低密度脂蛋白受体基因多态性对微粒化非诺贝特调脂疗效影响的研究*
作者：秦树存 王士雯 齐鹏 张维强 董振南
单位：秦树存 王士雯 齐鹏 张维强：解放军总医院老年心血管病研究所，北京 100853；董振南：解放军总医院生化科
关键词：高脂血症；低密度脂蛋白受体；基因多态性；调脂药
军医进修学院学报990217 摘要 目的：探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)基因HincⅡ酶切位点多态性对微粒化非诺贝特调脂疗效的影响。方法：血清总胆固醇(TC)≥5.20mmol/L 和/或甘油三酯(TG) 2.00～5.65mmol/L 之间者，共 52 例，随机分为药物组 30 例和安慰剂组 22 例。结果：根据LDLR基因HincⅡ酶切多态性分层比较微粒化非诺贝特和安慰剂的调脂疗效，发现药物组和安慰剂组三种基因型(H1H1、H1H2和H2H2)患者之间的TC、LDTC和TG下降的有效率(TC和LDLC下降分别≥10%，TG下降≥20%)无明显差异(P均>0.05)；不同基因型之间的TC和LDLC下降幅度亦无显著差异(TC依次平均下降 30.3、30.2 和 33.4%，LDLC依次平均下降 28.0、29.1 和 31.8%， P均>0.05)；对血清TG的观察结果亦是如此。说明具有不同LDLR等位基因不论对微粒化非诺贝特的降低血清TG作用，还是对降低血清胆固醇作用均无明显影响。结论：LDLRHincⅡ酶切位点不参与微粒化非诺贝特调整血清胆固醇和TG的作用。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 541
Effect of the gene polymorphism of lowdensity lipoprotein receptor on the efficacies of the lipids regulation ofmicronized fenobrite
Qin Shucun,Wang Shiwen,Qi Peng,Zhang Weiqiang,Dong Zhennan (Institute of Geriatric Cardiology,Chinese PLA General Hospital,Beijing 100853)
Abstract Objective:To observe effect of the gene polymorphism of lowdensity lipoprotein receptor on the efficacies of the lipids regulation ofmicronized fenobrite.Methods: Fifty two patients with hyperlipidemia (serum total cholesterol level exceeded or equal to 5.20mmol/L,and/or triglyceride level was in the range 2.00-5.65mmol/L) were randomly allocated into Fenobrite group and paacebo group (30 and 22 cases,respectively).The lowdensity lipoprotein receptor HincⅡ polymorphism weremeasured by polymerase chain reaction technology.Results: Comparing the efficacies of regulation of lipids of Fenobrite and placebo among the subgroups with H1H1,H1H2,or H2H2 genotype of lowdensity lipoprotein receptor HincⅡ polymorphism,wedid not find that the efficacy rates (10% fall in total cholesterol and in lowdensity lipoprotein cholesterol,20% fall in triglyceride,and increasemore than 0.1mmol/L in highdensity lipoprotein cholesterol,respectively) of patients with H1H2 or H2H2 genotypes were significantlydifferent among thedifferent genotytes of Fenobrite and control groups.The lowered ranges of total cholesterol,lowdensity lipoprotein cholesterol,and triglyceride were neithermarkeddifferent among the patients with H1H1,H1H2,and H2H2 genotypes,average reduction percent of total cholesterol were in sequence 30.3,30.2,and 33.4% (P>0.05)， lowdensity lipoprotein cholesterol were 28.0,29.1,and 31.8% (P>0.05),triglyceride were 55.2,53.9,and 53.62% (P>0.05).Responsiveness were lessdifferent between patients with h1 allele and h2 allele in Fenobrite and placebo group.Conclusion: The result of present study suggested that lowdensity lipoprotein receptor HincⅡ allelesdo not took part in the key processes of the cholesterol or triglyceride regulation of Fenobrite.
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Key words hyperlipidemia; lowdensity lipoprotein receptor,gene polymorphism; lipid regulationdrugs
血脂异常多为遗传因素和环境因素共同作用的结果。同一类型血脂异常患者对调脂治疗反应存在明显的个体差异，提示遗传因素发挥着重要作用。近年来一些血脂异常相关基因在调脂治疗中的意义受到关注〔1〕。低密度脂蛋白受体(Lowdensity lipoprotein receptor,LDLR)与细胞胆固醇代谢和血浆胆固醇水平关系密切〔2〕。LDLR位点存在多种轻微变异的等位基因，可能与人群中血清胆固醇水平的个体差异以及调脂药的药效有关〔3〕。本文通过在原发性高脂血症人群中观察调脂药微粒化非诺贝特的药效和LDLR基因酶切位点多态性的关系，探讨该基因酶切位点对调脂疗效的影响以及不同药效反应的遗学原因。
1 对象和方法
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1.1 病例选择 门诊部或干休所的高胆固醇血症患者经饮食宣教 2～4 周后复查，其血清总胆固醇(TC)仍≥ 5.20mmol/L (200mg/dl) 和(或)甘油三酯(TG)仍在 2.00～5.65mmol/L (180～500mg/dl)之间者，共 52 例进入本试验。其中高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)男性≤1.04mmol/L (40mg/dl) 和女性≤1.16mmol/L (45mg/dl) 者共 10 例。该 52 例中，男 40 例，女 12 例；年龄 60～76 岁，平均 65.8 岁；全体受试者中，排除了半年内患有心肌梗死、脑血管意外、严重创伤或做过重大手术者；有过肾病综合征、甲状腺功能减退、急性和慢性肝胆疾病、糖尿病及痛风、纯合子家族性高胆固醇血症者；药物(肝素、甲状腺素、噻嗪类、受体阻滞剂、肾上腺皮质类固醇及某些避孕药等)引起的高脂血症；以及过敏体质、精神病和近 4 周内曾采用其它降脂药物治疗的患者。
1.2 药物组 30 例，每人每晚服微粒化非诺贝特胶囊(法国力博福尼制药公司提供) 200mg；安慰剂(北大维信制药公司提供)组 22 例，两组疗程均为 8 周。受试者饮食习惯及生活方式与治疗前保持基本一致，可继续服用某些不干扰血脂代谢的药物，但剂量与用法应与治疗前保持一致。服用前和服用后 4 周及 8 周末，询问病史，记录药物反应，检查血脂、血尿素氮、谷丙转氨酶、肌酸激酶及血糖。
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1.3 LDLR基因多态性测定 常规苯酚氯仿法提取白细胞基因组DNA；基因扩增仪(Perkin-Elmer-2400)扩增LDLR基因第 12 外显子上含有HINCⅡ酶切多态位点的片段，引物序列参照文献〔4〕设计，中科院微生物所基因工程中心合成，序列为：
引物1：5′-TCTCCTTATCCACTTGTGTGTC-TAG-3′，引物2：5′-CTTCGATCTCGTACG-TAAGCCACAC-3′。TaqDNA聚合酶为美国Promega公司产品，反应体系 30μl，初期变性 95℃ 5min，继之 30 个周期，每个周期为 95℃ 5min，退火 60℃ 1min ，延伸 72℃ 45 s，终末延伸 72℃ 7min。PCR产物在 1.5% 的琼脂糖(Promega公司)凝胶上电泳，检查扩增的LDLR片段。取 17μl PCR产物加入HincⅡ内切酶(华美公司产品) 8 单位及 2μl 缓冲液， 37℃ 水浴消化过夜。酶切产物 10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色、拍照(附图)，含 133 bp 片段为等位基因 1(h1)， 98 bp 片段为等位基因 2 (h2)，确定基因型，计算各组等位基因和不同基因型的出现频率。
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附图 LDLR基因HincⅡ酶切多态性非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果
M：分子量标记(PBR 322dNA/Hinf Idigest)；1.H1H2；2.H2H2；3.H1H1
1.4 血脂测定 取血前最后一餐，禁止饮酒及进高脂饮食；空腹 12 h 以上取前臂肘静脉血，及时分离血清，贮藏于 -20℃ 冰箱， 2d 内测定TC和TG(酶法，德国宝灵曼公司)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)及HDLC(免疫遮蔽法，日本第一化学公司)。
1.5 个体疗效判定 按卫生部 1988 年颁发的心血管药物临床研究指导原则进行。
1.6 统计学处理 数据输入SAS软件包处理，计量资料用方差分析和t检验，计数资料用χ2检验。
2 结果
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2.1 LDLR基因型频率分布 52 例高脂血症患者LDLR基因型频率分布及其等位基因的相对频率见表 1，药物组和安慰剂组无显著差异。
表1 高脂血症患者LDLR基因型频率分布及其等位基因的相对频率
n
H1H1基因型
H1H2基因型
H2H2基因型
h1等位基因
h2等位基因
药物组
30
2(0.07)
, 百拇医药
21(0.70)
7(0.23)
25(0.42)
35(0.58)
安慰剂
22
1(0.04)
16(0.73)
5(0.23)
18(0.41)
26(0.59)
合计
, 百拇医药
52
3(0.06)
37(0.71)
12(0.23)
43(0.41)
61(0.59)
药物组与安慰剂组间比较P均>0.05
2.2 LDLR基因多态性对药物调脂治疗反应的影响 根据国家卫生部临床药物评价标准判断调脂疗效，以TC、LDLC分别下降 10%，TG下降 20%，HDLC上升 0.1mmol/L 为有效。分别LDLR基因型对微粒化非诺贝特调脂有效率的影响(表 2)。通过各组LDLR基因HincⅡ酶切多态性分层比较，发现药物组 3 个LDLR基因型的调脂效果无明显差异(卡方检验TC的P值为 0.08，LDLC为 0.07)，说明含不同LDLR等位基因的高脂血症患者对微粒化非诺贝特降低TC或LDLC作用的敏感性相似。进一步根据不同等位基因分层比较发现，TC、LDLC、TG和HDLC的P值分别为 0.09、 0.12、 0.17 和 0.28 差异未达显著意义。在安慰剂组中不同基因型和等位基因分层比较亦未见 4 项血脂疗效出现显著差异。
, 百拇医药
表2 高脂血症患者LDLR基因HincⅡ酶切多态性不同基因型和等位基因对药物有效率(%)的影响
n
TC
LDLC
TG
HDLC
30
22(73.3)
21(70.0)
27( 90.0)
5(16.7)
基因型
, 百拇医药
H1H1
2
1(50.0)
1(50.0)
2(100.0)
1(50.0)
H1H2
21
15(71.4)
15(71.4)
19( 90.5)
3(14.3)
, 百拇医药 H2H2
7
6(85.7)
5(71.4)
6( 85.7)
1(14.3)
等位基因
h1
25
17(68.0)
17(68.0)
23( 92.0)
5( 0.2)
, 百拇医药
h2
35
27(77.1)
25(71.4)
31( 88.6)
5(14.3)
不同基因型TC、LDLC、TG和HDLC调脂治疗反应比较卡方检验P均<0.05
比较不同LDLR基因型对调脂幅度的影响(表 3)，分析各个基因型对降低胆固醇药物的反应强度。药物组H1H1和H1H2基因型的TC和LDLC下降幅度与H2H2基因型者比较差异无显著性(P均>0.05)。安慰剂组亦是如此。两组中亦未见不同基因型对TG和HDLC水平改变的明显作用。说明H1H1和H1H2基因型个体对微粒化非诺贝特降低胆固醇的反应类似于H2H2基因型者。提示h1和h2等位基因对微粒化非诺贝特降低胆固醇的作用敏感程度相似。
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表3 高脂血症患者微粒化非诺贝特治疗前后LDLR基因Hinc酶切多态性不同基因型的调脂幅度比较
n
用药前
用药后
%
用药前
用药后
%
TC
LDL-C
30
5.84±1.17
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3.92±0.64
-32.9
3.94±1.13
2.78±0.59
-29.4
H1H1
2
6.07±0.89
4.23±0.58
-30.3
4.07±0.63
2.93±0.32
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-28.0
H1H2
21
5.82±0.73
4.06±0.64
-30.2
3.98±0.52
2.82±0.51
-29.1
H2H2
7
5.80±1.21
, 百拇医药 3.86±0.54
-33.4
4.06±0.61
2.77±0.64
-31.8
HDL-C
TG
30
1.22±0.29
1.24±0.26
+1.6
1.96±1.27
, 百拇医药 1.37±0.98
-53.7
H1H1
2
1.25±0.31
1.26±0.35
+0.8
2.88±1.02
1.29±0.95
-55.2
H1H2
21
1.21±0.27
, 百拇医药
1.23±0.25
+1.7
2.93±1.17
1.35±1.01
-53.9
H2H2
7
1.23±0.28
1.25±0.27
+1.6
2.99±1.21
1.40±0.97
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-53.2
不同基因型调脂幅度比较方差分析 P>0.05
3 讨论
以往人们对血脂基础水平在调脂治疗效果中的影响较为重视，但并未解决个体对调脂药反应差异的根本原因，近年来借助基因检测技术的迅速发展，人们开始探讨一些血脂异常相关基因在调脂治疗中的作用，希冀有所突破，为高脂血症的个体化药物治疗开辟新的途径〔5〕。我们最近的研究发现LDLR基因HincⅡ酶切多态性与血清胆固醇水平有关，h1等位基因与较高的血清胆固醇水平密切相关，而h2等位基因与较低的血清胆固醇水平相关。提示LDLR位点存在的多种轻微变异的等位基因，可能通过连锁某些或某种功能基因参与人群中血清胆固醇水平的调控。也进一步验证了血脂异常的遗传与环境因素共同作用假说。同时提示同一表型血脂异常患者对调脂治疗反应存在明显的个体差异，相关遗传基因的影响不可忽视。本研究根据高脂血症人群用调脂药组和安慰剂组LDLR基因HincⅡ酶切多态性分层比较，发现微粒化非诺贝特组H1H1、H1H2和H2H2基因型的TC或LDLC下降的有效率无明显差异；H1H1、H1H2和H2H2基因型的TC或LDLC下降幅度亦无显著不同。提示含有不同LDLR等位基因的高脂血症患者对降低胆固醇治疗药物微粒化非诺贝特的反应敏感性不存在显著差异。业已证实LDLR与细胞胆固醇代谢和血浆胆固醇水平关系密切，人血浆中 70% 的胆固醇经由LDLR途径代谢降解，一旦LDLR功能下降，就会出现高胆固醇血症，从而导致动脉粥样硬化和冠心病〔2〕。虽然笔者研究的酶切位点变异只是单个碱基的替换，不构成对LDLR功能的直接影响，但不能排除与其它大片段突变连锁的可能性，因此存在LDLRHincⅡ酶切位点间接地参与人体内胆固醇代谢和/或调脂药控制血清胆固醇重要环节的可能性。我们的研究曾发现H1H1和H1H2基因型个体对另外类型的调脂药血脂康降低胆固醇的反应不如H2H2基因型者敏感。微粒化非诺贝特为第三代贝丁酸类调脂药物，对高TG和低LDLC血症有较好的调脂作用〔6〕，其调脂作用机制与他汀类调脂药迥异，为此我们观察了不同基因型患者TG和HDLC水平对药物的反应，结果亦未出现明显不同。说明LDLRHincⅡ酶切位点对微粒化非诺贝特的调脂作用无影响，提示该药的作用机制可能不涉及胆固醇代谢的LDLR机制。
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* “九五”军队医药卫生科研基金资助项目，批准号 95Q107
参考文献
[1]Dammermanm,Jan L Breslow.Genetic basis of lipoproteindisorders.Circulation,1995,91:505
[2]Nishina PM,Johnson JP,Naggert J K et al.Linkage of atherogenic lipoprotein to the lowdensity lipoprotein receptor locus on the short arm of chromosome 19.Proc Natl Acad Sci USA,1992,89:708
[3]Pedersen,Berg K.NormaldNA polymophism at lowdensity lipoprotein teceptor locus associated with serum cholesterol le-vel.Clin Genet,1988,34:306
, http://www.100md.com
[4]Leitersdorf E,Hobbs HH.Human LDL receptor gene: HincⅡ polymorphismdetected by gene amplification.Nucleic Acid Research,1988,16:7215
[5]Paul N,Leon S,Philip B et al.A comparative study of the efficacy of simvastatin and gemfibrozil in combined hyperlipoproteinemia: prediction of response by baseline lipids,apo E genotype,lipoprotein (a) and insulin.Atherosclerosis,1997,129:231
[6]秦树存，齐鹏，张维强等.安慰剂对照试验观察微粒化非诺贝特对老年高脂血症患者的临床疗效.中华心血管病杂志，1998，37(6)：2
(1998—10—23收稿，1998—12—16修回), 百拇医药
单位：秦树存 王士雯 齐鹏 张维强：解放军总医院老年心血管病研究所，北京 100853；董振南：解放军总医院生化科
关键词：高脂血症；低密度脂蛋白受体；基因多态性；调脂药
军医进修学院学报990217 摘要 目的：探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)基因HincⅡ酶切位点多态性对微粒化非诺贝特调脂疗效的影响。方法：血清总胆固醇(TC)≥5.20mmol/L 和/或甘油三酯(TG) 2.00～5.65mmol/L 之间者，共 52 例，随机分为药物组 30 例和安慰剂组 22 例。结果：根据LDLR基因HincⅡ酶切多态性分层比较微粒化非诺贝特和安慰剂的调脂疗效，发现药物组和安慰剂组三种基因型(H1H1、H1H2和H2H2)患者之间的TC、LDTC和TG下降的有效率(TC和LDLC下降分别≥10%，TG下降≥20%)无明显差异(P均>0.05)；不同基因型之间的TC和LDLC下降幅度亦无显著差异(TC依次平均下降 30.3、30.2 和 33.4%，LDLC依次平均下降 28.0、29.1 和 31.8%， P均>0.05)；对血清TG的观察结果亦是如此。说明具有不同LDLR等位基因不论对微粒化非诺贝特的降低血清TG作用，还是对降低血清胆固醇作用均无明显影响。结论：LDLRHincⅡ酶切位点不参与微粒化非诺贝特调整血清胆固醇和TG的作用。
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中国图书资料分类法分类号 R 541
Effect of the gene polymorphism of lowdensity lipoprotein receptor on the efficacies of the lipids regulation ofmicronized fenobrite
Qin Shucun,Wang Shiwen,Qi Peng,Zhang Weiqiang,Dong Zhennan (Institute of Geriatric Cardiology,Chinese PLA General Hospital,Beijing 100853)
Abstract Objective:To observe effect of the gene polymorphism of lowdensity lipoprotein receptor on the efficacies of the lipids regulation ofmicronized fenobrite.Methods: Fifty two patients with hyperlipidemia (serum total cholesterol level exceeded or equal to 5.20mmol/L,and/or triglyceride level was in the range 2.00-5.65mmol/L) were randomly allocated into Fenobrite group and paacebo group (30 and 22 cases,respectively).The lowdensity lipoprotein receptor HincⅡ polymorphism weremeasured by polymerase chain reaction technology.Results: Comparing the efficacies of regulation of lipids of Fenobrite and placebo among the subgroups with H1H1,H1H2,or H2H2 genotype of lowdensity lipoprotein receptor HincⅡ polymorphism,wedid not find that the efficacy rates (10% fall in total cholesterol and in lowdensity lipoprotein cholesterol,20% fall in triglyceride,and increasemore than 0.1mmol/L in highdensity lipoprotein cholesterol,respectively) of patients with H1H2 or H2H2 genotypes were significantlydifferent among thedifferent genotytes of Fenobrite and control groups.The lowered ranges of total cholesterol,lowdensity lipoprotein cholesterol,and triglyceride were neithermarkeddifferent among the patients with H1H1,H1H2,and H2H2 genotypes,average reduction percent of total cholesterol were in sequence 30.3,30.2,and 33.4% (P>0.05)， lowdensity lipoprotein cholesterol were 28.0,29.1,and 31.8% (P>0.05),triglyceride were 55.2,53.9,and 53.62% (P>0.05).Responsiveness were lessdifferent between patients with h1 allele and h2 allele in Fenobrite and placebo group.Conclusion: The result of present study suggested that lowdensity lipoprotein receptor HincⅡ allelesdo not took part in the key processes of the cholesterol or triglyceride regulation of Fenobrite.
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Key words hyperlipidemia; lowdensity lipoprotein receptor,gene polymorphism; lipid regulationdrugs
血脂异常多为遗传因素和环境因素共同作用的结果。同一类型血脂异常患者对调脂治疗反应存在明显的个体差异，提示遗传因素发挥着重要作用。近年来一些血脂异常相关基因在调脂治疗中的意义受到关注〔1〕。低密度脂蛋白受体(Lowdensity lipoprotein receptor,LDLR)与细胞胆固醇代谢和血浆胆固醇水平关系密切〔2〕。LDLR位点存在多种轻微变异的等位基因，可能与人群中血清胆固醇水平的个体差异以及调脂药的药效有关〔3〕。本文通过在原发性高脂血症人群中观察调脂药微粒化非诺贝特的药效和LDLR基因酶切位点多态性的关系，探讨该基因酶切位点对调脂疗效的影响以及不同药效反应的遗学原因。
1 对象和方法
, http://www.100md.com
1.1 病例选择 门诊部或干休所的高胆固醇血症患者经饮食宣教 2～4 周后复查，其血清总胆固醇(TC)仍≥ 5.20mmol/L (200mg/dl) 和(或)甘油三酯(TG)仍在 2.00～5.65mmol/L (180～500mg/dl)之间者，共 52 例进入本试验。其中高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)男性≤1.04mmol/L (40mg/dl) 和女性≤1.16mmol/L (45mg/dl) 者共 10 例。该 52 例中，男 40 例，女 12 例；年龄 60～76 岁，平均 65.8 岁；全体受试者中，排除了半年内患有心肌梗死、脑血管意外、严重创伤或做过重大手术者；有过肾病综合征、甲状腺功能减退、急性和慢性肝胆疾病、糖尿病及痛风、纯合子家族性高胆固醇血症者；药物(肝素、甲状腺素、噻嗪类、受体阻滞剂、肾上腺皮质类固醇及某些避孕药等)引起的高脂血症；以及过敏体质、精神病和近 4 周内曾采用其它降脂药物治疗的患者。
1.2 药物组 30 例，每人每晚服微粒化非诺贝特胶囊(法国力博福尼制药公司提供) 200mg；安慰剂(北大维信制药公司提供)组 22 例，两组疗程均为 8 周。受试者饮食习惯及生活方式与治疗前保持基本一致，可继续服用某些不干扰血脂代谢的药物，但剂量与用法应与治疗前保持一致。服用前和服用后 4 周及 8 周末，询问病史，记录药物反应，检查血脂、血尿素氮、谷丙转氨酶、肌酸激酶及血糖。
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1.3 LDLR基因多态性测定 常规苯酚氯仿法提取白细胞基因组DNA；基因扩增仪(Perkin-Elmer-2400)扩增LDLR基因第 12 外显子上含有HINCⅡ酶切多态位点的片段，引物序列参照文献〔4〕设计，中科院微生物所基因工程中心合成，序列为：
引物1：5′-TCTCCTTATCCACTTGTGTGTC-TAG-3′，引物2：5′-CTTCGATCTCGTACG-TAAGCCACAC-3′。TaqDNA聚合酶为美国Promega公司产品，反应体系 30μl，初期变性 95℃ 5min，继之 30 个周期，每个周期为 95℃ 5min，退火 60℃ 1min ，延伸 72℃ 45 s，终末延伸 72℃ 7min。PCR产物在 1.5% 的琼脂糖(Promega公司)凝胶上电泳，检查扩增的LDLR片段。取 17μl PCR产物加入HincⅡ内切酶(华美公司产品) 8 单位及 2μl 缓冲液， 37℃ 水浴消化过夜。酶切产物 10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色、拍照(附图)，含 133 bp 片段为等位基因 1(h1)， 98 bp 片段为等位基因 2 (h2)，确定基因型，计算各组等位基因和不同基因型的出现频率。
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附图 LDLR基因HincⅡ酶切多态性非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果
M：分子量标记(PBR 322dNA/Hinf Idigest)；1.H1H2；2.H2H2；3.H1H1
1.4 血脂测定 取血前最后一餐，禁止饮酒及进高脂饮食；空腹 12 h 以上取前臂肘静脉血，及时分离血清，贮藏于 -20℃ 冰箱， 2d 内测定TC和TG(酶法，德国宝灵曼公司)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)及HDLC(免疫遮蔽法，日本第一化学公司)。
1.5 个体疗效判定 按卫生部 1988 年颁发的心血管药物临床研究指导原则进行。
1.6 统计学处理 数据输入SAS软件包处理，计量资料用方差分析和t检验，计数资料用χ2检验。
2 结果
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2.1 LDLR基因型频率分布 52 例高脂血症患者LDLR基因型频率分布及其等位基因的相对频率见表 1，药物组和安慰剂组无显著差异。
表1 高脂血症患者LDLR基因型频率分布及其等位基因的相对频率
n
H1H1基因型
H1H2基因型
H2H2基因型
h1等位基因
h2等位基因
药物组
30
2(0.07)
, 百拇医药
21(0.70)
7(0.23)
25(0.42)
35(0.58)
安慰剂
22
1(0.04)
16(0.73)
5(0.23)
18(0.41)
26(0.59)
合计
, 百拇医药
52
3(0.06)
37(0.71)
12(0.23)
43(0.41)
61(0.59)
药物组与安慰剂组间比较P均>0.05
2.2 LDLR基因多态性对药物调脂治疗反应的影响 根据国家卫生部临床药物评价标准判断调脂疗效，以TC、LDLC分别下降 10%，TG下降 20%，HDLC上升 0.1mmol/L 为有效。分别LDLR基因型对微粒化非诺贝特调脂有效率的影响(表 2)。通过各组LDLR基因HincⅡ酶切多态性分层比较，发现药物组 3 个LDLR基因型的调脂效果无明显差异(卡方检验TC的P值为 0.08，LDLC为 0.07)，说明含不同LDLR等位基因的高脂血症患者对微粒化非诺贝特降低TC或LDLC作用的敏感性相似。进一步根据不同等位基因分层比较发现，TC、LDLC、TG和HDLC的P值分别为 0.09、 0.12、 0.17 和 0.28 差异未达显著意义。在安慰剂组中不同基因型和等位基因分层比较亦未见 4 项血脂疗效出现显著差异。
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表2 高脂血症患者LDLR基因HincⅡ酶切多态性不同基因型和等位基因对药物有效率(%)的影响
n
TC
LDLC
TG
HDLC
30
22(73.3)
21(70.0)
27( 90.0)
5(16.7)
基因型
, 百拇医药
H1H1
2
1(50.0)
1(50.0)
2(100.0)
1(50.0)
H1H2
21
15(71.4)
15(71.4)
19( 90.5)
3(14.3)
, 百拇医药 H2H2
7
6(85.7)
5(71.4)
6( 85.7)
1(14.3)
等位基因
h1
25
17(68.0)
17(68.0)
23( 92.0)
5( 0.2)
, 百拇医药
h2
35
27(77.1)
25(71.4)
31( 88.6)
5(14.3)
不同基因型TC、LDLC、TG和HDLC调脂治疗反应比较卡方检验P均<0.05
比较不同LDLR基因型对调脂幅度的影响(表 3)，分析各个基因型对降低胆固醇药物的反应强度。药物组H1H1和H1H2基因型的TC和LDLC下降幅度与H2H2基因型者比较差异无显著性(P均>0.05)。安慰剂组亦是如此。两组中亦未见不同基因型对TG和HDLC水平改变的明显作用。说明H1H1和H1H2基因型个体对微粒化非诺贝特降低胆固醇的反应类似于H2H2基因型者。提示h1和h2等位基因对微粒化非诺贝特降低胆固醇的作用敏感程度相似。
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表3 高脂血症患者微粒化非诺贝特治疗前后LDLR基因Hinc酶切多态性不同基因型的调脂幅度比较
n
用药前
用药后
%
用药前
用药后
%
TC
LDL-C
30
5.84±1.17
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3.92±0.64
-32.9
3.94±1.13
2.78±0.59
-29.4
H1H1
2
6.07±0.89
4.23±0.58
-30.3
4.07±0.63
2.93±0.32
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-28.0
H1H2
21
5.82±0.73
4.06±0.64
-30.2
3.98±0.52
2.82±0.51
-29.1
H2H2
7
5.80±1.21
, 百拇医药 3.86±0.54
-33.4
4.06±0.61
2.77±0.64
-31.8
HDL-C
TG
30
1.22±0.29
1.24±0.26
+1.6
1.96±1.27
, 百拇医药 1.37±0.98
-53.7
H1H1
2
1.25±0.31
1.26±0.35
+0.8
2.88±1.02
1.29±0.95
-55.2
H1H2
21
1.21±0.27
, 百拇医药
1.23±0.25
+1.7
2.93±1.17
1.35±1.01
-53.9
H2H2
7
1.23±0.28
1.25±0.27
+1.6
2.99±1.21
1.40±0.97
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-53.2
不同基因型调脂幅度比较方差分析 P>0.05
3 讨论
以往人们对血脂基础水平在调脂治疗效果中的影响较为重视，但并未解决个体对调脂药反应差异的根本原因，近年来借助基因检测技术的迅速发展，人们开始探讨一些血脂异常相关基因在调脂治疗中的作用，希冀有所突破，为高脂血症的个体化药物治疗开辟新的途径〔5〕。我们最近的研究发现LDLR基因HincⅡ酶切多态性与血清胆固醇水平有关，h1等位基因与较高的血清胆固醇水平密切相关，而h2等位基因与较低的血清胆固醇水平相关。提示LDLR位点存在的多种轻微变异的等位基因，可能通过连锁某些或某种功能基因参与人群中血清胆固醇水平的调控。也进一步验证了血脂异常的遗传与环境因素共同作用假说。同时提示同一表型血脂异常患者对调脂治疗反应存在明显的个体差异，相关遗传基因的影响不可忽视。本研究根据高脂血症人群用调脂药组和安慰剂组LDLR基因HincⅡ酶切多态性分层比较，发现微粒化非诺贝特组H1H1、H1H2和H2H2基因型的TC或LDLC下降的有效率无明显差异；H1H1、H1H2和H2H2基因型的TC或LDLC下降幅度亦无显著不同。提示含有不同LDLR等位基因的高脂血症患者对降低胆固醇治疗药物微粒化非诺贝特的反应敏感性不存在显著差异。业已证实LDLR与细胞胆固醇代谢和血浆胆固醇水平关系密切，人血浆中 70% 的胆固醇经由LDLR途径代谢降解，一旦LDLR功能下降，就会出现高胆固醇血症，从而导致动脉粥样硬化和冠心病〔2〕。虽然笔者研究的酶切位点变异只是单个碱基的替换，不构成对LDLR功能的直接影响，但不能排除与其它大片段突变连锁的可能性，因此存在LDLRHincⅡ酶切位点间接地参与人体内胆固醇代谢和/或调脂药控制血清胆固醇重要环节的可能性。我们的研究曾发现H1H1和H1H2基因型个体对另外类型的调脂药血脂康降低胆固醇的反应不如H2H2基因型者敏感。微粒化非诺贝特为第三代贝丁酸类调脂药物，对高TG和低LDLC血症有较好的调脂作用〔6〕，其调脂作用机制与他汀类调脂药迥异，为此我们观察了不同基因型患者TG和HDLC水平对药物的反应，结果亦未出现明显不同。说明LDLRHincⅡ酶切位点对微粒化非诺贝特的调脂作用无影响，提示该药的作用机制可能不涉及胆固醇代谢的LDLR机制。
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* “九五”军队医药卫生科研基金资助项目，批准号 95Q107
参考文献
[1]Dammermanm,Jan L Breslow.Genetic basis of lipoproteindisorders.Circulation,1995,91:505
[2]Nishina PM,Johnson JP,Naggert J K et al.Linkage of atherogenic lipoprotein to the lowdensity lipoprotein receptor locus on the short arm of chromosome 19.Proc Natl Acad Sci USA,1992,89:708
[3]Pedersen,Berg K.NormaldNA polymophism at lowdensity lipoprotein teceptor locus associated with serum cholesterol le-vel.Clin Genet,1988,34:306
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[4]Leitersdorf E,Hobbs HH.Human LDL receptor gene: HincⅡ polymorphismdetected by gene amplification.Nucleic Acid Research,1988,16:7215
[5]Paul N,Leon S,Philip B et al.A comparative study of the efficacy of simvastatin and gemfibrozil in combined hyperlipoproteinemia: prediction of response by baseline lipids,apo E genotype,lipoprotein (a) and insulin.Atherosclerosis,1997,129:231
[6]秦树存，齐鹏，张维强等.安慰剂对照试验观察微粒化非诺贝特对老年高脂血症患者的临床疗效.中华心血管病杂志，1998，37(6)：2
(1998—10—23收稿，1998—12—16修回), 百拇医药