人牙周膜细胞中不同细胞表现型的表达
作者：袁志萍 刘宏伟 欧龙 马良
单位：100853 北京，中国人民解放军总医院口腔科(袁志萍、刘宏伟、欧龙、马良)
关键词：
中华口腔医学杂志990121 本项实验利用细胞克隆技术，以细胞的牙骨质附着蛋白(cementum-derived attachment protein,CAP)结合力、碱性磷酸酶(ALP)表达率和细胞体外钙化能力为指标，对人牙周膜细胞进行了克隆化和分类。
1.材料与方法：采用稀释法对5颗青年男性正常前磨牙PDL细胞在96孔细胞培养板上进行细胞克隆化。培养液为15%小牛血清的α-MEM。在24孔板上传代扩增后，分别进行以下实验。①用0.06%速紫盐B和0.1%奈酚AS-MX进行克隆细胞ALP染色并计算其阳
国家自然科学基金(39770798)和国家教委留学回国人员科研启动基金资助课题 性率。②用含有β-磷酸甘油(10 mmol/L)、地塞米松(10-8 mol/L)、抗坏血酸(50 mg/L)的 α-MEM培养28天，饱和茜红素溶液染色观察钙化情况。③采用125Ⅰ标记的CAP作用于克隆细胞，通过放射性测定以检测CAP结合力(cmp)。
2.结果：共观察到669个克隆细胞，获得的生长克隆细胞占43.6%。38%的生长克隆细胞具有钙化能力。根据细胞钙化能力、CAP结合力及ALP表达的不同，将细胞分为5组。钙化克隆中有2种钙化形态，即弥散型钙化(82%)和结节型钙化(18%)。结节型钙化和弥散型钙化的克隆细胞，其CAP结合力分别为3.2±0.36和1.8±0.24，二者间差异有显著性(P<0.01)；其ALP表达率则分别为21%±3.2和83%±5.8，差异亦有显著性(P<0.01)。
3.讨论：牙周膜细胞中具有生长分化潜力的单个细胞可在体外生长并被传代，称为前体细胞(progenitors)，约占接种细胞的43%。它是牙周组织改建和细胞更新的细胞来源。CAP是从牙骨质中提取的一种生物活性蛋白，分子量为55 000，对牙周膜细胞和具有钙化能力的细胞有较强的生物趋化作用。实验中结节型钙化的细胞与弥散型钙化的细胞在CAP结合力和ALP表达率上的不同，提示2种钙化细胞的生物学特性不同。我们的实验结果显示了PDL细胞的多样性和复杂的生物学的功能，对于研究如何促进牙周组织再生有启发作用。
(收稿：1997-12-20 修回：1998-06-24), http://www.100md.com
单位：100853 北京，中国人民解放军总医院口腔科(袁志萍、刘宏伟、欧龙、马良)
关键词：
中华口腔医学杂志990121 本项实验利用细胞克隆技术，以细胞的牙骨质附着蛋白(cementum-derived attachment protein,CAP)结合力、碱性磷酸酶(ALP)表达率和细胞体外钙化能力为指标，对人牙周膜细胞进行了克隆化和分类。
1.材料与方法：采用稀释法对5颗青年男性正常前磨牙PDL细胞在96孔细胞培养板上进行细胞克隆化。培养液为15%小牛血清的α-MEM。在24孔板上传代扩增后，分别进行以下实验。①用0.06%速紫盐B和0.1%奈酚AS-MX进行克隆细胞ALP染色并计算其阳
国家自然科学基金(39770798)和国家教委留学回国人员科研启动基金资助课题 性率。②用含有β-磷酸甘油(10 mmol/L)、地塞米松(10-8 mol/L)、抗坏血酸(50 mg/L)的 α-MEM培养28天，饱和茜红素溶液染色观察钙化情况。③采用125Ⅰ标记的CAP作用于克隆细胞，通过放射性测定以检测CAP结合力(cmp)。
2.结果：共观察到669个克隆细胞，获得的生长克隆细胞占43.6%。38%的生长克隆细胞具有钙化能力。根据细胞钙化能力、CAP结合力及ALP表达的不同，将细胞分为5组。钙化克隆中有2种钙化形态，即弥散型钙化(82%)和结节型钙化(18%)。结节型钙化和弥散型钙化的克隆细胞，其CAP结合力分别为3.2±0.36和1.8±0.24，二者间差异有显著性(P<0.01)；其ALP表达率则分别为21%±3.2和83%±5.8，差异亦有显著性(P<0.01)。
3.讨论：牙周膜细胞中具有生长分化潜力的单个细胞可在体外生长并被传代，称为前体细胞(progenitors)，约占接种细胞的43%。它是牙周组织改建和细胞更新的细胞来源。CAP是从牙骨质中提取的一种生物活性蛋白，分子量为55 000，对牙周膜细胞和具有钙化能力的细胞有较强的生物趋化作用。实验中结节型钙化的细胞与弥散型钙化的细胞在CAP结合力和ALP表达率上的不同，提示2种钙化细胞的生物学特性不同。我们的实验结果显示了PDL细胞的多样性和复杂的生物学的功能，对于研究如何促进牙周组织再生有启发作用。
(收稿：1997-12-20 修回：1998-06-24), http://www.100md.com