大鼠双下肢自身血液灌流法
作者：林莘 王晶 贾秉钧
单位：福建医科大学生理学教研室(福州 350004)
关键词：双下肢灌流；自身血液；大鼠
福建医科大学学报990242
为观察骨骼肌血管的紧张性活动，本室曾使用过离体标本[1]，但离体标本不宜于观察神经系统，尤其是中枢神经系统对血管紧张性的影响。本模型即为观察延髓腹面升压区(VSMp)对骨骼肌血管紧张性支配而研制的。
1 材料与方法
1.1 材料 Wistar大鼠10只，300～350g，雄性，氨基甲酸乙酯(1g.kg-1)腹腔麻醉，背位固定于恒温手术台，肛温保持在38±0.5℃，气管插管，自动呼吸。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 双下肢骨骼肌灌流 沿腹正中线做一长5cm的切口，将内脏推向左侧腹腔，用温热生理盐水纱布包裹。充分暴露左肾动脉根部的腹主动脉，在肾动脉根部尾侧2cm处结扎腹主动脉，阻断向下腹及双下肢的正常血行。在离结扎线头端5mm处向心脏侧插一动脉导管，以描记循环动脉血压(AP)，在离结扎线尾端5mm肠系膜下动脉下方，向尾侧插一导管，以描记双下肢骨骼肌灌流压(PPm)。两插管串联接于已排除气泡的灌流系统，由于灌流管道的插入使动脉循环血量相对不足，在灌流管道应充以另一大鼠的抗凝新鲜血液，进行补充。开动蠕动泵后即完成自身血液的双下肢灌流(图1)。AP和PPm的变化经压力换能器转换，输入LMS-2A型生理记录仪同步描记AP和PPm。
图1 双下肢骨骼肌灌流法
1.2.2 灌流压与阻抗的换算
, 百拇医药
灌流压与阻抗的换算采用模拟实验，固定蠕动泵的走速，使灌流流入量(Q入)分别稳定于20,30,40,50,60ml.h-1，同时亦固定流出管口径，测定不同灌流压时的流出量(Q出ml.h-1)，再按R＝P/Q关系换算为血管阻抗R的近似值。经微机进行线性回归处理，得出灌流压与阻抗关系曲线图(图2)。实验时求出P值即可根据公式换算为R值，以R值变化反映血管紧张性的变化。
图2 不同Q入时的P-R关系曲线
1.2.3 延髓腹面加压区的暴露与刺激 按Biscoe法[2]于颅底部位开一6mm×7mm窗口，暴露延髓腹面。刺激电极为直径0.1mm尖端裸露的单极不锈钢绝缘电极，刺激参数:波宽0.5ms，频率80～100Hz，强度8～10V，持续时间40s。
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2 结 果
2.1 流入量分别固定于20,30,40,50,60ml.h-1，测得流出量与灌流压的关系(附表)。灌流压与阻抗关系回归处理曲线示(图2)，各模拟曲线拟合优度均为0.99。
附表 不同(Q入)与P值时的流出量(Q出ml.h-1) P
(mmHg)
Q入(ml.h-1)
20
, 百拇医药 30
40
50
60
20
17.09
25.05
32.33
40.75
46.98
30
16.76
24.68
, 百拇医药
31.73
40.21
46.40
40
16.42
24.32
31.13
39.67
45.82
50
16.08
23.95
30.53
, 百拇医药
39.13
45.24
60
15.75
23.58
29.93
38.59
44.66
P：灌流压； R：阻抗.
2.2 电刺激VSMp对双下肢骨骼肌血管紧张性的影响
电刺激VSMp，首先AP表现单纯升压反应，经2.07±0.25s的滞后，PPm亦表现单纯升压反应，其上升斜率为2.17kPa/s，最大上升百分数为37.08(图3)，刺激20s后AP升压反应渐趋平稳并略呈下降趋势，PPm亦呈类似反应，刺激停止后，二曲线均渐回复对照，AP与PPm的变化经统计学拟合处理，与刺激持续时间均呈对数式依赖关系(图4)。
, 百拇医药
图3 电刺激VSMp对PPm的影响
图4 电刺激VSMp时AP与PPm反应的拟合曲线
3 讨 论
虽然离体下肢标本可作为递质受体实验的模型，但不能反映中枢神经系统对骨骼肌血管的紧张性影响，更由于离体标本存在一些不易克服的不足之处[3],作者参考了Madjar方法[4],建立了整体双下肢自身血液灌流模型，能较理想地进行中枢神经系统对骨骼肌血管紧张性影响的观察。
为提高反应的灵敏度，本模型采用了较大灌流面积的双下肢标本，为排除人工灌流液对递质受体机能的不良影响采用自身血液灌流。为保持血压正常周期性波动对血管切变应力作用的NO释放背景，灌流泵的运转改用脉动式灌流。根据Wistar大鼠的实验性应用，AP与PPm反应曲线和VSMp兴奋过程呈对数式关系，二曲线拟合优度均为0.922，因此本模型的设计与操作对神经系统与骨骼肌血管紧张性反应关系的实验是可行的。但大鼠骼内动脉少数支配盆腔脏器的小分支，由于处于深层，无法结扎，所以灌流区域面包括这部分的血流，虽其血流量很少，对实验结果影响不大，但仍是本模型有待进一步改进之处。
, 百拇医药
参考文献
1 Kobinger W,Pichler L.Alpha 2- Adrenoceptor agonistic effect of 5- HT 920 isolated perfused hindquarters of rats.Eur J Pharmacol,1981;76:101
2 Biscoe JJ,Simpson SR.Field potentials evoked in the brainstem of the cat by stimulation of carotid sinus,gloss-pharyngeal,aortic and superior laryngeal nerves.J Physiol,1970;209:341
3 Alabaster V,Davey M.Precapillary vessels:Effects of the sympathetic nervous system and of catecholamines.J Cardiovas Pharmacol,1984;6(Suppl):365
4 Madjar H,Docherty JR.Starke K.An examination of pre-and postsynaptic alpha adrenoreceptors in the auto perfused rabbit hindlimb.J Cardiovasc Pharmacol,1980;2:619
(收稿：1999-01-22 修回：1999-03-29), 百拇医药
单位：福建医科大学生理学教研室(福州 350004)
关键词：双下肢灌流；自身血液；大鼠
福建医科大学学报990242
为观察骨骼肌血管的紧张性活动，本室曾使用过离体标本[1]，但离体标本不宜于观察神经系统，尤其是中枢神经系统对血管紧张性的影响。本模型即为观察延髓腹面升压区(VSMp)对骨骼肌血管紧张性支配而研制的。
1 材料与方法
1.1 材料 Wistar大鼠10只，300～350g，雄性，氨基甲酸乙酯(1g.kg-1)腹腔麻醉，背位固定于恒温手术台，肛温保持在38±0.5℃，气管插管，自动呼吸。
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1.2 方法
1.2.1 双下肢骨骼肌灌流 沿腹正中线做一长5cm的切口，将内脏推向左侧腹腔，用温热生理盐水纱布包裹。充分暴露左肾动脉根部的腹主动脉，在肾动脉根部尾侧2cm处结扎腹主动脉，阻断向下腹及双下肢的正常血行。在离结扎线头端5mm处向心脏侧插一动脉导管，以描记循环动脉血压(AP)，在离结扎线尾端5mm肠系膜下动脉下方，向尾侧插一导管，以描记双下肢骨骼肌灌流压(PPm)。两插管串联接于已排除气泡的灌流系统，由于灌流管道的插入使动脉循环血量相对不足，在灌流管道应充以另一大鼠的抗凝新鲜血液，进行补充。开动蠕动泵后即完成自身血液的双下肢灌流(图1)。AP和PPm的变化经压力换能器转换，输入LMS-2A型生理记录仪同步描记AP和PPm。
图1 双下肢骨骼肌灌流法
1.2.2 灌流压与阻抗的换算
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灌流压与阻抗的换算采用模拟实验，固定蠕动泵的走速，使灌流流入量(Q入)分别稳定于20,30,40,50,60ml.h-1，同时亦固定流出管口径，测定不同灌流压时的流出量(Q出ml.h-1)，再按R＝P/Q关系换算为血管阻抗R的近似值。经微机进行线性回归处理，得出灌流压与阻抗关系曲线图(图2)。实验时求出P值即可根据公式换算为R值，以R值变化反映血管紧张性的变化。
图2 不同Q入时的P-R关系曲线
1.2.3 延髓腹面加压区的暴露与刺激 按Biscoe法[2]于颅底部位开一6mm×7mm窗口，暴露延髓腹面。刺激电极为直径0.1mm尖端裸露的单极不锈钢绝缘电极，刺激参数:波宽0.5ms，频率80～100Hz，强度8～10V，持续时间40s。
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2 结 果
2.1 流入量分别固定于20,30,40,50,60ml.h-1，测得流出量与灌流压的关系(附表)。灌流压与阻抗关系回归处理曲线示(图2)，各模拟曲线拟合优度均为0.99。
附表 不同(Q入)与P值时的流出量(Q出ml.h-1) P
(mmHg)
Q入(ml.h-1)
20
, 百拇医药 30
40
50
60
20
17.09
25.05
32.33
40.75
46.98
30
16.76
24.68
, 百拇医药
31.73
40.21
46.40
40
16.42
24.32
31.13
39.67
45.82
50
16.08
23.95
30.53
, 百拇医药
39.13
45.24
60
15.75
23.58
29.93
38.59
44.66
P：灌流压； R：阻抗.
2.2 电刺激VSMp对双下肢骨骼肌血管紧张性的影响
电刺激VSMp，首先AP表现单纯升压反应，经2.07±0.25s的滞后，PPm亦表现单纯升压反应，其上升斜率为2.17kPa/s，最大上升百分数为37.08(图3)，刺激20s后AP升压反应渐趋平稳并略呈下降趋势，PPm亦呈类似反应，刺激停止后，二曲线均渐回复对照，AP与PPm的变化经统计学拟合处理，与刺激持续时间均呈对数式依赖关系(图4)。
, 百拇医药
图3 电刺激VSMp对PPm的影响
图4 电刺激VSMp时AP与PPm反应的拟合曲线
3 讨 论
虽然离体下肢标本可作为递质受体实验的模型，但不能反映中枢神经系统对骨骼肌血管的紧张性影响，更由于离体标本存在一些不易克服的不足之处[3],作者参考了Madjar方法[4],建立了整体双下肢自身血液灌流模型，能较理想地进行中枢神经系统对骨骼肌血管紧张性影响的观察。
为提高反应的灵敏度，本模型采用了较大灌流面积的双下肢标本，为排除人工灌流液对递质受体机能的不良影响采用自身血液灌流。为保持血压正常周期性波动对血管切变应力作用的NO释放背景，灌流泵的运转改用脉动式灌流。根据Wistar大鼠的实验性应用，AP与PPm反应曲线和VSMp兴奋过程呈对数式关系，二曲线拟合优度均为0.922，因此本模型的设计与操作对神经系统与骨骼肌血管紧张性反应关系的实验是可行的。但大鼠骼内动脉少数支配盆腔脏器的小分支，由于处于深层，无法结扎，所以灌流区域面包括这部分的血流，虽其血流量很少，对实验结果影响不大，但仍是本模型有待进一步改进之处。
, 百拇医药
参考文献
1 Kobinger W,Pichler L.Alpha 2- Adrenoceptor agonistic effect of 5- HT 920 isolated perfused hindquarters of rats.Eur J Pharmacol,1981;76:101
2 Biscoe JJ,Simpson SR.Field potentials evoked in the brainstem of the cat by stimulation of carotid sinus,gloss-pharyngeal,aortic and superior laryngeal nerves.J Physiol,1970;209:341
3 Alabaster V,Davey M.Precapillary vessels:Effects of the sympathetic nervous system and of catecholamines.J Cardiovas Pharmacol,1984;6(Suppl):365
4 Madjar H,Docherty JR.Starke K.An examination of pre-and postsynaptic alpha adrenoreceptors in the auto perfused rabbit hindlimb.J Cardiovasc Pharmacol,1980;2:619
(收稿：1999-01-22 修回：1999-03-29), 百拇医药