牙周炎患者唾液一氧化氮的含量及其与牙周病指标相关性的研究
作者：陈桂珍 孙伟莲
单位：浙江医科大学附属第二医院 310009
关键词：一氧化氮；亚硝酸盐；唾液；牙周炎
华西口腔医学杂志990215 摘要 目的:研究牙周炎患者唾液一氧化氮(NO)的含量,及其与牙周病各临床指标的相关性。方法:选择成人牙周炎患者23例为实验组,健康人27例为对照组。记录牙周炎患者的牙龈出血指数(GBI)、牙周袋深度(PD)和附着丧失量(AL)。NO的含量由检测唾液亚硝酸盐的含量来代表。测定实验组和对照组所有病例的唾液NO的含量。结果:对照组唾液NO的含量为28.806±6.604 μm/L,男女间无显著性差异。实验组唾液NO的含量为55.361±13.319 μmol/L,明显高于对照组。牙周炎患者唾液NO的含量与PD、AL间存在明显的正相关。结论:牙周炎患者唾液NO的含量显著高于健康人,并与牙周炎的严重程度有关。
, http://www.100md.com
The Investigation on Nitric Oxide Levels in Saliva and Their Relationship
with the Severity of Periodontitis
Chen Guizhen, Sun Weilian
the Second Affiliated Hospital of Zhejiang Medical University
Abstract Objective: To study nitric oxide levels in saliva of patients with periodontitis and the relationship between nitric oxide levels and the severity of periodontitis. Methods: Samples of saliva from 23 adult subjects with periodontitis and 27 healthy control subjects were collected at their first appointment. Data of gingival bleeding index (GBI), pocket depth (PD) and attachment level (AL) were recorded. Salivary nitrite was detected with Greiss method, which stood for the content of nitric oxide (NO). Results: It was found that NO in saliva of patients with periodontitis were significiantly higher than that in saliva of healthy individuals (P<0.01). The levels of NO were55.361±13.319 μmol/L and 28.806±6.604 μm/L in saliva with periodontitis and control respectively. Significant relationship was found between AL and salivary NO level (P<0.02) and between PD and salivary NO level (P<0.05). Conclusion: The change of salivary NO level is related with periodontitis.
, 百拇医药
Key words: nitric oxide nitrite saliva periodontitis
一氧化氮(nitric oxide, NO)是一种毒性极强、不稳定、易扩散、半衰期极短(3～5秒)、化学性质极为活泼的自由基,在体内具有广泛的生物学特征,参与免疫、血管、神经、骨骼、消化等多种系统的生理功能调节和疾病的发生发展[1]。本文对23例成人牙周炎患者唾液NO含量及其与牙周病指标相关性进行研究,现报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验对象
实验组为成人牙周炎患者23例,男10例,女13例,年龄19～66岁。所有患者均无系统性疾病,3个月内未接受过牙周治疗及服用过抗生素、止痛药和免疫抑制剂。对照组27例,为我院体检的健康者,无牙周、粘膜和唾液腺等方面的疾病,男13例,女14例,年龄16～56岁。实验组和对照组年龄无显著性差异(P>0.05)。
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1.2 标本采集
清除受检者口腔牙面软垢和食物残渣,用洗必太漱口水含漱,再用双蒸水含漱2次。收集受检者自然分泌的非刺激性全唾液1 ml,置-30℃冰箱中保存。1周内测试。
记录实验组患者的牙龈出血指数(gingival bleeding index,GBI)、牙周袋深度(pocket depth,PD)和附着丧失量(attachment level,AL)。
1.3 标本处理
将唾液置Enppdorf管内,低温离心(5000 r/min)15分,取上清用于检测。
1.4 NO-2检测
按一氧化氮(酶法)试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)说明书操作。每个标本均设复管检测。每次检测均用标准液制作6个检测点的回归方程,并以此确定标本中NO-2的含量。
, 百拇医药
1.5 统计处理
统计结果用t检验及相关性分析。
2 结 果
2.1 对照组唾液NO含量及男女比较
对照组27例唾液NO的含量为28.806±6.604 μmol/L,13例男性含量为29.349±6.063 μmol/L,14例女性含量为28.302±6.914 μmol/L,二者比较无显著性差异(P>0.05)。
2.2 实验组和对照组唾液NO含量的比较
实验组唾液NO的含量为55.361±13.319 μmol/L,与对照组比较有显著性差异(t=0.1360,P<0.01)。
2.3 牙周炎患者唾液NO含量与GBI、PD、AL的相关性
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实验组每位患者检查牙位3～6个,共检查102个牙位。51个牙位的PD≤4 mm,31个牙位的PD≤6 mm,20个牙位的PD>6 mm,5个牙位的AL≤2 mm,39个牙位的AL≤5 mm。58个牙位的AL>5 mm。牙周炎患者的GBI、PD、AL及其唾液NO含量的相关系数见表1。由表1可见牙周炎患者PD、AL均与唾液NO含量呈显著正相关(P<0.05,P<0.02)。
表1 牙周炎患者各项临床指标及其与唾液NO的线性相关系数 指标
最小值
最大值
±s
相关系数
GBI
2
, http://www.100md.com
4
3.0231±0.6571
0.093
PD(mm)
1
9
3.4983±1.4078
0.457
AL(mm)
2
10
5.2986±1.6863
0.502
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3 讨 论
体内的NO是由L-精氨酸(L-Arg)在一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的催化下生成L-瓜氨酸时释放的。由于NO是一种含不成对电子的气体,具有自由基结构,生物半衰期极短仅3～5秒,很快会被氧化为NO-2和NO-3,所以检测组织或体液内的NO含量,可以通过测定NO的代谢终末产物NO-2含量间接得知。
Bodis等[2]认为唾液中NO来源可能有腺体内神经末梢,唾液腺腺泡细胞,唾液腺导管细胞,唾液腺肌上皮细胞,腺体内炎症细胞(如巨噬细胞),口腔微生物菌群,等。然而唾液中NO的明确来源、调控机制至今还没有定论。当刺激口腔味觉感受器时(如饮用柠檬汁),唾液中NO含量会呈现先低后高的规律[2]。本研究为了更准确地反映牙周炎患者唾液NO的含量,收集的标本是非刺激性全唾液。同时,本研究为尽量减少口腔内食物残渣和牙面软垢带来的硝酸盐、亚硝酸盐和口腔内细菌产生的NO所造成的对唾液NO检测结果的影响,故在收集唾液前认真清洁口腔、消毒口腔。
, http://www.100md.com
成人牙周炎患者龈上、龈下存在的菌斑,会破坏细胞间质及激活机体的炎症反应和免疫反应,促使机体产生多种细胞因子,而且菌斑还产生细菌内毒素(LPS)。已证实干扰素γ(IFN-γ)与干扰素α(IFN-α),白介素2(IL-2)或LPS可协同巨噬细胞高水平地表达诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,INOS),激活NOS增加合成NO的量[3]。大量的研究证明,NO作为活化巨噬细胞产生的一种细胞毒效应分子,能介导巨噬细胞抑制和杀伤病毒[4]、细菌[5]、真菌[6]。近年有实验表明,缺损NOS基因的小鼠更易发生感染[7,8],这表明NO是机体抗微生物防御体系中的一个重要因子,因此可推测当患牙周炎时,唾液NO分泌会增加。本研究实验组唾液NO的含量就是高于对照组。
AL和PD为诊治牙周炎和判断预后的重要指标,可反映牙周炎的严重程度。本文结果显示唾液NO含量与PD和AL呈显著正相关,这表明随着牙周炎的加重,唾液NO含量会升高。但是牙周炎促使唾液含量增高的调控机理如何,尚需进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1 Anggard E. Nitric oxide: mediator, murderer and medicine. Lancet, 1994, 343(8907):1199～1206
2B odis S, Haregewoin A. Evidence for the release and possible neural regulation of nitric oxide in human saliva. Biochem Biophys Res Commun, 1993, 194(1):347～350
3 Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB J, 1992, 6(12):3051～3064
, http://www.100md.com 4 Karupiah G, Xie QW, Buller RWL, et al. Inhibition of viral replication by interferon-induced nitric oxide synthase. Science, 1993, 261(5127):1445～1448
5 Denis M. Interferon-gamna-treated murine macrophages inhibit growth of tubercle bacilli via the generation of reactive nitrogen intermediated. Cell Immunol, 1991, 132(1):150～157
6 Granger DL, Hibbs JB Jr, Perfect JR, et al. Metabolic fate of L-Arginine in relation to microbiostatic capability of murine macrophages. J Clin Invest, 1990, 85(1):264～273
, http://www.100md.com
7 MacMicking JD, Nathan C, Hom G, et al. Altered responses to bacterial infecion and endotoric shock in mice lacking inducible nitric oxide synthase. Cell, 1995, 81(4):641～650
8 Wei XQ, Charles IG, Smith A, et al. Altered immune responses in mice lacking inducible nitric oxide synthase. Nature, 1995, 375(6530):408～411
(1998-08-21收稿), 百拇医药
单位：浙江医科大学附属第二医院 310009
关键词：一氧化氮；亚硝酸盐；唾液；牙周炎
华西口腔医学杂志990215 摘要 目的:研究牙周炎患者唾液一氧化氮(NO)的含量,及其与牙周病各临床指标的相关性。方法:选择成人牙周炎患者23例为实验组,健康人27例为对照组。记录牙周炎患者的牙龈出血指数(GBI)、牙周袋深度(PD)和附着丧失量(AL)。NO的含量由检测唾液亚硝酸盐的含量来代表。测定实验组和对照组所有病例的唾液NO的含量。结果:对照组唾液NO的含量为28.806±6.604 μm/L,男女间无显著性差异。实验组唾液NO的含量为55.361±13.319 μmol/L,明显高于对照组。牙周炎患者唾液NO的含量与PD、AL间存在明显的正相关。结论:牙周炎患者唾液NO的含量显著高于健康人,并与牙周炎的严重程度有关。
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The Investigation on Nitric Oxide Levels in Saliva and Their Relationship
with the Severity of Periodontitis
Chen Guizhen, Sun Weilian
the Second Affiliated Hospital of Zhejiang Medical University
Abstract Objective: To study nitric oxide levels in saliva of patients with periodontitis and the relationship between nitric oxide levels and the severity of periodontitis. Methods: Samples of saliva from 23 adult subjects with periodontitis and 27 healthy control subjects were collected at their first appointment. Data of gingival bleeding index (GBI), pocket depth (PD) and attachment level (AL) were recorded. Salivary nitrite was detected with Greiss method, which stood for the content of nitric oxide (NO). Results: It was found that NO in saliva of patients with periodontitis were significiantly higher than that in saliva of healthy individuals (P<0.01). The levels of NO were55.361±13.319 μmol/L and 28.806±6.604 μm/L in saliva with periodontitis and control respectively. Significant relationship was found between AL and salivary NO level (P<0.02) and between PD and salivary NO level (P<0.05). Conclusion: The change of salivary NO level is related with periodontitis.
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Key words: nitric oxide nitrite saliva periodontitis
一氧化氮(nitric oxide, NO)是一种毒性极强、不稳定、易扩散、半衰期极短(3～5秒)、化学性质极为活泼的自由基,在体内具有广泛的生物学特征,参与免疫、血管、神经、骨骼、消化等多种系统的生理功能调节和疾病的发生发展[1]。本文对23例成人牙周炎患者唾液NO含量及其与牙周病指标相关性进行研究,现报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验对象
实验组为成人牙周炎患者23例,男10例,女13例,年龄19～66岁。所有患者均无系统性疾病,3个月内未接受过牙周治疗及服用过抗生素、止痛药和免疫抑制剂。对照组27例,为我院体检的健康者,无牙周、粘膜和唾液腺等方面的疾病,男13例,女14例,年龄16～56岁。实验组和对照组年龄无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com
1.2 标本采集
清除受检者口腔牙面软垢和食物残渣,用洗必太漱口水含漱,再用双蒸水含漱2次。收集受检者自然分泌的非刺激性全唾液1 ml,置-30℃冰箱中保存。1周内测试。
记录实验组患者的牙龈出血指数(gingival bleeding index,GBI)、牙周袋深度(pocket depth,PD)和附着丧失量(attachment level,AL)。
1.3 标本处理
将唾液置Enppdorf管内,低温离心(5000 r/min)15分,取上清用于检测。
1.4 NO-2检测
按一氧化氮(酶法)试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)说明书操作。每个标本均设复管检测。每次检测均用标准液制作6个检测点的回归方程,并以此确定标本中NO-2的含量。
, 百拇医药
1.5 统计处理
统计结果用t检验及相关性分析。
2 结 果
2.1 对照组唾液NO含量及男女比较
对照组27例唾液NO的含量为28.806±6.604 μmol/L,13例男性含量为29.349±6.063 μmol/L,14例女性含量为28.302±6.914 μmol/L,二者比较无显著性差异(P>0.05)。
2.2 实验组和对照组唾液NO含量的比较
实验组唾液NO的含量为55.361±13.319 μmol/L,与对照组比较有显著性差异(t=0.1360,P<0.01)。
2.3 牙周炎患者唾液NO含量与GBI、PD、AL的相关性
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实验组每位患者检查牙位3～6个,共检查102个牙位。51个牙位的PD≤4 mm,31个牙位的PD≤6 mm,20个牙位的PD>6 mm,5个牙位的AL≤2 mm,39个牙位的AL≤5 mm。58个牙位的AL>5 mm。牙周炎患者的GBI、PD、AL及其唾液NO含量的相关系数见表1。由表1可见牙周炎患者PD、AL均与唾液NO含量呈显著正相关(P<0.05,P<0.02)。
表1 牙周炎患者各项临床指标及其与唾液NO的线性相关系数 指标
最小值
最大值
±s相关系数
GBI
2
, http://www.100md.com
4
3.0231±0.6571
0.093
PD(mm)
1
9
3.4983±1.4078
0.457
AL(mm)
2
10
5.2986±1.6863
0.502
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3 讨 论
体内的NO是由L-精氨酸(L-Arg)在一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的催化下生成L-瓜氨酸时释放的。由于NO是一种含不成对电子的气体,具有自由基结构,生物半衰期极短仅3～5秒,很快会被氧化为NO-2和NO-3,所以检测组织或体液内的NO含量,可以通过测定NO的代谢终末产物NO-2含量间接得知。
Bodis等[2]认为唾液中NO来源可能有腺体内神经末梢,唾液腺腺泡细胞,唾液腺导管细胞,唾液腺肌上皮细胞,腺体内炎症细胞(如巨噬细胞),口腔微生物菌群,等。然而唾液中NO的明确来源、调控机制至今还没有定论。当刺激口腔味觉感受器时(如饮用柠檬汁),唾液中NO含量会呈现先低后高的规律[2]。本研究为了更准确地反映牙周炎患者唾液NO的含量,收集的标本是非刺激性全唾液。同时,本研究为尽量减少口腔内食物残渣和牙面软垢带来的硝酸盐、亚硝酸盐和口腔内细菌产生的NO所造成的对唾液NO检测结果的影响,故在收集唾液前认真清洁口腔、消毒口腔。
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成人牙周炎患者龈上、龈下存在的菌斑,会破坏细胞间质及激活机体的炎症反应和免疫反应,促使机体产生多种细胞因子,而且菌斑还产生细菌内毒素(LPS)。已证实干扰素γ(IFN-γ)与干扰素α(IFN-α),白介素2(IL-2)或LPS可协同巨噬细胞高水平地表达诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,INOS),激活NOS增加合成NO的量[3]。大量的研究证明,NO作为活化巨噬细胞产生的一种细胞毒效应分子,能介导巨噬细胞抑制和杀伤病毒[4]、细菌[5]、真菌[6]。近年有实验表明,缺损NOS基因的小鼠更易发生感染[7,8],这表明NO是机体抗微生物防御体系中的一个重要因子,因此可推测当患牙周炎时,唾液NO分泌会增加。本研究实验组唾液NO的含量就是高于对照组。
AL和PD为诊治牙周炎和判断预后的重要指标,可反映牙周炎的严重程度。本文结果显示唾液NO含量与PD和AL呈显著正相关,这表明随着牙周炎的加重,唾液NO含量会升高。但是牙周炎促使唾液含量增高的调控机理如何,尚需进一步研究。
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参考文献
1 Anggard E. Nitric oxide: mediator, murderer and medicine. Lancet, 1994, 343(8907):1199～1206
2B odis S, Haregewoin A. Evidence for the release and possible neural regulation of nitric oxide in human saliva. Biochem Biophys Res Commun, 1993, 194(1):347～350
3 Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB J, 1992, 6(12):3051～3064
, http://www.100md.com 4 Karupiah G, Xie QW, Buller RWL, et al. Inhibition of viral replication by interferon-induced nitric oxide synthase. Science, 1993, 261(5127):1445～1448
5 Denis M. Interferon-gamna-treated murine macrophages inhibit growth of tubercle bacilli via the generation of reactive nitrogen intermediated. Cell Immunol, 1991, 132(1):150～157
6 Granger DL, Hibbs JB Jr, Perfect JR, et al. Metabolic fate of L-Arginine in relation to microbiostatic capability of murine macrophages. J Clin Invest, 1990, 85(1):264～273
, http://www.100md.com
7 MacMicking JD, Nathan C, Hom G, et al. Altered responses to bacterial infecion and endotoric shock in mice lacking inducible nitric oxide synthase. Cell, 1995, 81(4):641～650
8 Wei XQ, Charles IG, Smith A, et al. Altered immune responses in mice lacking inducible nitric oxide synthase. Nature, 1995, 375(6530):408～411
(1998-08-21收稿), 百拇医药