妊娠滋养细胞疾病中的组织定位和表达，探讨EGFR与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法：采用单克隆抗体SP免疫组化技术测定31例葡萄胎及42例妊娠滋养细胞肿瘤中EGFR的表达情况。结果：EGFR阳性颗粒定位于合体滋养细胞的胞膜及胞浆中；侵蚀性葡萄胎EGFR表达明显弱于葡萄胎(P<0.05)，绒癌的EGFR表达明显弱于葡萄胎(P<0.01)，但侵蚀性葡萄胎与绒癌的EGFR表达无明显差异(P>0.05)；宋氏分期Ⅰ、Ⅱ期组EGFR表达明显强于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)，WHO预后评分≤4分组与>4分组的EGFR表达无显著差异(P>0.05)，血β-hCG初值≥105U/L组与<105U/L组间无显著差异。结论：EGFR表达降低导致滋养细胞恶变因素之一，EGFR表达减弱则滋养细胞转移能力增强。
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中图号：R737.33 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)02-0218-02
Study on the expression of epidermal growth
factor receptor in gestational trophoblast disease
WANG Xin-yu,SHI Yi-fu
Obstetric and Gynecology Hospital of Zhejiang Medical University Hangzhou 310006,China
【Abstract】 Objective:To investigate the histological localization and expression of epidermal growth factor receptor(EGFR)in gestational trophoblast disease(GTD)and to explore the relationship between the EGFR expression and GTD.Methods:31 hydatidiform mole and 42 gestational trophoblast tumor(GTT)were detected with an immuno-histochemical technique involing EGFR monoclonal antibody.Results:immunostain with anti-epidermal growth factor receptor antibody was exclusively localized to the syncytiotrophoblasts;EGFR immunostain of invasive hydatid mole and choriocarcinoma tissues were significantly lower than that of hydatidiform mole(P<0.05,P<0.01);but there was no significant difference of EGFR expression between invasive hydatid mole and choriocarcinoma(P>0.05)；Groups of GTT stage Ⅰ、Ⅱ showed significant hifher intensity than group of GTT stage Ⅲ、Ⅳ (P<0.05)；there was no significant difference of EGFR expression between groups of GTT high risk and low-middle risk(P>0.05)；there was no difference between groups of β-hCG level≥105U/L and <105 U/L. Conclusions:decreased expression of EGFR in trophoblast insulted in malignant transformation;decreased expression of EGFR increased the metastatic ability in GTT.
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Key words: Trophoblastic tumor;hydatidiform mole;Epidermal growth factor receptor;Immunohistochemistry
妊娠滋养细胞疾病(Gestational trophoblast disease,GTD)有较高的发病率，目前虽在治疗上已取得较为满意的结果，但其发病机理、恶变相关因素、预后评估等仍未明了。尽管GTD中均有滋养细胞的异常增生和高表达的人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotrophin, HCG)，但各种疾病的病理学与临床特征截然不同。有报道，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)过度表达常作为乳腺癌、胃癌等肿瘤的预后因素[1]。妊娠滋养细胞富含EGFR，但EGFR与妊娠滋养细胞的恶性转化及在GTD中的作用报道甚少。本文采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶联结免疫组织化学方法(SP法)对42例妊娠滋养细胞肿瘤和31例葡萄胎组织中EGFR行半定量研究，探讨EGFR表达的临床意义。
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1 资料与方法
1.1 资料
1989年1月～1997年10月在我院住院治疗的葡萄胎首次刮宫组织31例，年龄范围22～52岁，中位年龄26岁，同期住院并行手术治疗的妊娠滋养细胞肿瘤病例42例，其中侵蚀性葡萄胎20例，绒癌22例，年龄范围21～53岁，中位年龄29岁。所有病例均经组织学证实。选取1997年4月在我院行人工流产的健康妇女早孕绒毛组织10例作为对照，年龄20～32岁，中位年龄24岁。
1.2 方法
鼠抗人EGFR单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。操作方法按SP试剂盒说明进行。DAB染色，苏木素复染。用已知EGFR阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断标准
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以细胞膜或细胞浆内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞，将染色强度计分(0：无着色；1：浅棕褐色；2：棕褐色；3：深棕褐色)和阳性细胞百分率计分(0：无阳性细胞；1：1%～25%；2：26%～49%；3：≥50%)相加为EGFR免疫组化染色计分，并以0～1分为(-)，2分为(+)，3～4分为(++)，5～6分为(+++)。
1.4 统计学处理
行等级资料秩和检验，显著性检验水准α=0.05(单侧)
2 结果
2.1 EGFR免疫组化定位
EGFR阳性颗粒只在合体滋养细胞表达，主要定位于合体滋养细胞表面，亦可在部分合体滋养细胞胞浆中见到阳性颗粒。细胞滋养细胞及间质细胞不表达EGFR。
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2.2.1 正常早孕绒毛与葡萄胎的EGFR表达无显著性差异(P>0.05)；侵蚀性葡萄胎EGFR表达明显弱于早孕绒毛和葡萄胎(P<0.005，P<0.005)，绒癌的EGFR表达亦明显弱于早孕绒毛和葡萄胎(P<0.01，P<0.01)；但侵蚀性葡萄胎与绒癌的EGFR表达无显著差异(P>0.05)。详见表1。
表1 早孕绒毛和滋养细胞疾病EGFR表达结果
组别
例数
EGFR表达(例，%)
-
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早孕绒毛
10
0
1(10)
5(50)
4(40)
葡萄胎
31
0
7(23)
17(54)
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侵葡
20
4(20)
7(35)
8(40)
1(5)
绒癌
22
3(14)
12(55)
7(32)
0(0)
2.2.2 所收集妊娠滋养细胞肿瘤中，共有23例术前未行化疗。按宋氏分期Ⅰ、Ⅱ期14例，Ⅲ、Ⅳ期9例，按WHO预后评分，≤4分组16例，>4分组7例，按血βHCG初值分为≥105U/ml组17例，<105U/ml组6例。统计学结果表明，Ⅰ、Ⅱ期EGFR表达明显强于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)，但WHO评分两组间EGFR表达无明显差异(P>0.05)，血HCG初值水平两组间无明显差异(P>0.05)。具体见表2。表2 妊娠滋养细胞肿瘤临床指标与EGFR表达结果
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例数
EGFR表达(例，%)
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宋氏分期
Ⅰ、Ⅱ期
14
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Ⅱ、Ⅲ期
9
1(1/9)*
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WHO评分
≤4分
16
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>4分
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血βHCG水平(U/L)
≥105
17
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1(6)
<105
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3(3/6)*
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0(-)
*：例数少于10，未计百分数
3 讨论
生长因子是一类通过与细胞膜特异受体结合，发挥调节细胞生长作用的肽类分子。研究表明，表皮生长因子及其受体不仅参与正常细胞的生长调节，且与肿瘤的发生发展密切相关。
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本文结果表明，与正常绒毛一样，葡萄胎、侵蚀性葡萄胎与绒癌的合体滋养细胞表达EGFR。有研究表明，在绒癌BeWo细胞株中加入EGF能刺激HCG的产生、分泌，抗EGF抗体则能抑制β-HCG和胎盘生乳素的分泌[2]，说明在GTD中可能存在EGF/EGFR的自分泌-旁分泌机制。侵蚀性葡萄胎、绒癌中EGFR的表达比早孕绒毛、葡萄胎明显减弱，Ⅲ、Ⅳ期妊娠滋养细胞肿瘤的EGFR表达弱于Ⅰ、Ⅱ期，表明滋养细胞中EGFR表达减弱与滋养细胞恶性转化有关，并且与滋养细胞的恶性转移能力有关。许多研究表明，EGFR过度表达与肿瘤形成成正相关[3]，为什么在滋养细胞的恶性转化中EGFR的表达会降低?原因尚不清楚。推测可能的机制为：(1)正常滋养细胞需要较多量的EGFR促进其适当的增殖分化，一旦恶性转化发生，细胞会失去其正常的调节机制，包括产生EGFR，体外病毒转化试验已证实这一点[4]；(2)癌基因erbB2与EGFR高度同源，通过旁分泌途径使得EGFR模拟转化细胞的特性，使得细胞不断生长，引发细胞恶性变[5]；(3)在恶性滋养细胞中，由于EGT或TGFα与EGFR结合，使得EGFR内化降解，导致EGFR的降调节至低水平[6]；(4)在恶性转化细胞，碱性成纤维细胞生长因子可以产生、结合受体，使得细胞表面的生长因子受体不需识别配体，即可激发细胞内生长反应[7]。
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本文数据表明，EGFR表达与妊娠滋养细胞肿瘤的WHO评分无关，与血β-HCG水平无关，推测可能与所选取的病例偏于中、低度恶性有关(仅3例绒癌WHO评分≥8分)，需今后扩大样本作进一步研究。
综上所述，EGFR低表达与滋养细胞恶变有关，与滋养细胞的恶性转移有关，对指导临床工作有一定的意义。但对其预后的评估尚有待进一步研究。
参考文献
1 Mansour OA,Zekri AR,Harvey J,et al.Epidermal growth factor receptor status and effect on breast cancer pation〔J〕.Anticancer Res,1997,17(48):3107.
2 Futamtra K,Maruo T,Mochizuk M,Differential effects of dibutyryl cyclic AMP and epidermal growth factor on the synthesis and secretion of human chorionic gonadotrophin and its subunit by trophoblastic and non- trophoblastic cells〔J〕. Acta obstet Gynecol Japonica,1987,39:1641.
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3 Well A,Welxh JB,Lazar CS,et al.Ligand- induced transformation by a nonintrrnalozng epidermal growth factor receptor〔J〕.Science,1990,247:962.
4 Reynolds RK,Talavera F,Roberts JA,et al.Characterization of epidermal growth factor receptor in normal and neoplastic human endometrium〔J〕.Cancer,1990,9:1967.
5 Rogeli S,Weinberg RA,Fanning P,et al.Basic fibroblastic growth factor fused to a signal peptide transforms xell〔J〕.Nature,1988,331:173.
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6 Sorrentino JM,Hendrix MJ.Epidermal growth factor recptor binding studies in endometral cell culture〔J〕.Life Sci,1984,34:1769
7 Steller MA,Mok Sch,Yeh J.Effects of cytokines on epidermal growth factor receptor expression by malignant torphoblas cell in vitro〔J〕.J Reprod Med,1994,39:209.
收稿日期：1998-07-30；修回日期：1998-09-09, 百拇医药