习惯性流产夫妇B淋巴母细胞株的建立及实验室研究
作者：胡玉红 王秀岩 张险峰 张春斌
单位：佳木斯大学医学院
关键词：B淋巴母细胞株；姐妹染色单体互换(SCE)；习惯性流产
黑龙江医药科学990202
提要 我们采用EB病毒转化微量全血法建立一具高SCE的习惯性流产夫妇的B淋巴母细胞株，其自发SCE为14.12次/每细胞，13.36次/每细胞，微核率为25.2%，21.2%，诱发SCE为22.76次/每细胞，22.16次/每细胞，微核率为38.3%，37.2%，与正常淋巴母细胞相比差异显著(P<0.01)，本方法为研究习惯性流产提供了实验模型。
Establishment of lymphoblast cell line in a habitual abortion couple and its experimental study
, http://www.100md.com
Hu Yuhong,et al
Abstract We established a lymphoblast cell line in a habitual abortion couple by micro-whole blood method. Both the cell lines were of high SCE rate. They had higher SCE rate and micro nuclei rate, with 14.12times per cell, and 13.28 times per cell, respectively for SCE rate and 25.2% and 21.2%, respectively for micro nuclei rate, After treated wito mitomytin, they had even higher SCE (38.3、37.2)and micro-nuclei rate(10.7%，10.2%) than normal β-lymphoblast cell line.
, 百拇医药
Key words B lymphoblast cell line; sister chromastid exchange, habitual abortion
习惯性流产是妇产科常见病之一，它是指自然流产连续发生3次或3次以上者，给妇女带来痛苦引起习惯流产原因很多。有黄体功能不足、甲状腺功能低下、染色体异常等。其中染色体异常是常见原因之一。SCE可以反映DNA分子损伤和修复程度[1]。现常用细胞EB病毒体外感染外周血淋巴细胞建立淋巴母细胞株，具永生性和不致瘤性，保持原有细胞的生物学特性，为实验室研究提供可信的材料[2]。本实验对一对核型正常，而SCE高的习惯性流产夫妇进行B淋巴母细胞株建立，并检测其对DNA阻断剂丝裂霉素C(MMC)敏感性，实验结果如下。
1 材料与方法
1.1 材料
, 百拇医药
一对习惯性流产夫妇，表型正常，结婚四年，流产五次。一对有正常生育史夫妇，均采静脉血培养，制备染色体标本。习惯性流产夫妇核型正常，但SCE高。
1.2 方法
建株方法参考Neitzel. H[3]，分别建立习惯性流产夫妇及正常对照组淋巴母细胞株。
1.3 绘生长曲线
取对数生长期细胞稀释成1×105个细胞/ml，每天取两瓶计数，取均值绘细胞生长曲线。
1.4 核型鉴定
在生长旺盛细胞中加秋水仙素达终浓度0.01μg/ml，收获细胞，低渗制片、G显带分析。
1.5 细胞表面免疫球蛋白测定
, 百拇医药
采用直接免疫荧光检测细胞表面免疫球蛋白。
1.6 自发和诱发SCE测定
按毛新[4]方法测定。诱变剂为丝裂霉素，取细胞在Brd U培养液中培养24小时，加入MMC(终浓度0.01μg/ml)，再培养24小时洗去，加Brd U，24小时后收获。
2 结果
取旺盛增殖细胞计数绘生长曲线，通过表面免疫球蛋白测定，从而说明为B淋巴母细胞起源。患者夫妇自发和诱发SCE明显高于健康人，患者夫妇微核率亦明显高于正常细胞株(P<0.01)，经MMC作用下，正常对照和患者的细胞株SCE和微核率均明显增加，患者诱发SCE净增值高于正常人。见表1。
表1 自发、诱发SCE及微核率
, 百拇医药 本处理组
MMC处理组
SCE
微核率(%)
SCE
微核率(%)
习惯性流产夫
14.12±0.78
25.2
22.76±1.32
38.3
习惯性流产妻
13.46±0.82
, 百拇医药
21.2
22.16±1.16
37.2
正常对照夫
5.26±0.31
5.1
12.63±0.86
10.7
正常对照妻
4.83±0.42
4.4
12.01±0.92
, 百拇医药
10.2
3 讨论
本实验通过简便的方法建立—淋巴母细胞株，本细胞株染色体稳定性高，从而可以作为遗传病的体细胞研究模型，为习惯性流产的遗传学及分子生物学研究提供了材料。本文患者夫妇自发高SCE值，估计为体细胞突变所为，从而说明他们的生殖细胞染色体可能出现变异，在外界因素作用下产生不平衡配子，最终导致流产。患者夫妇高诱发SCE值也说明此夫妇DNA自身修复的代偿能力低下，在MMC作用下，潜在不稳定性也就表现出来。本细胞株的建立为习惯性流产的遗传学研究奠定了基础。
参考文献
1.范耀山.姐妹染色单体交换和结构染色体畸变在诱变剂检测中的应用.国外医学遗传学分册,1982,5(3):128
2.肖勇,张险峰,白秀英,等.具染色体不稳定性B淋巴母细胞株的建立.佳木斯医学院学报,1996;2:5～6
3.Neitzel H. Aroutine method for the estabi:shment of permenent growing lymphoblastoid cell lines. Human Genetic, 1986;73;320～326
4.毛新.鼻咽癌患者外周血培养细胞染色体对某些致断剂易感性观察.遗传与疾病,1988;5(2):35～37
(1998-10-27收稿), 百拇医药
单位：佳木斯大学医学院
关键词：B淋巴母细胞株；姐妹染色单体互换(SCE)；习惯性流产
黑龙江医药科学990202
提要 我们采用EB病毒转化微量全血法建立一具高SCE的习惯性流产夫妇的B淋巴母细胞株，其自发SCE为14.12次/每细胞，13.36次/每细胞，微核率为25.2%，21.2%，诱发SCE为22.76次/每细胞，22.16次/每细胞，微核率为38.3%，37.2%，与正常淋巴母细胞相比差异显著(P<0.01)，本方法为研究习惯性流产提供了实验模型。
Establishment of lymphoblast cell line in a habitual abortion couple and its experimental study
, http://www.100md.com
Hu Yuhong,et al
Abstract We established a lymphoblast cell line in a habitual abortion couple by micro-whole blood method. Both the cell lines were of high SCE rate. They had higher SCE rate and micro nuclei rate, with 14.12times per cell, and 13.28 times per cell, respectively for SCE rate and 25.2% and 21.2%, respectively for micro nuclei rate, After treated wito mitomytin, they had even higher SCE (38.3、37.2)and micro-nuclei rate(10.7%，10.2%) than normal β-lymphoblast cell line.
, 百拇医药
Key words B lymphoblast cell line; sister chromastid exchange, habitual abortion
习惯性流产是妇产科常见病之一，它是指自然流产连续发生3次或3次以上者，给妇女带来痛苦引起习惯流产原因很多。有黄体功能不足、甲状腺功能低下、染色体异常等。其中染色体异常是常见原因之一。SCE可以反映DNA分子损伤和修复程度[1]。现常用细胞EB病毒体外感染外周血淋巴细胞建立淋巴母细胞株，具永生性和不致瘤性，保持原有细胞的生物学特性，为实验室研究提供可信的材料[2]。本实验对一对核型正常，而SCE高的习惯性流产夫妇进行B淋巴母细胞株建立，并检测其对DNA阻断剂丝裂霉素C(MMC)敏感性，实验结果如下。
1 材料与方法
1.1 材料
, 百拇医药
一对习惯性流产夫妇，表型正常，结婚四年，流产五次。一对有正常生育史夫妇，均采静脉血培养，制备染色体标本。习惯性流产夫妇核型正常，但SCE高。
1.2 方法
建株方法参考Neitzel. H[3]，分别建立习惯性流产夫妇及正常对照组淋巴母细胞株。
1.3 绘生长曲线
取对数生长期细胞稀释成1×105个细胞/ml，每天取两瓶计数，取均值绘细胞生长曲线。
1.4 核型鉴定
在生长旺盛细胞中加秋水仙素达终浓度0.01μg/ml，收获细胞，低渗制片、G显带分析。
1.5 细胞表面免疫球蛋白测定
, 百拇医药
采用直接免疫荧光检测细胞表面免疫球蛋白。
1.6 自发和诱发SCE测定
按毛新[4]方法测定。诱变剂为丝裂霉素，取细胞在Brd U培养液中培养24小时，加入MMC(终浓度0.01μg/ml)，再培养24小时洗去，加Brd U，24小时后收获。
2 结果
取旺盛增殖细胞计数绘生长曲线，通过表面免疫球蛋白测定，从而说明为B淋巴母细胞起源。患者夫妇自发和诱发SCE明显高于健康人，患者夫妇微核率亦明显高于正常细胞株(P<0.01)，经MMC作用下，正常对照和患者的细胞株SCE和微核率均明显增加，患者诱发SCE净增值高于正常人。见表1。
表1 自发、诱发SCE及微核率
, 百拇医药 本处理组
MMC处理组
SCE
微核率(%)
SCE
微核率(%)
习惯性流产夫
14.12±0.78
25.2
22.76±1.32
38.3
习惯性流产妻
13.46±0.82
, 百拇医药
21.2
22.16±1.16
37.2
正常对照夫
5.26±0.31
5.1
12.63±0.86
10.7
正常对照妻
4.83±0.42
4.4
12.01±0.92
, 百拇医药
10.2
3 讨论
本实验通过简便的方法建立—淋巴母细胞株，本细胞株染色体稳定性高，从而可以作为遗传病的体细胞研究模型，为习惯性流产的遗传学及分子生物学研究提供了材料。本文患者夫妇自发高SCE值，估计为体细胞突变所为，从而说明他们的生殖细胞染色体可能出现变异，在外界因素作用下产生不平衡配子，最终导致流产。患者夫妇高诱发SCE值也说明此夫妇DNA自身修复的代偿能力低下，在MMC作用下，潜在不稳定性也就表现出来。本细胞株的建立为习惯性流产的遗传学研究奠定了基础。
参考文献
1.范耀山.姐妹染色单体交换和结构染色体畸变在诱变剂检测中的应用.国外医学遗传学分册,1982,5(3):128
2.肖勇,张险峰,白秀英,等.具染色体不稳定性B淋巴母细胞株的建立.佳木斯医学院学报,1996;2:5～6
3.Neitzel H. Aroutine method for the estabi:shment of permenent growing lymphoblastoid cell lines. Human Genetic, 1986;73;320～326
4.毛新.鼻咽癌患者外周血培养细胞染色体对某些致断剂易感性观察.遗传与疾病,1988;5(2):35～37
(1998-10-27收稿), 百拇医药