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编号:10233277
人肝癌细胞株HCV体外复制模型的建立*
http://www.100md.com 《世界华人消化杂志》 1999年第2期
     作者:宋志强 郝 飞 王宇明 马巧玉

    单位:第三军医大学西南医院全军传染病专科中心 重庆市 400038

    关键词:丙型肝炎病毒;病毒复制;肝肿瘤;细胞株

    世界华人消化杂志990234

    中国图书资料分类号 R735.7

    Subject headings hepatitis C virus; viral replication; liver neoplasms; cell line

    0 引言

    缺乏适宜丙型肝炎病毒(HCV)复制模型的窘况已极大地阻碍了对HCV系统和深入的研究. 只有建立方便易得、价格低廉、对HCV易感的细胞模型,才能更好地研究HCV. 本研究用自然存在于慢性丙型肝炎患者血清中的HCV直接感染培养中的人肝癌细胞7721,旨在建立接近体内自然感染状态并能稳定支持HCV体外长期复制的感染细胞模型.1 方法

    用慢性丙型肝炎患者的血清与人肝癌细胞系7721共同孵育8h后,以1640液彻底洗去感染血清,定期收集培养上清和细胞,以反转录-聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交分别对细胞和(或)培养上清中的HCV正、负链RNA、HCV NS3抗原在感染细胞内的表达及HCV负链RNA在感染细胞内的定位做检测.

    2 结果

    从感染血清和细胞共同孵育后的d2起,即可从细胞内和培养上清中间断地检测出HCV正、负RNA,一直到感染后d68,即使其间细胞传代4次;免疫组化显示,表达HCV NS3抗原的7721细胞多呈散在或点状分布,阳性物质多位于细胞浆,少数细胞核亦有表达;原位杂交结果显示杂交阳性细胞多呈点状分布,HCV负链RNA多位于细胞浆中.

    3 讨论

    人肝癌细胞株7721不但对HCV易感,而且可以稳定地支持HCV的长期复制,此HCV感染、复制模型可以用于HCV复制的研究、抗病毒药物的评价及保护性抗体/疫苗的初步筛选.

    *国家自然科学基金资助课题,No.39670672

    通讯作者 宋志强

    收稿日期 1998-11-26, 百拇医药