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编号:10231707
鼻咽癌患者血清和癌组织中乳酸脱氢酶及其同工酶的研究
http://www.100md.com 《广西医科大学学报》 1999年第2期
     作者:崔英 邝国乾 岳惠芬 刘启福

    单位:广西医科大学附属肿瘤医院 南宁 530021

    关键词:鼻咽癌;乳酸脱氢酶;同工酶

    广西医科大学990213

    摘要 目的:研究鼻咽癌(NPC)患者血清和癌组织中乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶的水平。方法:采用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测鼻咽癌患者和对照组血清和癌组织中LDH及其同工酶浓度。结果:鼻咽癌组与非癌各对照组的血清LDH总酶活力比较无显著差异(P>0.05),但癌组织匀浆LDH总酶活力明显高于非癌各组鼻咽部炎性组(P<0.05)。鼻咽癌组血清LDH同工酶谱显示LDH3明显升高,与非癌各组比较有显著差异(P<0.05),且与病变严重程度成正相关。鼻咽癌组癌组织与良性病变组鼻咽部炎性组织的LDH同工酶谱分布不同,炎性组织以LDH2~4为主,而癌组织则为LDH3~5占优势。鼻咽癌放疗后复发组血清和组织LDH总酶活力及其同工酶谱均与鼻咽癌初诊组相似,而未复发组则接近于良性病变组,与复发组显著不同。结论:同时检测血清和鼻咽组织LDH总酶活力及其同工酶谱对NPC的辅助诊断、预后监测及治疗后随访具有一定参考价值。
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    中国图书资料分类法分类号 R739.6

    A STUDY ON LDH LEVEL AND ITS ISOENZYMES IN SERA AND NEOPLASTIC TISSUES OF PATIENTS WITH NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

    Cui Ying,Kuang Guoqian,Yue Huifen,et al

    (Affiliated Tumor Hospital,Guangxi Medical University,Nanning 530021)

    Abstract Objective:To study LDH level and its isoenzymes in sera and neoplastic tissues of patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) .Methods:Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) technique was used to assay LDH total level and its isoenzymes of sera and nasopharyngeal tissues.Results:There was no difference among patients of NPC and other groups in total activity of serum LDH.The total LDH activity of neoplastic tissues was significantly higher than that of inflammatory tissues (P<0.05).The patterns of serum LDH isoenzymes in NPC group were charecterized by a relative increase of LDH3.There was significant difference between NPC group and healthy control group (P<0.05).In patients with benign lesion and unrecurrent NPC,the isoenzymes patterns of sera were similar to those of the healthy control group.The isoenzyme patterns of neoplastic tissues were increase in LDH3,LDH4 and LDH5.The LDH total activity and its isoenzymes patterns of cancer tissue in untreated and recurreut NPC groups were different from those in unrecurrent NPC and benign lesions of heads and necks.Conclusion:The assay of LDH total level and patterns of its isoenzymes of serum and nasopharyngeal tissue will be useful for disgnosis of NPC,investigation of the effect of treatmert and progrosis in patients of NPC.
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    Key words nasopharyngeal carcinoma;LDH;isoenzymes

    乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶谱的测定已广泛用于肿瘤的发病机理、早期诊断、鉴别良恶性病变、判断组织是否癌变以及疗效评价、预后观察等的研究[1]。本研究首次将浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称浓度梯度PAGE)技术,应用于鼻咽癌(NPC)患者血清和癌组织LDH同工酶的分析,现将结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 检测对象:初诊NPC组40例,(简称初诊组)男25例,女15例。年龄16~68岁,平均45岁。其中Ⅰ期2例,Ⅱ期13例,Ⅲ期14例,Ⅳ期11例。低分化鳞癌34例,未分化癌6例。NPC放疗后复发组(简称复发组)8例,男6例,女2例。年龄37~50岁,平均44岁。NPC放疗后一年以上无复发组(简称无复发组)20例,男12例,女8例。年龄30~66岁,平均46岁。头颈部良性病变组(简称良性组)30例,男18例,女12例。年龄18~56岁,平均37岁。上述4组病例均取血清和鼻咽组织测定LDH活力及其同工酶谱。40例正常对照组血清取自南宁市中心血站健康献血员,男22例,女18例。年龄30~50岁,平均44岁。本组仅测血清LDH活力及其同工酶谱。
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    1.2 实验方法:LDH总酶活力测定按岛津自动生化分析仪CL-700型的操作规程说明检测血清及组织匀浆的LDH活力。LDH同工酶谱测定参照周德义和许进方法加以改进[2,3]。浓度梯度为4%~10%。将已完成电泳的凝胶条浸入酶定位染色液[4],37℃避光,水浴保温30~60 min,含酶的部位呈紫蓝色区带,置7%HAC中保存。将显色后的凝胶条用岛津CS-930型双波长色谱扫描仪进行盘状电泳凝胶条扫描[5],LDH同工酶百分比由记录仪自动打印数据。

    2 结果

    2.1 血清LDH总酶活力及其同工酶谱测定结果见表1、2、3。

    表1 各组血清与鼻咽部组织匀浆LDH总酶活力(±s) 组别
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    n

    血清LDH

    (λB/IU.L-1)

    P1

    组织LDH

    (λB/IU.L-1)

    P2

    初诊组

    40

    109.00±44.00
, 百拇医药
    197.68±94.77

    复发组

    8

    96.75±24.55

    >0.05

    177.38±48.72

    >0.05

    未复发组

    20

    93.00±31.78

    >0.05

    106.75±40.75
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    <0.05

    良性组

    30

    106.17±36.79

    >0.05

    78.90±26.70

    <0.05

    正常组

    40

    94.18±25.25

    >0.05

    注:P1:初诊组与其它各组血清LDH总酶活力比较
, 百拇医药
    P2:初诊组与其它各组鼻咽部组织匀浆LDH总酶活力比较表2 各组血清LDH同工酶相对活性(±s,%) 组别

    n

    LDH1

    LDH2

    LDH3*

    LDH4

    LDH5

    初诊组

    40
, 百拇医药
    28.20±3.77

    35.23±5.47

    32.10±5.72

    3.40±2.90

    1.18±1.03

    复发组

    8

    30.16±5.84

    33.12±7.30

    30.83±7.30

    4.23±1.73

    1.63±1.60
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    无复发组

    20

    37.20±5.14

    47.65±3.34

    12.60±2.29

    2.20±1.28

    0.80±0.83

    良性组

    30

    35.23±3.17

    43.86±5.96

    16.57±7.14
, 百拇医药
    3.03±1.47

    1.33±0.94

    正常组

    40

    36.60±2.34

    45.63±3.02

    14.38±3.34

    2.60±1.37

    0.85±0.80

    *初诊组与复发组LDH3比较无显著差异(P>0.05),但初诊组LDH3显著高于未复发组、良性组和健康组(P<0.05)表3 初诊各期鼻咽癌患者血清LDH3相对活力(±s) 组别
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    n

    LDH3B/IU.L-1)

    Ⅰ期

    2

    24.73±1.86

    Ⅱ期

    13

    28.46±4.32

    Ⅲ期

    14

    31.85±3.14
, 百拇医药
    Ⅳ期

    11

    37.59±5.26

    注:各期鼻咽癌间两两比较均有显著差异(P<0.05)

    初诊组与正常对照组及其它各组血清LDH总酶活力比较无显著差异(P>0.05)。初诊组和复发组血清同工酶谱主要表现为LDH3增高,并与病变严重程度呈正相关;而正常对照组、良性组和未复发组LDH3显著低于患癌组,两组差异有显著性(P<0.05)。

    2.2 鼻咽部组织匀浆LDH总酶活力测定结果见表1。初诊组各期NPC癌组织匀浆LDH总酶活力明显高于良性组及未复发组的炎性组织LDH总酶活力(P<0.05)。复发组癌组织LDH总酶活力接近初诊组(P>0.05),高于未复发组(P<0.05)。检测结果还显示:未复发组鼻咽组织匀浆LDH总酶活力高于良性组(P<0.05)。
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    2.3 鼻咽部组织匀浆LDH同工酶谱测定结果见表4。

    表4 各组鼻咽部组织匀浆LDH同工酶相对活性(±s,%) 组别

    n

    LDH1

    LDH2

    LDH3

    LDH4

    LDH5

    初诊组
, 百拇医药
    40

    3.70±2.01

    11.35±3.55

    32.18±5.23

    38.46±7.27

    14.52±6.55

    复发组

    8

    3.36±1.06

    11.50±3.38

    34.88±5.69

    37.10±4.78
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    13.00±4.72

    无复发组

    20

    8.15±3.27

    24.35±2.85

    42.05±7.68

    20.20±3.07

    5.56±2.72

    良性组

    30

    8.63±2.76

    24.80±3.19
, 百拇医药
    39.87±6.39

    21.83±3.09

    5.20±2.52

    将上述各组数据经多个样本秩和检验,结果初诊组癌组织LDH同工酶呈恶性酶谱样改变,其分布以LDH3~5为主,而头颈部良性病变组则以LDH2~4占优势,两者有显著差异(P<0.05)。NPC放疗后复发组也以LDH3~5为主,趋近于初诊NPC组,而NPC放疗后未复发组则以LDH2~4为主,与头颈部良性病变组接近,与复发组比较有显著差异(P<0.05)。

    3 讨论

    3.1 LDH总酶活力对鼻咽癌的诊断价值:恶性肿瘤组织的糖酵解高于正常组织,而参与糖酵解的重要酶类——乳酸脱氢酶也增高。由于肿瘤细胞坏死,代谢转换率加速,细胞膜通透性改变等原因,致使癌组织的酶释放至血液,破坏了血循环中酶的正常动态平衡,因此,血清中LDH活性增高[6]。但由于血清LDH来源于全身各种组织,影响其含量的因素较多,不单取决于肿瘤的负荷,而且即使在正常的情况下,血清LDH的含量也不是恒定。我们的研究结果表明NPC患者不管是初诊组还是复发组,其血清LDH总酶活力与良性组、正常对照组比较无显著差异,但NPC初诊组和复发组的鼻咽部癌组织匀浆LDH总酶活力明显高于良性组和未复发组的鼻咽部炎性组织,两者比较有显著差异。本研究资料还显示:NPC放疗后未复发组鼻咽组织匀浆LDH总酶活力高于头颈部良性病变组,其原因可能是由于放射治疗对鼻咽组织损伤的结果,有关这方面的问题尚需进一步研究。
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    3.2 LDH同工酶对NPC的诊断价值:LDH是由二种亚基(M和H)杂交所形成的四聚体,它们可分别组成5种同工酶:LDH1=H4,LDH2=H3M1,LDH3=H2M2,LDH4=H1M3,LDH5=M4。LDH1适合于有氧代谢条件,它与L-乳酸亲和力大,主要催化乳酸氧化为丙酮酸;而LDH5适合于无氧代谢条件,它与丙酮酸亲和力大,主要催化丙酮酸还原为乳酸。由于恶性肿瘤与非恶性肿瘤病变的代谢差异,而呈现不同的LDH同工酶谱。本研究结果显示NPC患者血清LDH同工酶谱改变以LDH3增高为特征,而且与病变的严重程度成正比,与正常对照组和良性病变组比较有显著差异。而且NPC放疗后复发组患者血清亦表现为LDH3升高,与初诊组类似,与放疗后未复发组比较有显著差异。NPC无论初诊或复发的癌组织LDH同工酶谱分布均以LDH3、LDH4、LDH5为主,鼻咽非癌组织(良性病变组和未复发组)则以LDH2、LDH3、LDH4占优势,两者有显著差异。鼻咽癌组织LDH同工酶谱与血清LDH同工酶谱变化不一致,这一结果说明NPC患者血清LDH3的增高不一定是鼻咽癌组织酶谱的直接反映,可能是由于鼻咽癌细胞生长浸润及转移时,使癌周围组织受到损伤而引起的。
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    3.3 浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用:我们参照周德义和许进等方法加以改进[2,3],利用浓度梯度PAGE技术检测血清及鼻咽组织匀浆中LDH同工酶,达到较好的分离效果。较醋酸纤维薄膜电泳等方法具有分辨率高,区带清晰、简单经济,易于进行扫描分析等特点。

    参考文献

    1 潘光熹.乳酸脱氢酶同工酶及其临床意义.国外医学临床生物化学与检验学分册,1980,1(4):6~13

    2 周德义.介绍一种制备管状梯度凝胶的装置.生物化学与生物物理进展,1985,6(1):71

    3 许 进.血清LDH及其同工酶对卵巢恶性肿瘤的诊断价值的探讨.广西医学院学报,1991,8(4):272~277

    4 Dietz AA.Separation and quan fifation of lactic dehydrogenase isoenzymes by dise electrophoresis.Anal Biochem,1967,20:246~257

    5 周本正.实用电泳及免疫电泳技术.长沙:湖南科技出版社,1985.71~75

    6 Cori CF.The corbohydra to metabolism 1 505 tumor,I.J Biol Chem,1975,65:397

    收稿日期:1998-09-04, 百拇医药