云南花粉田七口服液对全血中超氧化物歧化酶活性的影响的实验研究
作者：陈友琴 胡新珉 刘鸿莲 李宜贵 幸浩洋
单位：华西医科大学基础医学院 物理教研室，四川 成都 610044
关键词：超氧化物歧化酶；自由基；云南花粉田七口服液；超氧阴离子自由基
中国医学物理学杂志990218 摘要：本研究采用SOD微量快速测定法，报道了云南花粉田七口服液(YunNan Pollen Tienchi Oral Liquid,简称YN-PTOL)对30只(12～14)月龄的昆明种小白鼠红细胞中SOD活性影响及其作用机制。研究结果表明，灌胃云南花粉田七口服液的试验组动物，其红细胞SOD活性分别与对照组和空白组比较，其中试验组红细胞中SOD活性(329.90±59.76 u/ml)与相应对照组(259.90±122.08)u/ml比较差别不明显(P>0.05)，但与相应空白组(151.06±67.22)u/ml比较，差别却有显著性意义(P<0.0005)。这提示，在本疗程和试验剂量内，YN-PTOL能有效提高抗氧化酶SOD活性，这不仅对老年动物体内氧化损伤具有防御作用，而且对机体的延年益寿具有重要意义。
, http://www.100md.com
中图分类号：Q6
文献标识码：A
文章编号：1005-202X(1999)02-0108-02
Study on the effect of YunNan Pollen Tienchi Oral
Liquid on the superoxide dismutase in red blood cells
CHEN You-qin,HU Xin-min,LIU Hong-lian,LI Yi-gui,XIN Hao-yang
(Department of Physics of Basic Medical College,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610044,China)
, 百拇医药
Abstract:In this study,the activity of superoxide dismutase(SOD)in red blood cells(RBC) was determined.The effect of YN-PTOL on the activity of SOD in RBC was reported.The following action of the medical were observed:The amount of SOD can be highly increased in the blood.SOD activities in oral liquid group (329.90±59.76 u/ml，P<0.0005) and vitamin E group(259.90±122.08 u/ml,P<0.025) were significantly higher than those in refined sugar group (151.10±67.22 u/ml)，but no significant difference between oral liquid group and vitamin E group(P>0.05).These results suggested that the decrease of SOD activities with age may be an important factor of cellular aging.The study showed that YN-PTOL possessed strong ability for increasing activity of SOD.The effect is important for antioxidation and antiaging.
, 百拇医药
Key words:superoxide dismutase;free radical;YunNan Pollen Tiendni Oral liquid;superoxide anion radical
自1856后Garnab[1]提出衰老的自由基学说(Free radical theory of aging)以来，越来越多的实验证实，呼吸着的细胞不断产生的氧自由基及其氧化反应促使着生命系统的衰竭。特别是作为体内衰老自由基启动因子之一的超氧阴离子自由基(superoxide anion radical，简称O-2)水平过剩性增高，是机体衰老的重要指标之一[2]。超氧化物歧化酶(uperoxide dismutase,简称SOD)是特异性清除O-2，防止O-2氧化损伤的大分子自由基清除剂，是抗氧化剂作为寿命决定因子的代表[3]。大多数学者报道认为[4]，随着年龄增长，SOD活性明显下降。因此，要降低或预防自由基氧化作用的致衰老损伤，采取有效方法改善或提高老年机体内SOD活性对于抗氧化、延缓衰老非常关键。为此，采用云南花粉田七口服液作为抗氧化剂对试验动物小白鼠体内SOD活性的影响进行了试验研究，通过对受试动物红细胞中SOD活性检测和分析，取得了有科学价值的研究结论。现将结果报告如下：
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康雄性昆明种小白鼠(12～14月龄)。由华西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物和主要试剂
云南花粉田七口服液(主要成分为云南乔麦花粉、田七和蜂蜜。昆明宏达制药厂，批号：9607021)；维生素E(厦门鱼肝油厂)；邻苯三酚(遵义市第二化工厂)；二甲砷酸钠(德国产品)；其余试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器
岛津UV-260型紫外光分光光度计。
1.4 实验方法
将实验用小白鼠按随机化原则分为三组。A组为试验组；B组为阳性对照组；C组为空白对照组。A组为口服液0.5 ml/只/日；B组为维生素0.5 ml/只/日(10 mg/ml)；C组为0.5 ml(10%的白糖水)/只/日。连续灌胃三十天。进行双眼球摘除取血后，按徐树云[5]的方法制备红细胞SOD抽提液。并按邻苯三酚自氧化法[6]测试和计算SOD活力。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
本实验数据以平均值±标准差(
±SD)表示，采用两样本均数比较的t检验，所有处理显著性水准均取单测a=0.05。
2 结果
云南花粉田七口服液对老年小鼠红细胞中SOD活性的影响。实验结果见下表：
SOD activity in RBC of different groups(±SD) group
N
SOD(u/ml)
, 百拇医药
A(oral liquid)
10
329.90±59.76
B(vitamin E)
10
259.90±122.08
C(refined sugar)
10
151.10±67.22
comparisons of SOD between two groups:
A and B:t=1.629 P>0.05
, 百拇医药
B and C:t=2.469 P<0.025
A and C:t=6.287 P<0.0005
由表可知，云南花粉田七口服液和维生素E均使老年小鼠红细胞中SOD活性显著增加，但口服液的作用与维生素E相比，虽SOD活性均值提高70 u/ml，但差别经统计学处理，无显著性意义(P>0.05)。
3 讨论
衰老的自由基理论认为，细胞氧化代谢产生的超氧阴离子自由基(O-2)是引起衰老的原因之一。O-2与组织中的H2O2产生更活泼的*OH，它们可诱发机体内不饱和脂肪酶的一系列脂质过氧化链锁反应，造成生物膜结构和功能损伤外，还可破坏核酸、蛋白质等生物分子，可能成为诱发组织器官老化的重要因素之一，因此，自由基反应与衰老过程有密切关系[7]。在正常生理情况下，SOD能有效清除并阻止O-2引发的自由基链锁反应，维持机体自由基产生和清除间的动态平衡。但是由于各种原因导致自由基产生过多，超越了抗氧化体系的抑制能力和抗氧化体系受到严重损害不足以清除生理水平的自由基时就会出现失衡现象，将引起O-2水平的净增加，导致疾病和衰老。
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有报道认为[8]，SOD是唯一能够特异性消除超氧阴离子自由基生物毒性效应的重要保护酶，它的存在与机体抗衰老、抗炎症、抗辐射、抗肿瘤，抗自身免疫性疾病等有密切关系，是抗氧化剂作为寿命决定因子的代表。任何需氧呼吸的机体如果没有SOD或相当的保护机制就无法延续生命。Cutler[9]等人的研究也证实，寿命越长的动物，其SOD活性的含量越高，研究人员还通过对哺乳动物组织SOD等抗氧化剂水平的研究证实，SOD等抗氧化剂含量与物种寿限呈高度正相关。由此可见，云南花粉田七口服液通过提高机体内源性SOD活性，清除O-2对机体的损伤，减少脂质过氧化物和丙二醛的产生，对于机体延缓衰老保健确有重要价值。
云南花粉田七口服液所以能迅速提高动物红细胞的SOD活性，可能与如下作用相关[10，11]：首先，云南花粉田七口服液中含有丰富的营养物质和多种生物活性物质，它们在生物体内相互协同，共济增效，有效地改善了机体的生理功能，从而有力地促进了组织细胞的新陈代谢，使体内新生细胞增多，SOD活性增强；其次，云南花粉田七口服液中的人参皂甙、酶、生物碱等活性成分，能加快酶蛋白，特别是细胞内SOD酶蛋白的合成，使SOD产生增多，活性增加；第三，云南花粉田七口服液中，本身含有丰富的抗氧化剂成分，是自由基有效清除剂，主要是具有酚羟基团的化合物(黄酮类、生物碱类、维生素类等)，均能直接消除体内的自由基代谢产物或衍生物(LPO或MDA)，这样减少了自由基及其代谢产物对SOD的灭活作用，从而使SOD活性增加；最后，由于衰老机体一系列复杂的生理生化功能改变，使无活性或免疫学性质变化的SOD增多，致使SOD活性明显下降。由于云南花粉田七口服液的延缓衰老作用，使机体生理功能得到调理，特别是无活性或免疫学性质变化的SOD酶活性逐渐修复，使有活性的SOD相应增加。除此之外，还有一些影响SOD酶活性的内源性或外源性因素，有些原因有待于进一步探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] Harman D:Free radical theory of aging:the “free radical”diseases[J].Age,1984,7:111.
[2] Knight JA.Diseases related to oxygen-derived free radicals[J].Ann Clin Lab Sci,1995,25:111-126.
[3] Fridovich I.Superoxide dismutases.Adv Enzymol,1974,41:35-97.
[4] Halliwell B.Antioxidant characterization methodology and mechanism[J].Biochem Pharmacol,1995,49:35-97.
, 百拇医药
[5] 徐树云，卞如谦，陈修.药理学实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1991，502-504.
[6] 向淼森，张玉斌.9例Down氏综合征患者微量指血超氧化物歧化酶测定结果分析[J].中华医学检验杂志，1990，13(1)：19
[7] Gutteridge JMC.Biological origin of free radicals,and mechanisms of antioxidant protection[J].Chem Biol Inter.1994,91:133-140.
[8] Gonzalos R.Superoxide dismutase,Catalase,and glutathione peroxide in red cell blood cells from patients with malignant diseases.Cancer Res,198444(9):4137.
, http://www.100md.com
[9] Culter RG.Antioxidant and aging[J].Am J Clin Nutr,1991,53:373S-379S.
[10] Amstad P.The balance between Cu.Zn-Superoxide dismutase and catalase affects the sensitivity of mouse epidermal cells to oxidative stress[J].Biochemistry,1991,30:9305-9313.
[11] Olivier O,Stanzial AM,Girelli D,et al.Selenium status,fatty acids,vitamins A and E,and aging:the Nove Study[J].Am J Clin Nutr,1994,60:510-517.
收稿日期：1998-07-05, 百拇医药
单位：华西医科大学基础医学院 物理教研室，四川 成都 610044
关键词：超氧化物歧化酶；自由基；云南花粉田七口服液；超氧阴离子自由基
中国医学物理学杂志990218 摘要：本研究采用SOD微量快速测定法，报道了云南花粉田七口服液(YunNan Pollen Tienchi Oral Liquid,简称YN-PTOL)对30只(12～14)月龄的昆明种小白鼠红细胞中SOD活性影响及其作用机制。研究结果表明，灌胃云南花粉田七口服液的试验组动物，其红细胞SOD活性分别与对照组和空白组比较，其中试验组红细胞中SOD活性(329.90±59.76 u/ml)与相应对照组(259.90±122.08)u/ml比较差别不明显(P>0.05)，但与相应空白组(151.06±67.22)u/ml比较，差别却有显著性意义(P<0.0005)。这提示，在本疗程和试验剂量内，YN-PTOL能有效提高抗氧化酶SOD活性，这不仅对老年动物体内氧化损伤具有防御作用，而且对机体的延年益寿具有重要意义。
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中图分类号：Q6
文献标识码：A
文章编号：1005-202X(1999)02-0108-02
Study on the effect of YunNan Pollen Tienchi Oral
Liquid on the superoxide dismutase in red blood cells
CHEN You-qin,HU Xin-min,LIU Hong-lian,LI Yi-gui,XIN Hao-yang
(Department of Physics of Basic Medical College,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610044,China)
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Abstract:In this study,the activity of superoxide dismutase(SOD)in red blood cells(RBC) was determined.The effect of YN-PTOL on the activity of SOD in RBC was reported.The following action of the medical were observed:The amount of SOD can be highly increased in the blood.SOD activities in oral liquid group (329.90±59.76 u/ml，P<0.0005) and vitamin E group(259.90±122.08 u/ml,P<0.025) were significantly higher than those in refined sugar group (151.10±67.22 u/ml)，but no significant difference between oral liquid group and vitamin E group(P>0.05).These results suggested that the decrease of SOD activities with age may be an important factor of cellular aging.The study showed that YN-PTOL possessed strong ability for increasing activity of SOD.The effect is important for antioxidation and antiaging.
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Key words:superoxide dismutase;free radical;YunNan Pollen Tiendni Oral liquid;superoxide anion radical
自1856后Garnab[1]提出衰老的自由基学说(Free radical theory of aging)以来，越来越多的实验证实，呼吸着的细胞不断产生的氧自由基及其氧化反应促使着生命系统的衰竭。特别是作为体内衰老自由基启动因子之一的超氧阴离子自由基(superoxide anion radical，简称O-2)水平过剩性增高，是机体衰老的重要指标之一[2]。超氧化物歧化酶(uperoxide dismutase,简称SOD)是特异性清除O-2，防止O-2氧化损伤的大分子自由基清除剂，是抗氧化剂作为寿命决定因子的代表[3]。大多数学者报道认为[4]，随着年龄增长，SOD活性明显下降。因此，要降低或预防自由基氧化作用的致衰老损伤，采取有效方法改善或提高老年机体内SOD活性对于抗氧化、延缓衰老非常关键。为此，采用云南花粉田七口服液作为抗氧化剂对试验动物小白鼠体内SOD活性的影响进行了试验研究，通过对受试动物红细胞中SOD活性检测和分析，取得了有科学价值的研究结论。现将结果报告如下：
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1 材料与方法
1.1 实验动物
健康雄性昆明种小白鼠(12～14月龄)。由华西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物和主要试剂
云南花粉田七口服液(主要成分为云南乔麦花粉、田七和蜂蜜。昆明宏达制药厂，批号：9607021)；维生素E(厦门鱼肝油厂)；邻苯三酚(遵义市第二化工厂)；二甲砷酸钠(德国产品)；其余试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器
岛津UV-260型紫外光分光光度计。
1.4 实验方法
将实验用小白鼠按随机化原则分为三组。A组为试验组；B组为阳性对照组；C组为空白对照组。A组为口服液0.5 ml/只/日；B组为维生素0.5 ml/只/日(10 mg/ml)；C组为0.5 ml(10%的白糖水)/只/日。连续灌胃三十天。进行双眼球摘除取血后，按徐树云[5]的方法制备红细胞SOD抽提液。并按邻苯三酚自氧化法[6]测试和计算SOD活力。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
本实验数据以平均值±标准差(
±SD)表示，采用两样本均数比较的t检验，所有处理显著性水准均取单测a=0.05。2 结果
云南花粉田七口服液对老年小鼠红细胞中SOD活性的影响。实验结果见下表：
SOD activity in RBC of different groups(
±SD) groupN
SOD(u/ml)
, 百拇医药
A(oral liquid)
10
329.90±59.76
B(vitamin E)
10
259.90±122.08
C(refined sugar)
10
151.10±67.22
comparisons of SOD between two groups:
A and B:t=1.629 P>0.05
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B and C:t=2.469 P<0.025
A and C:t=6.287 P<0.0005
由表可知，云南花粉田七口服液和维生素E均使老年小鼠红细胞中SOD活性显著增加，但口服液的作用与维生素E相比，虽SOD活性均值提高70 u/ml，但差别经统计学处理，无显著性意义(P>0.05)。
3 讨论
衰老的自由基理论认为，细胞氧化代谢产生的超氧阴离子自由基(O-2)是引起衰老的原因之一。O-2与组织中的H2O2产生更活泼的*OH，它们可诱发机体内不饱和脂肪酶的一系列脂质过氧化链锁反应，造成生物膜结构和功能损伤外，还可破坏核酸、蛋白质等生物分子，可能成为诱发组织器官老化的重要因素之一，因此，自由基反应与衰老过程有密切关系[7]。在正常生理情况下，SOD能有效清除并阻止O-2引发的自由基链锁反应，维持机体自由基产生和清除间的动态平衡。但是由于各种原因导致自由基产生过多，超越了抗氧化体系的抑制能力和抗氧化体系受到严重损害不足以清除生理水平的自由基时就会出现失衡现象，将引起O-2水平的净增加，导致疾病和衰老。
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有报道认为[8]，SOD是唯一能够特异性消除超氧阴离子自由基生物毒性效应的重要保护酶，它的存在与机体抗衰老、抗炎症、抗辐射、抗肿瘤，抗自身免疫性疾病等有密切关系，是抗氧化剂作为寿命决定因子的代表。任何需氧呼吸的机体如果没有SOD或相当的保护机制就无法延续生命。Cutler[9]等人的研究也证实，寿命越长的动物，其SOD活性的含量越高，研究人员还通过对哺乳动物组织SOD等抗氧化剂水平的研究证实，SOD等抗氧化剂含量与物种寿限呈高度正相关。由此可见，云南花粉田七口服液通过提高机体内源性SOD活性，清除O-2对机体的损伤，减少脂质过氧化物和丙二醛的产生，对于机体延缓衰老保健确有重要价值。
云南花粉田七口服液所以能迅速提高动物红细胞的SOD活性，可能与如下作用相关[10，11]：首先，云南花粉田七口服液中含有丰富的营养物质和多种生物活性物质，它们在生物体内相互协同，共济增效，有效地改善了机体的生理功能，从而有力地促进了组织细胞的新陈代谢，使体内新生细胞增多，SOD活性增强；其次，云南花粉田七口服液中的人参皂甙、酶、生物碱等活性成分，能加快酶蛋白，特别是细胞内SOD酶蛋白的合成，使SOD产生增多，活性增加；第三，云南花粉田七口服液中，本身含有丰富的抗氧化剂成分，是自由基有效清除剂，主要是具有酚羟基团的化合物(黄酮类、生物碱类、维生素类等)，均能直接消除体内的自由基代谢产物或衍生物(LPO或MDA)，这样减少了自由基及其代谢产物对SOD的灭活作用，从而使SOD活性增加；最后，由于衰老机体一系列复杂的生理生化功能改变，使无活性或免疫学性质变化的SOD增多，致使SOD活性明显下降。由于云南花粉田七口服液的延缓衰老作用，使机体生理功能得到调理，特别是无活性或免疫学性质变化的SOD酶活性逐渐修复，使有活性的SOD相应增加。除此之外，还有一些影响SOD酶活性的内源性或外源性因素，有些原因有待于进一步探讨。
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参考文献
[1] Harman D:Free radical theory of aging:the “free radical”diseases[J].Age,1984,7:111.
[2] Knight JA.Diseases related to oxygen-derived free radicals[J].Ann Clin Lab Sci,1995,25:111-126.
[3] Fridovich I.Superoxide dismutases.Adv Enzymol,1974,41:35-97.
[4] Halliwell B.Antioxidant characterization methodology and mechanism[J].Biochem Pharmacol,1995,49:35-97.
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[7] Gutteridge JMC.Biological origin of free radicals,and mechanisms of antioxidant protection[J].Chem Biol Inter.1994,91:133-140.
[8] Gonzalos R.Superoxide dismutase,Catalase,and glutathione peroxide in red cell blood cells from patients with malignant diseases.Cancer Res,198444(9):4137.
, http://www.100md.com
[9] Culter RG.Antioxidant and aging[J].Am J Clin Nutr,1991,53:373S-379S.
[10] Amstad P.The balance between Cu.Zn-Superoxide dismutase and catalase affects the sensitivity of mouse epidermal cells to oxidative stress[J].Biochemistry,1991,30:9305-9313.
[11] Olivier O,Stanzial AM,Girelli D,et al.Selenium status,fatty acids,vitamins A and E,and aging:the Nove Study[J].Am J Clin Nutr,1994,60:510-517.
收稿日期：1998-07-05, 百拇医药