腺病毒载体转染p53基因提高肿瘤放射敏感性的实验研究进展
作者：朱广迎 蔡伟明 徐国镇
单位：100021 北京，中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院放射治疗科
关键词：
中华放射肿瘤学杂志990228 几十年来，许多放射生物学和放射肿瘤学专家致力于寻找提高肿瘤放射敏感性的理想药物，试用了生物还原剂、亲电子化合物、修复抑制剂等诸多药物，均因效果欠佳或毒性大而未能广泛应用于临床[1]。近年来分子生物学迅猛发展，为肿瘤学和放射肿瘤学研究提供了新的线索。癌基因、抗癌基因及细胞内信号传导的研究进一步丰富了放射线治疗肿瘤的理论[2-4]。因此作者综述p53基因转染提高肿瘤放射敏感性的实验研究进展。
1 p53基因与肿瘤放射敏感性
近年来的研究证明，细胞受到射线照射之后所发生的一系列变化都与基因有关[5-7]。射线引起细胞内双链断裂之后，DNA依赖的蛋白激酶(DNA dependent protein kinase, DNA-PK)或共济失调性毛细管扩张症突变基因(mutated in ataxia telangiectasia ，ATM)把信号传递给p53基因，其表达产物为p53蛋白。p53蛋白利用其羧基域直接识别DNA损伤，同时通过反式激活上调另一种抑癌基因WAF1/CIP1(wild-type p53-activated fragment 1/CDK interacting protein 1)，表达产生一种相对分子质量为21×103的蛋白质p21，后者抑制增殖细胞核抗原和多种细胞周期素，如细胞由G1期进入S期所必需的细胞周期素D(cyclin D)、细胞周期素依赖的激酶4(cyclin dependent kinase 4, CDK4)及cyclin E和CDK2，使分裂细胞阻滞于G1期，保证细胞在复制DNA之前有足够的时间修复损伤的DNA。如果细胞DNA损伤未能得到及时修复，则可能p53蛋白会进而下调bcl-2基因和(或)上调bax基因，引起细胞凋亡。野生型p53(wild-type p53,wtp53)基因突变成为突变型p53(mutant-type p53, mtp53)基因之后，则不但诱导凋亡的作用消失，反而抑制凋亡[8]。参与诱导凋亡的还有Apo-1，Fas基因及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)等，参与抑制凋亡的基因还有H-ras，E1b等[9]。
, 百拇医药
多数临床研究证明p53基因与肿瘤放射敏感性有关，如：放射治疗疗效较好的肿瘤(髓母细胞瘤、头颈肿瘤、宫颈癌)p53基因突变提示预后不良[10]；放射敏感的肿瘤(精原细胞瘤，神经母细胞瘤)p53突变率低；神经系统中放射抗拒的星形细胞瘤p53突变率高，而其他肿瘤p53突变率低。但也有相反的报告，放射敏感的淋巴瘤和小细胞肺癌p53基因突变相当常见，而放射抗拒的恶性黑色素瘤又缺乏p53突变[11，12]。
大多数实验室研究也证明p53与细胞放射敏感性有关，如表达内源性突变型p53的细胞和野生型p53敲除(knock out)的细胞的放射敏感性下降[10]；转染外源mtp53基因细胞和转染无效p53基因(null p53 transgenic)细胞放射敏感性下降，而外源wtp53基因转染能抑制无wtp53蛋白细胞的生长；p53蛋白被猿猴病毒(Simian virus 40,SV40)大T抗原和HPV-E6基因失活的细胞放射敏感性下降。但也有人报告表达mtp53的细胞放射敏感性增高，转染mtp53的纤维母细胞放射敏感性增高[10，13，14]。
, 百拇医药
上述研究结果有分歧的原因：(1)判断p53对放射敏感性影响的标准不一致。(2)各实验采用的细胞来源不统一。(3)免疫组化法难以完全准确地反映p53蛋白的功能[10]。一般认为wtp53蛋白半衰期仅6～20分钟，mtp53蛋白半衰期长达数小时。免疫组化阴性提示细胞内p53基因突变，但一些情况下组化阴性时p53蛋白已失去功能，如：p53基因无义或移码突变、转录错误、结构重排以及p53构型改变、不能进入细胞核、降解加快等，而另一些情况下免疫组化阳性时p53蛋白又可能具有一定的功能，如wtp53蛋白积聚或mtp53蛋白保留部分功能[15，16]。
2 p53基因转移的载体
目的基因确定之后，基因转染的另一个重要问题就是选择基因转染的方法。裸鼠DNA直接注射方法简便，缺点是转染范围限于注射部位附近的细胞、缺乏组织靶向性。近来有学者采用金粒携带DNA高速轰击组织，在肝脏和肿瘤组织中表达目的基因，同样也存在类似的缺点[3]。利用载体转染基因是目前基因治疗实验研究中常用的方法，理想的载体应具有：(1)准确的靶向性，即特异地定位于某种细胞以减少副作用。(2)较高的转染效率。(3)外源基因表达强度和时限的可控性。(4)高容量，即可携带大片断的目的基因。(5)无副作用，即无致突变性，无免疫原性，无致病性。目前研究和使用较多的载体是重组腺病毒。它是线状双链DNA病毒，常用的5型腺病毒早期转录区有6个独立区域：E1A，E1B，E2A，E2B，E3，E4。E1A和E1B分别位于基因组5'侧1.3～4.5基因图单位和4.6～11.1基因图单位处，其完整性是复制的必需条件，重组腺病毒可缺失E1，E3或E4区。最近，有人构建了缺失除内末端重复和包装序列以外全部其他序列的腺病毒载体，大大提高了外源基因容量[17]。 腺病毒载体的优点是：(1)基因组为36 kb，可插入较大的外源基因。(2)滴度高,大于1×1011 cfu/mL(colony-forming unit,cfu)。(3)转染效率高。(4)宿主范围广，除造血干细胞外，少量腺病毒载体转染其他组织均可得到有效表达。缺点是：(1)缺乏靶向性。(2)不能整合入宿主DNA，外源基因表达期限短。(3)存在免疫反应和细胞毒作用。这主要是由于重组腺病毒中存在少量完整病毒基因，其低水平表达产生的病毒蛋白可引起免疫反应和淋巴细胞介导的细胞毒作用，损害宿主细胞。首次使用腺病毒载体后机体会产生免疫力, 再次使用时机体会利用免疫反应较快清除腺病毒载体,难以达到转染外源基因的目的。 利用放射线局部照射有可能减轻局部免疫反应，延长外源基因表达期限。
, 百拇医药
3 p53基因转染提高肿瘤放射敏感性实验研究
Pirollo等[18]采用腺病毒载体(adenoviral vector,Avl)携带p53基因(Avlp53)， 并用Avl携带β-半乳糖苷酶(AvllacZ)作对照，研究p53基因对细胞放射敏感性的影响，结果表明： p53基因可抑制多种肿瘤的体外生长，如头颈鳞癌细胞系JSQ-3，SQ20B，SCC61以及乳腺癌细胞系SK-BR-3，其 中对乳癌细胞抑制更明显 。 p53抑制细胞生长作用与细胞内p53基因状态有关，内含mtp53或wtp53缺失肿瘤细胞受抑制明显，而含wtp53的人纤维母细胞则不受抑制；wtp53转染能提高放射抗拒的头颈鳞癌细胞系JSQ-3的放射敏感性，这种效应具有时间和重组病毒感染剂量依赖性，1次20感染复数(multiplicity of infection,MOI)的Avlp53感染后36小时放射增敏效应最大。头颈鳞癌细胞系JSQ-3接种裸鼠,待种植肿瘤体积长至12 mm3时， 一次性注射2.5×108～1.5×109 噬菌斑形成单位(phagemid formation unit, PFU) 的Avlp53，36～48小时后开始照射γ线2.5Gy,隔天1次，总剂量20Gy，实验组开始照射后 42天至65天肿瘤全部消失，观察5个月未见复发，而单纯Avlp53 局部注射组肿瘤持续生长或缩小至50%后又生长，单纯照射后早期肿瘤缩小，但照射5周后又复发； 病理切片也显示p53加照射组肿瘤放射反应明显重于单纯照射组或单纯基因转染组。
, 百拇医药
Xu等[19]利用转铁蛋白脂质体转染wtp53,发现被转染的细胞内有大量的p53 蛋白表达，并能消除细胞内mtp53效应，提高放射抗拒性JSQ-3细胞放射敏感性，1×105细胞内导入3 μg质粒可以把D10(使细胞存活率下降到10%所需的剂量) 由(6.36±0. 54)Gy降至(4.13±0.06)Gy，P<0.01，接近于放射敏感的纤维母细胞系H500细胞，其D10为(4.5±0.05)Gy。
Gallardo 等[20]着重研究了p53基因缺失的卵巢癌细胞系接受腺病毒(adenovirus，AdV)介导wtp53基因转染后的放射敏感性改变。体外实验发现MOI为10∶1的AdVp53感染48小时后，几乎所有细胞均表达p53蛋白，每隔 48小时计数细胞，7天后转染wtp53的细胞仅约为对照组的1/3，说明wtp53转染有一定的抑制肿瘤细胞生长作用；照射2Gy或4Gy后发现转染wtp53的细胞放射敏感性明显高于对照组(P<0.05)。体内实验用5×106 SK-OV-3细胞接种SCID小鼠，4周后肿瘤直径长至0.5～0.6cm时，实验组和对照组分别注射1×108 PFU的AdVp53和AdVLacZ，注射3 天后， 免疫组化p53蛋白染色说明p53转染至50%的肿瘤细胞，照射采用60Co，24Gy，6 次，结果发现单纯照射组和单纯AdVp53转染组肿瘤生长曲线相似，均比AdVLacZ 组和生理盐水组生长缓慢，但没有长期控制，AdVp53加照射组45%肿瘤得以控制，观察50天后无肿瘤复发。
, http://www.100md.com
总之，基因治疗是现代医学的研究热点， 有可能在一定程度上改变人类疾病治疗的历史进程，但目前的基因治疗尚处于婴儿期，在目的基因有效性、 基因转移系统的可控性和靶向性方面还存在许多问题，短期内难以在临床上单独发挥作用，研究与基因治疗有关的综合治疗是一件有意义的工作。
参考文献
[1] 沈瑜.临床放射生物学的现状的未来.国外医学放射医学核医学分册,1997,21(5-6)：217-219.
[2] Levine AJ. Tumor suppressor genes. In:Mendelsohn JM,Howley PM,Israel MA,eds. The molecular basis of cancer. Philadelphia:W.B. Saunders Comp，1995. 86-104.
[3] Roth JA, Cristiano RJ. Gene therapy for cancer: what have we done and where are we going. NCI J, 1997,89(1):21-35.
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[4] Maity A, Kao GD,Muschel RJ, et al . Potential molecular targets for manipulating the radiation response . Int J Radiat Oncol Biol Phys, 1997,37(3):639-653.
[5] Yarnold J. Molecular aspects of cellular response to radiotherapy. Radiother Oncol, 1997,44(1):1-7.
[6] Kagawa S, Fujiwara T, Hizuta A ,et al. p53 expression overcomes p21 WAF1/CIP1 mediated G1 arrest and induces apoptosis in human cancer cells. Oncogene, 1997,15(16):1903-1909.
, 百拇医药
[7] Mcilwrath AJ, Vasey DA, Ross GM , et al. Cell cycle arrests and radiosensitivity of human tumor cell lines dependence on wild- type p53 for radiosensitivity. Cancer Res, 1994,54(14):3718-3722.
[8] Lowe SW, Bodis S, Mcclatchey A ,et al. p53 status and the efficacy of cancer therapy in vivo. Science, 1994,266(5186):807-810.
[9] 王凤玮,梁克,沈瑜,等.凋亡与放射治疗.中华放射肿瘤学杂志,1997,6(3)： 192-194.
[10] Bistow RG, Benchimol S, Hill RP. The p53 gene as a modifier ofintrinsic radiosensitivity:implications for radiotherapy. Radiother Oncol, 1996,40(3):197-223.
, 百拇医药
[11] Gupta RK, Patel K, Bodmer WF ,et al. Mutation of p53 in primary biopsy material and cell lines from Hodgikin's disease. Proc Natl Acad Sci USA, 1993,90(71):2817-2821.
[12] Bae I, Smith ML,Sheikh MS, et al. An abnormality in the p53 pathway following γ-irradition in many wild-type p53 human melanoma lines. Cancer Res, 1996,56(4):840-847.
[13] Zlzer F, Hillebrandt S, Streffer C. Radiation induced G1 block and p53 status in six human cell lines. Radiother Oncol, 1995, 37(1):20-28.
, http://www.100md.com
[14] Kawashima K, Mihara K, Usulc J, et al. Transfected mutant p53 gene increase X-ray-induced cell killing and mutation in human fibroblasts immortalized with 4-nitro-quinoline 1-oxide but dose not induce neoplastic transformation of the cells. Int J Cancer ,1995,61(1):76-79.
[15] Macgeoch C, Barnes DM, Newton JA ,et al . p53 protein detected by immuno-histochemical staining is not always mutant. Dis Markers, 1993,11(2):239-250.
, 百拇医药 [16] Docard M, Cherillard S, Villaudy J, et al. Different p53 mutations produce distinct effects on the ability of colon carcinoma cells to become blocked at G1/S boundary after irradiation. Oncogene, 1996, 12(4):875-882.
[17] Fisher KJ, Choi H, Burda J. Recombinant adenovirus deleted of all viral genes for gene therapy of cystic fibrosis.Virology, 1996,217(1):11-12.
[18] Pirollo KF,Hao ZM,Rait A, et al. p53 mediated sensitization of squamous cell carcinoma of the head and neck to radiotherapy. Oncogene, 1997,14(14):1735-1746.
, 百拇医药
[19] Xu L, Pirollo KF, Chang EH. Transferrin-liposome-mediated p53 sensitization of squamous cell carcinoma of the head and neck to radiation in vitro. Hum Gene Ther, 1997,8(4):467-475.
[20] Gallardo D. Adenovirus-based transfer of wild-type p53 gene increase ovarian tumor radiosensitivity. Cancer Res, 1996,56(21):4891-4893.
(收稿：1998-06-17 修回：1998-07-20), 百拇医药
单位：100021 北京，中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院放射治疗科
关键词：
中华放射肿瘤学杂志990228 几十年来，许多放射生物学和放射肿瘤学专家致力于寻找提高肿瘤放射敏感性的理想药物，试用了生物还原剂、亲电子化合物、修复抑制剂等诸多药物，均因效果欠佳或毒性大而未能广泛应用于临床[1]。近年来分子生物学迅猛发展，为肿瘤学和放射肿瘤学研究提供了新的线索。癌基因、抗癌基因及细胞内信号传导的研究进一步丰富了放射线治疗肿瘤的理论[2-4]。因此作者综述p53基因转染提高肿瘤放射敏感性的实验研究进展。
1 p53基因与肿瘤放射敏感性
近年来的研究证明，细胞受到射线照射之后所发生的一系列变化都与基因有关[5-7]。射线引起细胞内双链断裂之后，DNA依赖的蛋白激酶(DNA dependent protein kinase, DNA-PK)或共济失调性毛细管扩张症突变基因(mutated in ataxia telangiectasia ，ATM)把信号传递给p53基因，其表达产物为p53蛋白。p53蛋白利用其羧基域直接识别DNA损伤，同时通过反式激活上调另一种抑癌基因WAF1/CIP1(wild-type p53-activated fragment 1/CDK interacting protein 1)，表达产生一种相对分子质量为21×103的蛋白质p21，后者抑制增殖细胞核抗原和多种细胞周期素，如细胞由G1期进入S期所必需的细胞周期素D(cyclin D)、细胞周期素依赖的激酶4(cyclin dependent kinase 4, CDK4)及cyclin E和CDK2，使分裂细胞阻滞于G1期，保证细胞在复制DNA之前有足够的时间修复损伤的DNA。如果细胞DNA损伤未能得到及时修复，则可能p53蛋白会进而下调bcl-2基因和(或)上调bax基因，引起细胞凋亡。野生型p53(wild-type p53,wtp53)基因突变成为突变型p53(mutant-type p53, mtp53)基因之后，则不但诱导凋亡的作用消失，反而抑制凋亡[8]。参与诱导凋亡的还有Apo-1，Fas基因及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)等，参与抑制凋亡的基因还有H-ras，E1b等[9]。
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多数临床研究证明p53基因与肿瘤放射敏感性有关，如：放射治疗疗效较好的肿瘤(髓母细胞瘤、头颈肿瘤、宫颈癌)p53基因突变提示预后不良[10]；放射敏感的肿瘤(精原细胞瘤，神经母细胞瘤)p53突变率低；神经系统中放射抗拒的星形细胞瘤p53突变率高，而其他肿瘤p53突变率低。但也有相反的报告，放射敏感的淋巴瘤和小细胞肺癌p53基因突变相当常见，而放射抗拒的恶性黑色素瘤又缺乏p53突变[11，12]。
大多数实验室研究也证明p53与细胞放射敏感性有关，如表达内源性突变型p53的细胞和野生型p53敲除(knock out)的细胞的放射敏感性下降[10]；转染外源mtp53基因细胞和转染无效p53基因(null p53 transgenic)细胞放射敏感性下降，而外源wtp53基因转染能抑制无wtp53蛋白细胞的生长；p53蛋白被猿猴病毒(Simian virus 40,SV40)大T抗原和HPV-E6基因失活的细胞放射敏感性下降。但也有人报告表达mtp53的细胞放射敏感性增高，转染mtp53的纤维母细胞放射敏感性增高[10，13，14]。
, 百拇医药
上述研究结果有分歧的原因：(1)判断p53对放射敏感性影响的标准不一致。(2)各实验采用的细胞来源不统一。(3)免疫组化法难以完全准确地反映p53蛋白的功能[10]。一般认为wtp53蛋白半衰期仅6～20分钟，mtp53蛋白半衰期长达数小时。免疫组化阴性提示细胞内p53基因突变，但一些情况下组化阴性时p53蛋白已失去功能，如：p53基因无义或移码突变、转录错误、结构重排以及p53构型改变、不能进入细胞核、降解加快等，而另一些情况下免疫组化阳性时p53蛋白又可能具有一定的功能，如wtp53蛋白积聚或mtp53蛋白保留部分功能[15，16]。
2 p53基因转移的载体
目的基因确定之后，基因转染的另一个重要问题就是选择基因转染的方法。裸鼠DNA直接注射方法简便，缺点是转染范围限于注射部位附近的细胞、缺乏组织靶向性。近来有学者采用金粒携带DNA高速轰击组织，在肝脏和肿瘤组织中表达目的基因，同样也存在类似的缺点[3]。利用载体转染基因是目前基因治疗实验研究中常用的方法，理想的载体应具有：(1)准确的靶向性，即特异地定位于某种细胞以减少副作用。(2)较高的转染效率。(3)外源基因表达强度和时限的可控性。(4)高容量，即可携带大片断的目的基因。(5)无副作用，即无致突变性，无免疫原性，无致病性。目前研究和使用较多的载体是重组腺病毒。它是线状双链DNA病毒，常用的5型腺病毒早期转录区有6个独立区域：E1A，E1B，E2A，E2B，E3，E4。E1A和E1B分别位于基因组5'侧1.3～4.5基因图单位和4.6～11.1基因图单位处，其完整性是复制的必需条件，重组腺病毒可缺失E1，E3或E4区。最近，有人构建了缺失除内末端重复和包装序列以外全部其他序列的腺病毒载体，大大提高了外源基因容量[17]。 腺病毒载体的优点是：(1)基因组为36 kb，可插入较大的外源基因。(2)滴度高,大于1×1011 cfu/mL(colony-forming unit,cfu)。(3)转染效率高。(4)宿主范围广，除造血干细胞外，少量腺病毒载体转染其他组织均可得到有效表达。缺点是：(1)缺乏靶向性。(2)不能整合入宿主DNA，外源基因表达期限短。(3)存在免疫反应和细胞毒作用。这主要是由于重组腺病毒中存在少量完整病毒基因，其低水平表达产生的病毒蛋白可引起免疫反应和淋巴细胞介导的细胞毒作用，损害宿主细胞。首次使用腺病毒载体后机体会产生免疫力, 再次使用时机体会利用免疫反应较快清除腺病毒载体,难以达到转染外源基因的目的。 利用放射线局部照射有可能减轻局部免疫反应，延长外源基因表达期限。
, 百拇医药
3 p53基因转染提高肿瘤放射敏感性实验研究
Pirollo等[18]采用腺病毒载体(adenoviral vector,Avl)携带p53基因(Avlp53)， 并用Avl携带β-半乳糖苷酶(AvllacZ)作对照，研究p53基因对细胞放射敏感性的影响，结果表明： p53基因可抑制多种肿瘤的体外生长，如头颈鳞癌细胞系JSQ-3，SQ20B，SCC61以及乳腺癌细胞系SK-BR-3，其 中对乳癌细胞抑制更明显 。 p53抑制细胞生长作用与细胞内p53基因状态有关，内含mtp53或wtp53缺失肿瘤细胞受抑制明显，而含wtp53的人纤维母细胞则不受抑制；wtp53转染能提高放射抗拒的头颈鳞癌细胞系JSQ-3的放射敏感性，这种效应具有时间和重组病毒感染剂量依赖性，1次20感染复数(multiplicity of infection,MOI)的Avlp53感染后36小时放射增敏效应最大。头颈鳞癌细胞系JSQ-3接种裸鼠,待种植肿瘤体积长至12 mm3时， 一次性注射2.5×108～1.5×109 噬菌斑形成单位(phagemid formation unit, PFU) 的Avlp53，36～48小时后开始照射γ线2.5Gy,隔天1次，总剂量20Gy，实验组开始照射后 42天至65天肿瘤全部消失，观察5个月未见复发，而单纯Avlp53 局部注射组肿瘤持续生长或缩小至50%后又生长，单纯照射后早期肿瘤缩小，但照射5周后又复发； 病理切片也显示p53加照射组肿瘤放射反应明显重于单纯照射组或单纯基因转染组。
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Xu等[19]利用转铁蛋白脂质体转染wtp53,发现被转染的细胞内有大量的p53 蛋白表达，并能消除细胞内mtp53效应，提高放射抗拒性JSQ-3细胞放射敏感性，1×105细胞内导入3 μg质粒可以把D10(使细胞存活率下降到10%所需的剂量) 由(6.36±0. 54)Gy降至(4.13±0.06)Gy，P<0.01，接近于放射敏感的纤维母细胞系H500细胞，其D10为(4.5±0.05)Gy。
Gallardo 等[20]着重研究了p53基因缺失的卵巢癌细胞系接受腺病毒(adenovirus，AdV)介导wtp53基因转染后的放射敏感性改变。体外实验发现MOI为10∶1的AdVp53感染48小时后，几乎所有细胞均表达p53蛋白，每隔 48小时计数细胞，7天后转染wtp53的细胞仅约为对照组的1/3，说明wtp53转染有一定的抑制肿瘤细胞生长作用；照射2Gy或4Gy后发现转染wtp53的细胞放射敏感性明显高于对照组(P<0.05)。体内实验用5×106 SK-OV-3细胞接种SCID小鼠，4周后肿瘤直径长至0.5～0.6cm时，实验组和对照组分别注射1×108 PFU的AdVp53和AdVLacZ，注射3 天后， 免疫组化p53蛋白染色说明p53转染至50%的肿瘤细胞，照射采用60Co，24Gy，6 次，结果发现单纯照射组和单纯AdVp53转染组肿瘤生长曲线相似，均比AdVLacZ 组和生理盐水组生长缓慢，但没有长期控制，AdVp53加照射组45%肿瘤得以控制，观察50天后无肿瘤复发。
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总之，基因治疗是现代医学的研究热点， 有可能在一定程度上改变人类疾病治疗的历史进程，但目前的基因治疗尚处于婴儿期，在目的基因有效性、 基因转移系统的可控性和靶向性方面还存在许多问题，短期内难以在临床上单独发挥作用，研究与基因治疗有关的综合治疗是一件有意义的工作。
参考文献
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[9] 王凤玮,梁克,沈瑜,等.凋亡与放射治疗.中华放射肿瘤学杂志,1997,6(3)： 192-194.
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[14] Kawashima K, Mihara K, Usulc J, et al. Transfected mutant p53 gene increase X-ray-induced cell killing and mutation in human fibroblasts immortalized with 4-nitro-quinoline 1-oxide but dose not induce neoplastic transformation of the cells. Int J Cancer ,1995,61(1):76-79.
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[20] Gallardo D. Adenovirus-based transfer of wild-type p53 gene increase ovarian tumor radiosensitivity. Cancer Res, 1996,56(21):4891-4893.
(收稿：1998-06-17 修回：1998-07-20), 百拇医药