谷胱甘肽S转移酶在转移性肺癌的表达
作者：冯久贤 包国良 董强刚 沙慧芳 李春海
单位：冯久贤 包国良 董强刚 沙慧芳(上海市胸科医院胸部肿瘤研究所(上海200030)；李春海(军事医学科学院)
关键词：肺肿瘤；癌，非小细胞肺；谷胱甘肽S转移酶；肿瘤转移
肿瘤990215
酸性谷胱甘肽S转移酶(GST-π)在大肠癌、胃癌、肺癌、食管癌及乳腺癌中表达较高，并可作为非小细胞肺癌(NSCLC)耐药性标志[1，2]。近来研究表明一些耐药基因在复发转移癌中表达较原发病灶明显增高。本文应用RT-PCR技术检测52例非小细胞肺癌GST-π的表达，探讨其在NSCLC侵袭转移中的作用。
材料和方法
一、临床资料 标本取自本院胸外科手术切除的52例肺癌标本，经病理证实均为NSCLC，其中腺癌36例、鳞癌16例。有20例包括原发癌灶及淋巴结转移灶，其余32例均无淋巴结转移。52例患者中，男性25例，女性27例，年龄42～62岁，平均56.2岁。
, 百拇医药
二、方法 GST-π寡核苷酸引物系美国Sybesyn公司合成。序列如下：P1 CAT GCT GCT GGC AGA TAG，P2 CAT TCA TCA TGT CCA CCA GG。扩增产物为223 bp。β-actin为内对照，序列如下：P1 ATC ATG TTT GAG ACC TTC AAC A，P2 CAT CTC TTG CTC GAA GTC CA。扩增产物为318 bp。
RNA 逆转录及PCR方法 试剂盒及工具酶购自Promega公司和华美公司。取米粒大小组织用匀浆管研碎，采用异硫氰酸胍、酚、氯仿一步法提取组织总RNA，AMV逆转录酶42℃作用60 min合成cDNA第一链，再以此为模板，按PCR试剂盒要求进行PCR扩增，循环参数为94℃变性30 s，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸70 s，30个循环，再72 ℃ 10 min。空白对照在扩增时不加taq DNA聚合酶。
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PCR产物定量 取扩增产物10 μl行2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外光反射箱内照相。扩增条带用图象分析仪(VDS Image Sepstem)检测积分光密度(IOD)，并计算GST-π/β-actin比值(见附图)。
三、统计学方法 χ2检验P<0.05有统计学意义。
结 果
一、GST-π在非小细胞癌定量RT-PCR扩增
根据人GST-π基因序列[3]合成GST-π引物，以肺癌组织的cDNA为模板，特异性扩增223 bp基因片段为阳性表达(见附图)。为了校正组织取材的不均一性及加样量的误差，在PCR扩增中以多数组织中均有表达，或较为稳定的β-actin基因(318 bp)，为内对照来校正GST-π的表达量。扩增结果经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定，正常肺组织无扩增条带。
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附图 淋巴结转移癌GST-π的表达
1～7为淋巴结转移癌，8为正常肺组织，9为耐药细胞株
M为标准分子量DNA
二、GST-π基因在非小细胞癌中的表达
在肺癌转移组，原发灶阳性率为55%(11/20)，淋巴结转移灶阳性率为75%(15/20)，在肺癌未转移组阳性率为25%(8/32)。淋巴结转移癌的阳性表达率与未转移癌相比，P<0.05，有显著性差异。34例阳性标本的IOD值为0.32±1.19，两组标本间无显著性差异。
讨 论
谷胱苷肽S转移酶是一组多功能的药物代谢酶，正常人类GST-π基因位于11号染色体，有7个外显子和6个内含子组成，全长2.8 kb。在正常肺组织中GST-π为低表达，免疫组化标记阴性，而在许多耐药细胞株中可以高表达。在耐药相关基因检测中GST-π是最主要的标志之一[4]。
, 百拇医药
肿瘤的转移是一个由多基因控制多步骤组成的渐变过程。本文通过RT-PCR技术显示转移至淋巴结的肺癌细胞的GST-π基因表达最高，而无淋巴结转移的肺癌细胞则表达低下，表明GST-π基因也参与侵袭转移过程。根据以上实验结果推测肿瘤转移灶与GST-π关系的可能原因：一是GST-π高表达时蛋白激酶亦呈高表达，而蛋白激酶C是一组依赖Ca2+和磷脂同工酶，在跨膜信息传递中与肿瘤的生长密切相关，这样GST-π高表达可能是癌细胞生物学行为进一步恶化的标志。二是由于肿瘤细胞在通过循环系统转移过程中，受到较高浓度的药物“筛选”，导致只有一部分原发或诱导耐药的肿瘤细胞残存，并随血液淋巴循环转移至其它器官而恶性增生。本文结果提示GST-π可能参与侵袭转移过程亦为耐药性的标志。
第一作者简介 冯久贤，男，大学本科，副主任医师。
参 考 文 献
1 冯久贤、王恩忠、李春海等。谷胱苷肽S转移酶在耐药非小细胞肺癌中的表达。中华医学杂志，1996，76：234
, 百拇医药
2 Inave T,Ishida T,Sugio K, et al. Glutathione transferase pi is a powerful indicator in chemotherapy of human lung squamous cell carcinoma.Respiration,1995,62:223
3 Kim WJ,Kakehi Y,Kinoshita H, et al. Expression patterns of multidrug resistence (MDR),multidrug resistence-associated protein (MRP),glutathione transferase-π(GST-π)and DNA topoisopmerase Ⅱ(TopoⅡ)genes in renal cell carcinomas and normal kidney.Urol,1996,156:506
4 李春海.谷胱甙肽S转移酶基因家庭在癌变中的作用.见李春海，郭亚军主编：肿瘤分子生物学研究进展.北京军事医学科学出版社，1996：103
(收稿：1998-03-06 修回：1998-06-02), 百拇医药
单位：冯久贤 包国良 董强刚 沙慧芳(上海市胸科医院胸部肿瘤研究所(上海200030)；李春海(军事医学科学院)
关键词：肺肿瘤；癌，非小细胞肺；谷胱甘肽S转移酶；肿瘤转移
肿瘤990215
酸性谷胱甘肽S转移酶(GST-π)在大肠癌、胃癌、肺癌、食管癌及乳腺癌中表达较高，并可作为非小细胞肺癌(NSCLC)耐药性标志[1，2]。近来研究表明一些耐药基因在复发转移癌中表达较原发病灶明显增高。本文应用RT-PCR技术检测52例非小细胞肺癌GST-π的表达，探讨其在NSCLC侵袭转移中的作用。
材料和方法
一、临床资料 标本取自本院胸外科手术切除的52例肺癌标本，经病理证实均为NSCLC，其中腺癌36例、鳞癌16例。有20例包括原发癌灶及淋巴结转移灶，其余32例均无淋巴结转移。52例患者中，男性25例，女性27例，年龄42～62岁，平均56.2岁。
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二、方法 GST-π寡核苷酸引物系美国Sybesyn公司合成。序列如下：P1 CAT GCT GCT GGC AGA TAG，P2 CAT TCA TCA TGT CCA CCA GG。扩增产物为223 bp。β-actin为内对照，序列如下：P1 ATC ATG TTT GAG ACC TTC AAC A，P2 CAT CTC TTG CTC GAA GTC CA。扩增产物为318 bp。
RNA 逆转录及PCR方法 试剂盒及工具酶购自Promega公司和华美公司。取米粒大小组织用匀浆管研碎，采用异硫氰酸胍、酚、氯仿一步法提取组织总RNA，AMV逆转录酶42℃作用60 min合成cDNA第一链，再以此为模板，按PCR试剂盒要求进行PCR扩增，循环参数为94℃变性30 s，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸70 s，30个循环，再72 ℃ 10 min。空白对照在扩增时不加taq DNA聚合酶。
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PCR产物定量 取扩增产物10 μl行2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外光反射箱内照相。扩增条带用图象分析仪(VDS Image Sepstem)检测积分光密度(IOD)，并计算GST-π/β-actin比值(见附图)。
三、统计学方法 χ2检验P<0.05有统计学意义。
结 果
一、GST-π在非小细胞癌定量RT-PCR扩增
根据人GST-π基因序列[3]合成GST-π引物，以肺癌组织的cDNA为模板，特异性扩增223 bp基因片段为阳性表达(见附图)。为了校正组织取材的不均一性及加样量的误差，在PCR扩增中以多数组织中均有表达，或较为稳定的β-actin基因(318 bp)，为内对照来校正GST-π的表达量。扩增结果经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定，正常肺组织无扩增条带。
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附图 淋巴结转移癌GST-π的表达
1～7为淋巴结转移癌，8为正常肺组织，9为耐药细胞株
M为标准分子量DNA
二、GST-π基因在非小细胞癌中的表达
在肺癌转移组，原发灶阳性率为55%(11/20)，淋巴结转移灶阳性率为75%(15/20)，在肺癌未转移组阳性率为25%(8/32)。淋巴结转移癌的阳性表达率与未转移癌相比，P<0.05，有显著性差异。34例阳性标本的IOD值为0.32±1.19，两组标本间无显著性差异。
讨 论
谷胱苷肽S转移酶是一组多功能的药物代谢酶，正常人类GST-π基因位于11号染色体，有7个外显子和6个内含子组成，全长2.8 kb。在正常肺组织中GST-π为低表达，免疫组化标记阴性，而在许多耐药细胞株中可以高表达。在耐药相关基因检测中GST-π是最主要的标志之一[4]。
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肿瘤的转移是一个由多基因控制多步骤组成的渐变过程。本文通过RT-PCR技术显示转移至淋巴结的肺癌细胞的GST-π基因表达最高，而无淋巴结转移的肺癌细胞则表达低下，表明GST-π基因也参与侵袭转移过程。根据以上实验结果推测肿瘤转移灶与GST-π关系的可能原因：一是GST-π高表达时蛋白激酶亦呈高表达，而蛋白激酶C是一组依赖Ca2+和磷脂同工酶，在跨膜信息传递中与肿瘤的生长密切相关，这样GST-π高表达可能是癌细胞生物学行为进一步恶化的标志。二是由于肿瘤细胞在通过循环系统转移过程中，受到较高浓度的药物“筛选”，导致只有一部分原发或诱导耐药的肿瘤细胞残存，并随血液淋巴循环转移至其它器官而恶性增生。本文结果提示GST-π可能参与侵袭转移过程亦为耐药性的标志。
第一作者简介 冯久贤，男，大学本科，副主任医师。
参 考 文 献
1 冯久贤、王恩忠、李春海等。谷胱苷肽S转移酶在耐药非小细胞肺癌中的表达。中华医学杂志，1996，76：234
, 百拇医药
2 Inave T,Ishida T,Sugio K, et al. Glutathione transferase pi is a powerful indicator in chemotherapy of human lung squamous cell carcinoma.Respiration,1995,62:223
3 Kim WJ,Kakehi Y,Kinoshita H, et al. Expression patterns of multidrug resistence (MDR),multidrug resistence-associated protein (MRP),glutathione transferase-π(GST-π)and DNA topoisopmerase Ⅱ(TopoⅡ)genes in renal cell carcinomas and normal kidney.Urol,1996,156:506
4 李春海.谷胱甙肽S转移酶基因家庭在癌变中的作用.见李春海，郭亚军主编：肿瘤分子生物学研究进展.北京军事医学科学出版社，1996：103
(收稿：1998-03-06 修回：1998-06-02), 百拇医药