PCNA和C-erbB-2在喉癌中的表达以及临床意义
作者：黄志纯 姚 青 张凤兵 蒋静娟 曹银成
单位：南京铁道医学院附属第一医院
关键词：喉肿瘤；癌；鳞状细胞；增殖细胞核抗原；C-erbB-2；免疫组织化学
山东医大基础医学院学报990204 内容提要 用免疫组化SP法对63例喉鳞状细胞癌的PCNA和C-erbB-2进行原位检测,并随访了5年的生存情况。结果表明,PCNA指数越高,病理分级越差(P<0.01),5年生存率越低(P<0.05),颈淋巴结转移率越高(P<0.05)。而C-erbB-2表达阳性率与病理分级、5年生存率及颈淋巴结转移率无关。PCNA和C-erbB-2之间无相关性。提示PCNA指数与喉癌恶性程度、5年生存率、颈淋巴结转移率密切相关,在喉癌中检测PCNA较C-erbB-2更有意义。
EXPRESSION OF PCNA AND C-erbB-2 PROTEIN IN LARYNGEAL
, http://www.100md.com
CARCINOMA AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE
Huang Zhichun Yao Qing Zhang Fengbing,et al
(The Affiliated Hospital of Nanjing Railway Medical College)
Abstract Expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)and C-erbB-2 protein were detected in 63 cases of laryngeal carcinoma by immunohistochemical staining.The results revealed the more higher the PCNA indices,the cervical metastasis rate was higher (P<0.05),histological grading of the carcinomas(P<0.01)and the five-year survival rate(P<0.05)were poorer.The positive rates of the C-erbB-2 expression were 58.74% in the 63 cases of laryngeal carcinoma,but there were no obvious relations in the C-erbB-2 expression with the histological grading of the carcinoma,the five-year surival rate and cervical metastasis rate.There were no relationship between PCNA and C-erbB-2 expression.PCNA index was more significant than C-erbB-2 expression.PCNA index was more significant than c-erbB-2 expression in the prediction of tumor malignancy and prognosis.
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Key words Laryngeal neoplasms;Carcinoma,squamous cell;Proliferating cell nuclear antigen;C-erbB-2;Immunohistochemical
肿瘤细胞增殖活性与肿瘤的生物学行为密切相关,细胞增殖活性的测定对判断恶性肿瘤的生长潜力,临床经过及估计预后均有十分重要的意义[1]。但目前缺乏一种操作简单、快速、可信度高的测定方法,PCNA和C-erbB-2都可反映细胞的增殖情况,可估计肿瘤的恶性度,C-erbB-2蛋白在喉癌中的表达情况国内尚未见报道,而且在一种肿瘤中同时检测上述两种指标亦不多见,喉癌更是如此。我们用免疫组化SP法检测喉癌中PCNA和C-erbB-2的蛋白表达情况,并对所检测的患者进行5年以上的随访,探讨PCNA和C-erbB-2在喉癌中的表达情况,与喉癌的病理分级、颈淋巴结转移和预后的关系,以及二者的相关性,并研究其临床意义。
, http://www.100md.com 1 资料和方法
1.1 临床病理资料 选用本院病理科1982至1992年活检或手术切除标本档案蜡块共63例,均为鳞状细胞癌,经两位病理学家确诊并分级,5μm切片备用。其中男62例,女1例,51～70岁,所有病例均随访5年以上。
1.2 免疫组化染色 抗PCNA单克隆抗体及癌基因C-erbB-2单克隆抗体为美国Zymed公司产品,工作浓度PCNA为1:100,C-erbB-2为1:50,二抗及SP复合物均购自美国Zymed公司,SP法染色,苏木素复染。
1.3 结果判断 细胞核染色呈棕黄色为PCNA阳性细胞,用盲法选取有代表性的区域高倍视野计数1000个肿瘤细胞,每百个细胞中PCNA阳性细胞数即为PCNA指数。细胞膜或细胞浆中呈现棕黄色颗粒为C-erbB-2阳性细胞,记录为(+),否则为(-)。
2 结 果
, http://www.100md.com
2 .1 一般情况 PCNA阳性染色几乎均局限在细胞核中,表现为弥散或颗粒样分布,极少数细胞胞浆中少量阳性着色,核丝分裂中的细胞整个细胞内均阳性着色,这与核丝分裂时核膜消失有关,见图1。
图1 免疫组化PCNA标记细胞核阳性(10×10)
C-erbB-2阳性染色表现为胞膜或胞浆棕黄色着色,显色过强呈棕褐色,甚至可见细小颗粒,多数位于肿瘤细胞的胞膜上,少数位于胞浆中,见图2。
图2 免疫组化C-erbB-2标记癌细胞胞浆及胞膜染色阳性 (10×10)
2.2 PCNA及C-erbB-2与喉癌的病理分级关系 低分化喉鳞癌的PCNA指数高于高分化鳞癌,经t检验,差异有高度显著性(P<0.01)。C-erbB-2的阳性表达率随喉癌病理分级的提高而增高,但差异无显著性(P>0.05),见表1。
, 百拇医药
表1 PCNA及C-erbB-2与喉癌的病理分级关系 病理分级
n
PCNA指数(
±s)
C-erbB-2阳性表达率(%)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
正常粘模
23
23
17
, http://www.100md.com
20
51.33±10.20
66.69±11.86
83.10±8.58*
8.86±2.37
52.17
60.87
64.71
0
*P<0.01
2.3 PCNA、C-erbB-2与喉癌患者5年生存率的关系 PCNA指数5年内生存组为60.20%,5年内死亡组为78.81%,差异有显著性(P<0.05)。C-erbB-2的阳性表达率,同患者的5年生存率无关(P>0.2),见表2。
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表2 PCNA、C-erbB-2同喉癌患者5年生存率 组别
n
PCNA指数(±s)
C-erbB-2阳性表达率
生存
死亡
45
18
60.20±14.09*
78.81±13.90
, 百拇医药 62.22
50.00
*P<0.05
2.4 PCNA与颈淋巴结转移关系 PCNA指数颈淋巴结转移者为73.77%,无转移者为64.65%,差异有显著性(P<0.05)。有颈淋巴结转移的6例喉癌中5例C-erbB-2表达阴性,见表3。
表3 PCNA与颈淋巴结转移关系 颈淋巴结
n
PCNA指数(±s)
转 移
无转移
, 百拇医药
6
57
73.77±15.55
64.65±16.27
P<0.05
2.5 PCNA与C-erbB-2的相关性 63例喉鳞癌中26例C-erbB-2表达阴性,其PCNA平均指数为64%,37例C-erbB-2表达阳性者的PCNA平均指数为66.67%,差异无显著性。
3 讨 论
PCNA亦称周期蛋白(cylin),它是DNA聚合酶的辅助蛋白,其合成水平与细胞增殖率及DNA合成直接相关,PCNA在细胞核中的水平从Gl后期开始上升,先于DNA的合成开始,在S期达到高峰,在G2期开始下降,在M期和静止期维持最低水平,它是反映细胞增殖的有用指标[2]。C-erbB-2是定位于人17号染色体长臂(17q21)的原癌基因,是一种编码为185KD类似于表皮生长因子受体的糖蛋白,具有酪氨酸激酶活性,在细胞增殖和分化调控中起重要作用[3]。本研究通过检测63例喉鳞癌中PCNA和C-erbB-2的表达情况,发现PCNA平均指数为67.04%,较张庆慧[1]报道的略高,而与周光耀[4]的报道相近。C-erbB-2的阳性表达率为58.74%,比Weinstein[5]等报道的声门上喉癌中阳性表达率为34%略高,说明C-erbB-2在喉鳞癌中亦有较高的表达水平,喉癌的发生同原癌基因C-erbB-2有关。
, 百拇医药
许多学者发现PCNA与肿瘤的恶性程度呈正相关[1，4，6]。本研究显示,PCNA指数随着喉癌病理分级的增高而升高,差异有显著性,表明肿瘤恶性程度越高的肿瘤,其PCNA指数越高,故PCNA可成为判断肿瘤恶性程度的辅助指标。喉癌中C-erbB-2的阳性表达率虽随着肿瘤的恶性程度加重而有所上升,最高达65.22%,但经统计学处理,差异无显著性,说明C-erbB-2与喉癌的病理分级无明显相关性。通过对63例喉癌患者进行随访,发现5年生存组PCNA指数明显低于5年内死亡组(P<0.05),因此可以认为PCNA指数高的患者预后差,C-erbB-2则与患者预后关系不大。有颈淋巴结转移者的PCNA指数高于无颈淋巴结转移者,差异有显著性。说明PCNA不仅与喉癌的病理分级有关,而且与患者预后及颈淋巴结转移有关。故检测PCNA可作为判断喉癌的恶性度及估计患者预后的指标。
PCNA是反映肿瘤细胞增殖活性的指标,C-erbB-2在细胞增殖与分化调控中起重要作用,二者均可反映细胞的增殖情况。本组26例C-erbB-2表达阴性者的PCNA指数为64.00%,37例C-erbB-2表达阳性者的PCNA指数为66.67%,差异无显著性,而且C-erbB-2同喉癌的病理分级、颈淋巴结转移及5年生存率无明显关系,故本研究提示PCNA和C-erbB-2无明显的正相关性,可能C-erbB-2过度表达与鳞癌细胞的恶性转化有关,而在促进细胞增殖方面起着次要作用。
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参考文献
1 张庆慧,李延忠,刘景琴,等.喉癌细胞增殖活性与组织学恶性度及预后关系的研究.中华耳鼻咽喉科杂志,1995;30(5):305
2 Bravo R,Frank R,Blundeup A,et al.Cyclin/PCNA is the auxiliary protein of DNA polymerases.Nature,1987;326:515
3 Maguire HC,Greene MI.The C-erbB-2 oncogene.Semin Oncol, 1989;16:148
4 周光耀,林代诚,梁传余,等.增殖细胞核抗原在喉上皮癌前病变中的表达及意义.中华耳鼻咽喉科杂志,1995;30(4):206
5 Weinstein GS,Nuamah IF,Tuker J.Evaluation of C-erbB-2 oncogene expression in the whole organ section of supraglottic squamous cell carcinoma.Ann Otol Rhinol,1996;105(4):275
6 Stor Kels,Reichert T,Reiffen KA,et al.EGFR and PCNA expression in oral squamous cell carcinoma-A vauable tool in estimating the patients prognosis.Oral Oncol Eur J Cancer,1993;29B:273
(收稿日期 1999-02-19)
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单位：南京铁道医学院附属第一医院
关键词：喉肿瘤；癌；鳞状细胞；增殖细胞核抗原；C-erbB-2；免疫组织化学
山东医大基础医学院学报990204 内容提要 用免疫组化SP法对63例喉鳞状细胞癌的PCNA和C-erbB-2进行原位检测,并随访了5年的生存情况。结果表明,PCNA指数越高,病理分级越差(P<0.01),5年生存率越低(P<0.05),颈淋巴结转移率越高(P<0.05)。而C-erbB-2表达阳性率与病理分级、5年生存率及颈淋巴结转移率无关。PCNA和C-erbB-2之间无相关性。提示PCNA指数与喉癌恶性程度、5年生存率、颈淋巴结转移率密切相关,在喉癌中检测PCNA较C-erbB-2更有意义。
EXPRESSION OF PCNA AND C-erbB-2 PROTEIN IN LARYNGEAL
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CARCINOMA AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE
Huang Zhichun Yao Qing Zhang Fengbing,et al
(The Affiliated Hospital of Nanjing Railway Medical College)
Abstract Expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)and C-erbB-2 protein were detected in 63 cases of laryngeal carcinoma by immunohistochemical staining.The results revealed the more higher the PCNA indices,the cervical metastasis rate was higher (P<0.05),histological grading of the carcinomas(P<0.01)and the five-year survival rate(P<0.05)were poorer.The positive rates of the C-erbB-2 expression were 58.74% in the 63 cases of laryngeal carcinoma,but there were no obvious relations in the C-erbB-2 expression with the histological grading of the carcinoma,the five-year surival rate and cervical metastasis rate.There were no relationship between PCNA and C-erbB-2 expression.PCNA index was more significant than C-erbB-2 expression.PCNA index was more significant than c-erbB-2 expression in the prediction of tumor malignancy and prognosis.
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Key words Laryngeal neoplasms;Carcinoma,squamous cell;Proliferating cell nuclear antigen;C-erbB-2;Immunohistochemical
肿瘤细胞增殖活性与肿瘤的生物学行为密切相关,细胞增殖活性的测定对判断恶性肿瘤的生长潜力,临床经过及估计预后均有十分重要的意义[1]。但目前缺乏一种操作简单、快速、可信度高的测定方法,PCNA和C-erbB-2都可反映细胞的增殖情况,可估计肿瘤的恶性度,C-erbB-2蛋白在喉癌中的表达情况国内尚未见报道,而且在一种肿瘤中同时检测上述两种指标亦不多见,喉癌更是如此。我们用免疫组化SP法检测喉癌中PCNA和C-erbB-2的蛋白表达情况,并对所检测的患者进行5年以上的随访,探讨PCNA和C-erbB-2在喉癌中的表达情况,与喉癌的病理分级、颈淋巴结转移和预后的关系,以及二者的相关性,并研究其临床意义。
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1.1 临床病理资料 选用本院病理科1982至1992年活检或手术切除标本档案蜡块共63例,均为鳞状细胞癌,经两位病理学家确诊并分级,5μm切片备用。其中男62例,女1例,51～70岁,所有病例均随访5年以上。
1.2 免疫组化染色 抗PCNA单克隆抗体及癌基因C-erbB-2单克隆抗体为美国Zymed公司产品,工作浓度PCNA为1:100,C-erbB-2为1:50,二抗及SP复合物均购自美国Zymed公司,SP法染色,苏木素复染。
1.3 结果判断 细胞核染色呈棕黄色为PCNA阳性细胞,用盲法选取有代表性的区域高倍视野计数1000个肿瘤细胞,每百个细胞中PCNA阳性细胞数即为PCNA指数。细胞膜或细胞浆中呈现棕黄色颗粒为C-erbB-2阳性细胞,记录为(+),否则为(-)。
2 结 果
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2 .1 一般情况 PCNA阳性染色几乎均局限在细胞核中,表现为弥散或颗粒样分布,极少数细胞胞浆中少量阳性着色,核丝分裂中的细胞整个细胞内均阳性着色,这与核丝分裂时核膜消失有关,见图1。
图1 免疫组化PCNA标记细胞核阳性(10×10)
C-erbB-2阳性染色表现为胞膜或胞浆棕黄色着色,显色过强呈棕褐色,甚至可见细小颗粒,多数位于肿瘤细胞的胞膜上,少数位于胞浆中,见图2。
图2 免疫组化C-erbB-2标记癌细胞胞浆及胞膜染色阳性 (10×10)
2.2 PCNA及C-erbB-2与喉癌的病理分级关系 低分化喉鳞癌的PCNA指数高于高分化鳞癌,经t检验,差异有高度显著性(P<0.01)。C-erbB-2的阳性表达率随喉癌病理分级的提高而增高,但差异无显著性(P>0.05),见表1。
, 百拇医药
表1 PCNA及C-erbB-2与喉癌的病理分级关系 病理分级
n
PCNA指数(
±s)C-erbB-2阳性表达率(%)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
正常粘模
23
23
17
, http://www.100md.com
20
51.33±10.20
66.69±11.86
83.10±8.58*
8.86±2.37
52.17
60.87
64.71
0
*P<0.01
2.3 PCNA、C-erbB-2与喉癌患者5年生存率的关系 PCNA指数5年内生存组为60.20%,5年内死亡组为78.81%,差异有显著性(P<0.05)。C-erbB-2的阳性表达率,同患者的5年生存率无关(P>0.2),见表2。
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表2 PCNA、C-erbB-2同喉癌患者5年生存率 组别
n
PCNA指数(
±s)C-erbB-2阳性表达率
生存
死亡
45
18
60.20±14.09*
78.81±13.90
, 百拇医药 62.22
50.00
*P<0.05
2.4 PCNA与颈淋巴结转移关系 PCNA指数颈淋巴结转移者为73.77%,无转移者为64.65%,差异有显著性(P<0.05)。有颈淋巴结转移的6例喉癌中5例C-erbB-2表达阴性,见表3。
表3 PCNA与颈淋巴结转移关系 颈淋巴结
n
PCNA指数(
±s)转 移
无转移
, 百拇医药
6
57
73.77±15.55
64.65±16.27
P<0.05
2.5 PCNA与C-erbB-2的相关性 63例喉鳞癌中26例C-erbB-2表达阴性,其PCNA平均指数为64%,37例C-erbB-2表达阳性者的PCNA平均指数为66.67%,差异无显著性。
3 讨 论
PCNA亦称周期蛋白(cylin),它是DNA聚合酶的辅助蛋白,其合成水平与细胞增殖率及DNA合成直接相关,PCNA在细胞核中的水平从Gl后期开始上升,先于DNA的合成开始,在S期达到高峰,在G2期开始下降,在M期和静止期维持最低水平,它是反映细胞增殖的有用指标[2]。C-erbB-2是定位于人17号染色体长臂(17q21)的原癌基因,是一种编码为185KD类似于表皮生长因子受体的糖蛋白,具有酪氨酸激酶活性,在细胞增殖和分化调控中起重要作用[3]。本研究通过检测63例喉鳞癌中PCNA和C-erbB-2的表达情况,发现PCNA平均指数为67.04%,较张庆慧[1]报道的略高,而与周光耀[4]的报道相近。C-erbB-2的阳性表达率为58.74%,比Weinstein[5]等报道的声门上喉癌中阳性表达率为34%略高,说明C-erbB-2在喉鳞癌中亦有较高的表达水平,喉癌的发生同原癌基因C-erbB-2有关。
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许多学者发现PCNA与肿瘤的恶性程度呈正相关[1，4，6]。本研究显示,PCNA指数随着喉癌病理分级的增高而升高,差异有显著性,表明肿瘤恶性程度越高的肿瘤,其PCNA指数越高,故PCNA可成为判断肿瘤恶性程度的辅助指标。喉癌中C-erbB-2的阳性表达率虽随着肿瘤的恶性程度加重而有所上升,最高达65.22%,但经统计学处理,差异无显著性,说明C-erbB-2与喉癌的病理分级无明显相关性。通过对63例喉癌患者进行随访,发现5年生存组PCNA指数明显低于5年内死亡组(P<0.05),因此可以认为PCNA指数高的患者预后差,C-erbB-2则与患者预后关系不大。有颈淋巴结转移者的PCNA指数高于无颈淋巴结转移者,差异有显著性。说明PCNA不仅与喉癌的病理分级有关,而且与患者预后及颈淋巴结转移有关。故检测PCNA可作为判断喉癌的恶性度及估计患者预后的指标。
PCNA是反映肿瘤细胞增殖活性的指标,C-erbB-2在细胞增殖与分化调控中起重要作用,二者均可反映细胞的增殖情况。本组26例C-erbB-2表达阴性者的PCNA指数为64.00%,37例C-erbB-2表达阳性者的PCNA指数为66.67%,差异无显著性,而且C-erbB-2同喉癌的病理分级、颈淋巴结转移及5年生存率无明显关系,故本研究提示PCNA和C-erbB-2无明显的正相关性,可能C-erbB-2过度表达与鳞癌细胞的恶性转化有关,而在促进细胞增殖方面起着次要作用。
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参考文献
1 张庆慧,李延忠,刘景琴,等.喉癌细胞增殖活性与组织学恶性度及预后关系的研究.中华耳鼻咽喉科杂志,1995;30(5):305
2 Bravo R,Frank R,Blundeup A,et al.Cyclin/PCNA is the auxiliary protein of DNA polymerases.Nature,1987;326:515
3 Maguire HC,Greene MI.The C-erbB-2 oncogene.Semin Oncol, 1989;16:148
4 周光耀,林代诚,梁传余,等.增殖细胞核抗原在喉上皮癌前病变中的表达及意义.中华耳鼻咽喉科杂志,1995;30(4):206
5 Weinstein GS,Nuamah IF,Tuker J.Evaluation of C-erbB-2 oncogene expression in the whole organ section of supraglottic squamous cell carcinoma.Ann Otol Rhinol,1996;105(4):275
6 Stor Kels,Reichert T,Reiffen KA,et al.EGFR and PCNA expression in oral squamous cell carcinoma-A vauable tool in estimating the patients prognosis.Oral Oncol Eur J Cancer,1993;29B:273
(收稿日期 1999-02-19)
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